馮曉云++++++嚴玲玲

[摘要] 目的 分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達意義及其與淋巴瘤病理特征的相關性。 方法 選取2014年12月～2016年12月南通市腫瘤醫(yī)院收治的62例經病理學證實的淋巴瘤患者作為研究對象，分別對淋巴瘤組織及正常淋巴組織中的miR-21、miR-155、miR-210表達量進行測定，同時分析miR-21、miR-155、miR-210表達量與患者年齡、性別、免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達之間的關系。 結果 淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達量較正常淋巴組織高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。免疫分型中NK/T細胞淋巴瘤、黏膜相關淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表達量均高于DLBCL，MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表達量均高于基因重排，BCL-6蛋白中表達的miR-21、miR-155表達量均低于未表達，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。miR-21、miR-155表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達有關系，miR-210表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關系（P < 0.05）。 結論 miR-21、miR-155、miR-210參與淋巴瘤的發(fā)生與進展，miR的高表達量對淋巴瘤患者預后造成一定影響，在臨床上對miR-21、miR-155、miR-210表達情況進行測定，對后續(xù)治療及預后都具有一定的指導意義。

[關鍵詞] miR-21；miR-155；miR-210；淋巴瘤；病理特征

[中圖分類號] R733.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）08（b）-0084-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of miR-21， miR-155 and miR-210 and their correlation with the pathological features of lymphoma. Methods 62 cases of pathologically confirmed lymphoma patients from December 2014 to December 2016 in Nantong Tumor Hospital were chosen as the research objectes. Expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues and normal lymph tissues was determined respectively. And the correlation of age， gender， immunophenotype， MYC gene and B cell lymphoma 6 protein （BCL-6） with miR were also analyzed. Results The miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues were higher than those in normal lymph tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21， miR-155， miR-210 of NK/T cell lymphoma， mucosa -associated lymphoma in immunological typing were higher than those of DLBCL， miR-21， miR-155， miR-210 of normal arrangement in MYC gene were higher than those of gene rearrangement， miR-21， miR-155 of expression in BCL-6 protein were lower than those of non-expression， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21 and miR-155 were associated with immunophenotyping， MYC gene and BCL-6 protein expression in lymphoma patients， miR-210 expression was associated with immune classification and MYC gene in patients with lymphoma （P < 0.05）. Conclusion The miR-21， miR-155 and miR-210 participates in the development and progression of lymphoma， the high expression of miR may influence the prognosis of patients with lymphoma. The expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in clinic has certain guiding significance for the follow-up treatment and prognosis.

[Key words] miR-21； miR-155； miR-210； Lymphoma； Pathological characteristicsendprint

淋巴瘤是淋巴結及淋巴細胞病變疾病，屬于一種免疫細胞惡性病變[1-3]。微小RNA（miR）由高等真核生物基因組編碼而成，miR具有與靶基因mRNA堿基定向配對的功能，因此具有引導沉默復合體（RISC）將mRNA降解或阻礙mRNA翻譯的作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)，miR具有一定的特異性和時序性，其表達決定了機體組織和細胞的功能特異性，與機體生長和發(fā)育過程的多個環(huán)節(jié)存在關聯(lián)，參與機體病毒過程，且與原癌基因有一定的關聯(lián)[5]。研究發(fā)現(xiàn)，與其他惡性腫瘤相比，淋巴瘤患者體內miR-21、miR-155、miR-210表達情況存在明顯失調[6-7]。為進一步探討分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達意義及其與淋巴瘤病理特征的相關性，特對62例經病理學證實的淋巴瘤患者進行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2014年12月～2016年12月南通市腫瘤醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的62例經病理學證實的淋巴瘤患者作為研究對象，其中男33例，女29例，年齡30～75歲，平均（58.31±13.38）歲。根據(jù)淋巴瘤患者原發(fā)部位進行分類：原發(fā)胃腸道患者25例，原發(fā)頭頸部患者24例（鼻咽部11例、扁桃體9例、甲狀腺4例），原發(fā)其他部位患者13例。免疫分型：彌散性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）型患者14例，NK/T細胞淋巴瘤型患者20例，黏膜相關淋巴瘤型患者28例。MYC基因分類：正常排列23例，基因重排39例。B細胞淋巴瘤6（BCL-6）蛋白情況：表達39例，未表達23例。本研究經過我院醫(yī)學倫理委員會的批準后正式實施，所有患者及其家屬均對本研究目的、檢查方法知情同意，主動簽署了知情同意書。

1.2 方法

所有研究對象入院后抽取2 mL淋巴瘤組織及正常淋巴組織的靜脈血用樣本標本，經EDTA抗凝后30 min，離心加速提取血細胞，離心速度定在3000 r/min，時間為5 min，經分離后將離心的血液標本置于-84℃的冰箱待檢。一切準備就緒后，以let-7amiRNA作為內參基因，采用聚合酶鏈式反應技術（PCR）擴增基因組RNA，采用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測基因組RNA擴增的目標片段，測定其進行順序，進而測定miR-21、miR-155、miR-210表達水平；同時設計反應引物，以miR-21、miR-155、miR-210及l(fā)et-7a頸環(huán)RT引物進行RNA逆轉錄，先于42℃的條件下進行30 min的逆向轉錄，再將溫度升至95℃繼續(xù)進行2 min的mRNA變性，隨后將標本分別置于55、72、95℃的條件下分別進行15、30、30 s的RNA反復擴增，隨著溫度的降低將熒光信號進行采集，并計算miR-21、miR-155、miR-210的相對表達量。基因相對表達量=目的基因/內參基因。采用免疫組化法對淋巴瘤患者CD10、BCL-6、MUMI蛋白表達情況進行檢測并進行免疫分型。

