李建淼，徐靖，2*，王秀娟，張國亮，李明焱，2，邵清松，潘欽霞

(1.浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司，浙江 武義 321200；2.浙江省珍稀植物藥工程技術(shù)研究中心，浙江 武義 321200；3.金華壽仙谷藥業(yè)有限公司，浙江 武義 321200；4.浙江農(nóng)林大學(xué) 中藥學(xué)科，浙江 杭州 311300)

·專題·

靈芝新品種“仙芝2號”的選育及特征特性研究△

李建淼1，徐靖1，2*，王秀娟3，張國亮3，李明焱1，2，邵清松4，潘欽霞4

(1.浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司，浙江 武義 321200；2.浙江省珍稀植物藥工程技術(shù)研究中心，浙江 武義 321200；3.金華壽仙谷藥業(yè)有限公司，浙江 武義 321200；4.浙江農(nóng)林大學(xué) 中藥學(xué)科，浙江 杭州 311300)

目的：選育靈芝新品種，促進(jìn)靈芝產(chǎn)業(yè)鏈發(fā)展。方法：品種(系)間遺傳差異分析采用ERIC-PCR擴(kuò)增技術(shù)，經(jīng)組織分離、航天誘變、品比及穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)合系統(tǒng)育種方法，從“仙芝1號”中篩選出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的靈芝新品種“仙芝2號”。結(jié)果：獲得高產(chǎn)量、抗高溫能力等方面均優(yōu)于其他品種的靈芝新品種。結(jié)論：“仙芝2號”菌株具有抗逆性強(qiáng)、孢子產(chǎn)量高、飽滿度高等優(yōu)良特性，具有良好的推廣價(jià)值與市場前景。

仙芝2號；新品種選育；優(yōu)良特性

靈芝Ganodermalucidum屬于擔(dān)子菌綱多孔菌科大型真菌，主產(chǎn)于亞洲、澳洲、非洲及美洲的熱帶及亞熱帶，分布于中國大部分省份。自古作為“扶正固本，久食長生”的傳統(tǒng)保健藥物，乃吉祥瑞草[1]?！侗静菥V目》中的詳細(xì)記載也肯定了它的作用?，F(xiàn)代研究表明，靈芝的主要有效成分靈芝多糖和靈芝三萜類化合物具有扶正固本，調(diào)節(jié)血脂、血糖，提高免疫力，抗病毒，抗腫瘤等廣泛的醫(yī)學(xué)價(jià)值[2]。靈芝孢子(靈芝菌褶中彈射出來的極其微小的卵形生殖細(xì)胞)，凝聚了靈芝的精華，具有靈芝的全部遺傳物質(zhì)和保健作用[3]。隨著人們對靈芝的深入研究，以靈芝及靈芝孢子為原料開發(fā)的保健食品深受消費(fèi)者認(rèn)可，靈芝、靈芝孢子粉的市場需求量日益增長，其產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景變得非常廣闊[4]。本研究主要以結(jié)合市場需求為主，開展靈芝的新品種選育，最終獲得孢子產(chǎn)量高、具有耐溫等高抗特征，同時(shí)又適合設(shè)施化栽培的靈芝新品種“仙芝2號”。

1 材料與方法

1.1 選育過程

2004年7月在“仙芝1號”種植區(qū)內(nèi)，發(fā)現(xiàn)有一朵在33 ℃高溫下生長良好，柄長、子實(shí)體芝蓋更大的特殊“仙芝1號”。取其子實(shí)體進(jìn)行組織分離，得20支試管種進(jìn)行培養(yǎng)并編號(“仙芝1號-1”至“仙芝1號-20”)。經(jīng)過菌絲培養(yǎng)觀察，發(fā)現(xiàn)20支試管中有11支試管種菌絲生長旺盛、菌絲致密程度高，表現(xiàn)相對優(yōu)秀。進(jìn)而將這些試管種進(jìn)行出芝試驗(yàn)觀察，在之后的研究中發(fā)現(xiàn)，菌株2號、5號、7號、15號、16號以及17號試管菌株長勢良好，具有抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)，而其他方面相對余下菌株無明顯差異。