1.3 評價指標

①分別測定正常淋巴組織及淋巴瘤組織中的miR-21、miR-155、miR-210表達量，比較不同組織中miR的表達情況。②分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達與淋巴瘤病理特征的相關性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，多因素相關性采用COX回歸分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達情況

淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達量均高于正常淋巴組織，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達與淋巴瘤病理特征的相關性

2.2.1 單因素相關性分析 免疫分型中NK/T細胞淋巴瘤、黏膜相關淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表達量均高于DLBCL，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表達量均高于基因重排，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；BCL-6蛋白中表達的miR-21、miR-155表達量均低于未表達，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表2。

2.2.2 多因素相關性分析 經回歸分析結果顯示，miR-21、miR-155表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達有關系，miR-210表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關系（P < 0.05）。見表3。

3 討論

近年來，受環(huán)境改變和生活方式的影響，國內外淋巴瘤的發(fā)病率逐年攀升。該病發(fā)病機制尚不明確，但隨著病情的進一步發(fā)展、惡化，給疾病治愈帶來了很大程度的困難，不僅給家庭、社會帶來巨大的經濟負擔，而且患者所承受的痛苦也是難以想象[8-9]。包括淋巴瘤在內的所有腫瘤疾病，都與原癌基因、抑癌基因及信號傳導通路等有關，研究發(fā)現(xiàn)，與其他惡性腫瘤相比，淋巴瘤患者體內miR-21、miR-155、miR-210表達情況存在明顯失調[10]。在實際臨床中對淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表達情況進行測定，不但可以指導主治醫(yī)生對患者病情進展及預后進行相應評估，還可以指導其根據(jù)患者實際情況制訂合理的治療方案[11-12]。

本研究結果顯示，淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達量明顯高于正常淋巴組織，NK/T細胞淋巴瘤及黏膜相關淋巴瘤類型的淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表達量明顯高于DLBCL，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。DLBCL、NK/T細胞淋巴瘤及黏膜相關淋巴瘤類型的區(qū)別在于免疫組化技術檢測CD3、CD10、CD20、BCL-6、MUM-1蛋白是否有表達，NK/T細胞淋巴瘤及黏膜相關淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210的高表達量與既往研究結果一致[13-14]。另外，回歸分析結果顯示，miR-21、miR-155表達量與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達有關，miR-210表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。MYC基因屬于癌基因的一種，MYC蛋白是MYC基因編碼的轉錄產物，MYC蛋白的形成密切影響著細胞周期，正常細胞處于靜止和停止分化的狀態(tài)，MYC基因無法正常表達，mRNA水平降低，導致MYC基因重排[15]。研究顯示，MYC基因重排與淋巴細胞遠處轉移有關，且中樞系統(tǒng)并發(fā)癥較為高發(fā)，影響淋巴瘤患者的預后[16]。另一方面，miR-21、miR-155表達水平偏高時，對MYC基因的正常序列造成影響，引起基因的重排，進而影響預后[17]?？梢妼α馨土龌颊哌M行miR-21、miR-155、miR-210表達量的測定，對預測患者預后有一定的臨床意義[18]。BCL-6基因編碼的蛋白有706個氨基酸共同組成，過去的研究發(fā)現(xiàn)，大部分DLBCL患者均顯示過量表達BCL-6[19]。BCL-6通過與特異的DNA序列結合，可對B細胞發(fā)育和功能起關鍵作用的基因進行轉錄調控，是調節(jié)機體生長發(fā)育的重要因子[20]。有研究稱，BCL-6異常表達與B細胞淋巴瘤具有一定的相關性，且與淋巴瘤的發(fā)展密切相關[21]。本研究顯示，BCL-6陰性表達的淋巴瘤患者miR-21、miR-155的表達量較BCL-6陽性表達的淋巴瘤患者高（P < 0.05）。BCL-6與MYC基因重排存在逆相關，BCL-6的陽性表達會引起機體內MYC基因的重排，進而對淋巴組織內漿細胞的分化造成影響；當BCL-6表達受到抑制時，細胞的增殖、分化將受到影響，細胞的凋亡機制也會發(fā)生異常，最終導致細胞惡質增殖、分化，引起淋巴瘤的遠傳轉移及進展惡化[22]。本研究證實了miR-21、miR-155、miR-210表達與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達的關系，從而提示實際臨床治療中，可對淋巴瘤患者進行miR-21、miR-155、miR-210水平的調節(jié)與控制，促進MYC基因的重排及BCL-6蛋白的陽性表達，進而控制淋巴瘤患者病情的進展，保證預后的恢復。endprint

總之，miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤組織內的表達量要高于其他淋巴組織細胞，且與淋巴瘤的發(fā)生與進展，miR的高表達量對淋巴瘤患者預后會造成一定影響，在臨床上對miR-21、miR-155、miR-210表達情況進行測定，對后續(xù)治療及預后都具有一定的指導意義。

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