2005年，通過我國第二十一顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星將5號菌株(“仙芝1號-5”)和7號菌株(“仙芝1號-7”)進(jìn)行航天誘變，其中“仙芝1號-5”轉(zhuǎn)接成功至10支試管當(dāng)中培養(yǎng)(“SZ 1號”至“SZ 10號”)。其中1號、4號、6號、7號、8號和10號菌絲生長較好，于同年11月將該6支菌種擴(kuò)接為生產(chǎn)種。

次年，對上述擴(kuò)接的生產(chǎn)種進(jìn)行初篩試驗(yàn)。根據(jù)埋地至出蕾天數(shù)、孢子套袋收集時(shí)間、采收時(shí)間、菌蓋平均直徑、菌蓋平均厚度、菌柄長度、子實(shí)體產(chǎn)量、靈芝孢子總產(chǎn)量、平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率等指標(biāo)綜合評價(jià)發(fā)現(xiàn)，“SZ 1號”在上述6個(gè)靈芝菌種中表現(xiàn)最優(yōu)。經(jīng)小區(qū)品比試驗(yàn)、區(qū)域性試驗(yàn)、大面積推廣性試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)其均表現(xiàn)出明顯的高產(chǎn)高抗特性，且生長發(fā)育優(yōu)勢穩(wěn)定，正式定名為“仙芝2號”(見圖1)。

圖1 “仙芝2號”菌株生長圖

1.2 菌絲生長特性分析

1.2.1 菌絲形態(tài)及平均生長狀態(tài)比較，以“滬農(nóng)1號”和“仙芝1號”為對照品，“仙芝2號”為試驗(yàn)品。將從4 ℃冰箱中取出的斜面菌株接種在25 mL平板上活化，待長滿平板后，再用3 mm無菌打孔器將圓形接種塊接種至3個(gè)25 mL平板上，并用封口膜將平板密封，于生化培養(yǎng)箱中26 ℃黑暗條件下培養(yǎng)12 d后，觀察菌絲形態(tài)、顏色、致密程度以及生長速度。

1.2.2 溫型試驗(yàn) 接種過程同1.2.1，將“仙芝2號”菌種接12皿，分別放置于25、26、27、28 ℃黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)溫度條件重復(fù)3皿。12 d后，將平板取出對比并拍照，以確定菌株合適的培養(yǎng)溫度。

1.2.3 耐高溫試驗(yàn) 隨機(jī)選取“滬農(nóng)1號”、“仙芝2號”、“仙芝1號”長勢較好的靈芝各6株，統(tǒng)計(jì)7、8、9月份其每日孢子粉產(chǎn)量，并記錄日平均溫度和最高溫度，以探究其耐高溫能力。

1.3 產(chǎn)量分析

1.3.1 小區(qū)品比試驗(yàn) 產(chǎn)量比較試驗(yàn)參照王慶武等的方法[5]，以“滬農(nóng)1號”和“仙芝1號”為對照品，比較“仙芝2號”每100 kg段木單茬干芝產(chǎn)量和每100 kg段木單茬干孢產(chǎn)量的差異。

1.3.2 區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量比較 三點(diǎn)區(qū)域性試驗(yàn)，以原始菌株“滬農(nóng)1號”、“仙芝1號”兩個(gè)品種為對照，于2008年開始進(jìn)行。比較其每100 kg段木單茬干芝產(chǎn)量和每100 kg段木單茬干孢產(chǎn)量的差異。

1.4 遺傳差異性分析

1.4.1 拮抗分析 以“滬農(nóng)1號”、“仙芝2號”以及親本“仙芝1號”為材料，將活化后的3種菌株接種在同一培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察三者的拮抗現(xiàn)象。

1.4.2 遺傳多樣性分析 采用赤芝特性擴(kuò)增及ERIC-PCR擴(kuò)增技術(shù)，分別比較“仙芝2號”、“仙芝1號”、“滬農(nóng)1號”的擴(kuò)增條帶并進(jìn)行分析，以確認(rèn)三者之間的遺傳差異性。

2 討論與分析

2.1 菌絲生長特性分析

從表1可以看出，“仙芝2號”顏色雪白，菌絲匍匐平貼，致密程度大于“仙芝1號”，小于“滬農(nóng)1號”。

表2顯示，“仙芝2號”菌絲生長速度為0.43 cm·d-1，略大于“仙芝1號”(0.41 cm·d-1)，小于“滬農(nóng)1號”(0.66 cm·d-1)。

表1 菌株的菌絲形態(tài)觀察結(jié)果

注：+++表示菌絲致密程度一般；++++表示菌絲致密程度較致密；+++++表示菌絲非常致密。

表2 靈芝菌株的菌絲生長情況統(tǒng)計(jì)

2.2 溫型比較

如表3所示，“仙芝2號”的合適培養(yǎng)溫度為25～28 ℃，與對照品及親本菌株條件一致，最合適溫度為25 ℃或26 ℃，該結(jié)果說明“仙芝2號”溫型調(diào)控機(jī)制與其他菌株差異不大。

表3 各菌株合適的培養(yǎng)溫度

2.3 耐高溫能力分析

如圖2所示，“滬農(nóng)1號”、“仙芝2號”、“仙芝1號”在不同溫度下孢子粉日均產(chǎn)量存在差異，田間觀察發(fā)現(xiàn)在大棚35 ℃溫度條件下，對照品“仙芝1號”、“滬農(nóng)1號”孢子均已停止彈射，“仙芝2號”孢子仍能進(jìn)行彈射，當(dāng)溫度38 ℃以上才停止孢子彈射。

圖2 靈芝孢子粉日均產(chǎn)量變化曲線圖

2.4 產(chǎn)量分析

根據(jù)表4可以得知，在小區(qū)品比試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果當(dāng)中，“仙芝2號”在干芝產(chǎn)量、干孢產(chǎn)量方面均高于“仙芝1號”和“滬農(nóng)1號”。其中，每100 kg段木單茬中 “仙芝2號”干芝產(chǎn)量為1.92 kg，同比“仙芝1號”高出15.1%，同比“滬農(nóng)1號”高出14.6%；仙芝2號干孢產(chǎn)量為2.12 kg，同比“仙芝1號”高出24.1%，同比“滬農(nóng)1號”高出24.1%。

表4 “仙芝2號”小區(qū)品比試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果

注：相同小寫字母表示同列數(shù)據(jù)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);不同小寫字母表示同列數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；下同。

“仙芝2號”區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果如表5所示，其在干芝產(chǎn)量、干孢產(chǎn)量上均高于其他兩個(gè)品種。在子實(shí)體干品產(chǎn)量方面，“仙芝2號”每100 kg段木單茬子實(shí)體干芝產(chǎn)量為1.98 kg，比“滬農(nóng)1號”高16.2%，比“仙芝1號”高6.6%；在孢子干品產(chǎn)量方面，“仙芝2號”折合每100 kg 段木單茬孢子干粉產(chǎn)量為2.25 kg，在同類對照品當(dāng)中也是居于最高。

表5 “仙芝2號”區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果

2.5 遺傳差異比較

拮抗試驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，“仙芝2號”、“仙芝1號”、“滬農(nóng)1號”存在明顯的拮抗現(xiàn)象。

圖3 “仙芝2號”菌絲拮抗試驗(yàn)

同時(shí)，從圖4、5 ERIC-PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)獲得的分析聚類圖中可以看出，“仙芝2號”與“滬農(nóng)1號”存在25%的相似性，“仙芝2號”與“仙芝1號”存在50%的相似性?？梢姟跋芍?號”與親本存在顯著的遺傳差異。

注：M.標(biāo)準(zhǔn)分子量(100bp ladder)；1.滬農(nóng)1號；2：仙芝1號；3.仙芝2號。圖4 ERIC-PCR電泳圖

注：1.滬農(nóng)1號；2：仙芝1號；3.仙芝2號。圖5 ERIC-PCR分析聚類圖

3 結(jié)論

近年來，以靈芝及靈芝孢子為原料開發(fā)的保健食品越來越被消費(fèi)者所認(rèn)可，人們對靈芝、靈芝孢子粉的需求量越來越大，產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景非常廣闊[6-7]。通過遺傳實(shí)驗(yàn)可以看出，“仙芝2號”是經(jīng)“仙芝1號”變異出的靈芝新品種，具有性狀穩(wěn)定、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、耐高溫等特點(diǎn)。由品比試驗(yàn)和區(qū)域性試驗(yàn)可以看出，“仙芝2號”的干芝產(chǎn)量及干孢產(chǎn)量均明顯高于“仙芝1號”、“滬農(nóng)1號”。在大棚35 ℃溫度條件下，“仙芝2號”孢子仍能進(jìn)行彈射，38 ℃以上才停止孢子彈射。因此，在浙江地區(qū)夏季高溫氣候條件下，“仙芝2號”具有更好的抗高溫能力，并且在高溫條件下仍能產(chǎn)孢，優(yōu)于其他品種。同時(shí)“仙芝2號”抗污染能力較強(qiáng)，成品率高。經(jīng)推廣單位反饋，“仙芝2號”與常規(guī)品種相比，栽培抗逆、抗雜菌能力較強(qiáng)，木霉、青霉等雜菌發(fā)生少。

綜上所述，從本研究的2個(gè)對照品種中綜合各類因素，“仙芝2號”菌株具有抗逆性強(qiáng)、孢子產(chǎn)量高、飽滿度高等特點(diǎn)，具有良好的推廣價(jià)值與市場前景。

[1] 卯曉嵐.中國蕈菌[M].北京：科學(xué)出版社，2009：624-625.

[2] 朱惠照，鄭化先，王瑛，等.靈芝品種仙芝1號的選育[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014(8)：1163-1165.

[3] 程齊來, 楊韶平, 夏侯國論. 原子吸收法測定靈芝孢子粉中微量元素含量[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2007, 18(4): 878-879.

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[5] 王慶武，蘭玉菲，安秀榮，等.靈芝品種對比試驗(yàn)[J].食用菌，2010(5)：1-2.

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[7] 李明焱,王曉彤,徐靖.靈芝全產(chǎn)業(yè)鏈關(guān)鍵技術(shù)的研究與產(chǎn)品開發(fā)[J].食藥用菌,2016,24(6):358-361.

BreedingofGanodermalucidumvar.“Xianzhi2”andItsCharacteristics

LIJianmiao1，XUJing1，2*，WANGXiujuan3，ZHANGGuoliang3，LIMingyan1，2，SHAOQingsong4，PANQinxia4

(1.ZhejiangShouxianguPharmaceuticalCo.Ltd，Wuyi321200，China；2.ZhejiangEngineeringResearchCenterofRarePlantMedicine，Wuyi321200，China；3.JinhuaShouxianguPharmaceuticalCo.Ltd.，Wuyi321200，China；4.DepartmentofTraditionalChineseMedicine，ZhejiangA&FUniversity，Hangzhou311300，China)

Objective：To select new varieties ofGanodermalucidumand promote the development ofG.lucidumindustry chain.Methods：Varieties analysis of genetic differences between amplified by ERIC-PCR technology，through tissue isolation，space mutation，ratio of products and stability test，combined with the system of breeding methods，from “Xianzhi 1” screened “new Ganoderma species with high yield and good quality are 2”.Results：The aspect of obtain high yield，high temperature resistance is better than other varieties ofG.lucidum.Conclusion：“Xianzhi 2 with superior characteristics including strong resistance，high spore yield，high plumpness，has promotion value and good market prospects.

Xianzhi 2；breeding of new variety；superior characteristics

2017-02-04)

浙江省中藥材新品種選育重大科技專項(xiàng)(2016C02058)；浙江省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2017C02011)

*

徐靖，工程師，研究方向：藥用植物栽培與育種；Tel：(0579)87980003，E-mail：37117894@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.3.008