王 平 劉曉暉 劉國(guó)輝

深圳市第三人民醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科（廣東 深圳，518000）

慢性丙型肝炎患者外周血中CD4＋T調(diào)節(jié)性細(xì)胞與抗病毒療效的關(guān)系

王 平 劉曉暉 劉國(guó)輝

深圳市第三人民醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科（廣東 深圳，518000）

目的：探析慢性丙型病毒性肝炎患者（CHC）外周血中CD4＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與抗病毒療效之間的關(guān)系。方法：選擇2014年5月－2016年3月期間我院收治的125例CHC患者為研究對(duì)象，再選擇同期來(lái)我院體檢的90例健康者為對(duì)照，分別采集患者治療前后的外周血，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)外周血中的CD4＋細(xì)胞百分比進(jìn)行檢測(cè)；同時(shí)檢測(cè)肝功能指標(biāo)和HCV-RNA，比較兩組的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：治療前與對(duì)照組相比，觀察組患者的TBiL、ALT、AST以及HCV-RNA定量均較高，組間比較差異明顯（P＜0.05）；同時(shí)，治療前后觀察組的CD4＋、TBiL、ALT、AST以及HCV-RNA定量比較有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）；但是PLT計(jì)數(shù)對(duì)比無(wú)差異（P＞0.05）。結(jié)論：臨床上給予慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治療，能夠使肝臟損害減少，治愈率提高，并且外周血中CD4＋T細(xì)胞可以作為判斷治療效果和預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

CD4＋T細(xì)胞；抗病毒治療；慢性丙型病毒性肝炎

慢性丙型病毒性肝炎（CHC）患者往往會(huì)出現(xiàn)持續(xù)、反復(fù)感染，如果治療不及時(shí)，容易出現(xiàn)諸多并發(fā)癥如原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝硬化等，甚至危及患者的生命［1，2］。當(dāng)前臨床上在對(duì)（對(duì)照組）CHC治療時(shí)，抗病毒是常用的一種方法，我們根據(jù)慢性丙型病毒性肝炎治療指南，選取1b型CHC患者給予干擾素聯(lián)合劉巴韋林抗病毒治療48周，其療效評(píng)價(jià)與T細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)［3］。因此，本文對(duì)外周血CD4＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞進(jìn)行了檢測(cè)，探討其對(duì)CHC患者抗病毒療效預(yù)估的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇我院2014年5月－2016年3月期間收治的（CHC）患者125例為研究對(duì)象（觀察組），再選擇同時(shí)期健康者90例作為對(duì)照組（對(duì)照組）。對(duì)照組中50例為男性、40例為女性，年齡24～74歲，平均（48.5±15.6）歲；觀察組年齡22～73歲，平均（48.3±15.5）歲，其中52例為女性、73例為男性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合CHC診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果確診；②沒(méi)有其他嚴(yán)重并發(fā)癥、合并癥或者內(nèi)分泌性疾病，且沒(méi)有服用過(guò)容易損害肝臟的藥物；③6個(gè)月內(nèi)沒(méi)有進(jìn)行過(guò)免疫治療，且未服用抗病毒藥物；④經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)；⑤患者及家屬知情，且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并內(nèi)分泌性疾病或者重要器官衰竭性疾病者；②感染其他肝炎病毒者；③合并肝臟毒性藥物使用史、嗜酒史以及自身免疫病史者；④近期接受免疫治療或者抗病毒治療者。兩組患者在性別、年齡方面對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 所有研究患者均于入組前清晨采血，每人采靜脈血2ml送檢。

1.2.2 檢測(cè)CD4＋百分比 采集100μl外周血，在室內(nèi)溫度下放置30min，以2500r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行10min離心處理后，將雜質(zhì)去除，調(diào)配成106外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）溶液，然后將0.5ml紅細(xì)胞裂解液加入，均勻混合后，進(jìn)行1次洗滌，標(biāo)記后在4°C環(huán)境下放置30min，經(jīng)固定，破膜后，運(yùn)用PE抗人Foxp3試劑進(jìn)行25min孵育后，選擇美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特Gallios流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)HCV RNA 運(yùn)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，均勻混合核酸提取液250μl與血清標(biāo)本100μl，在室內(nèi)溫度下放置10min后，將三氯甲烷80μl加入，進(jìn)行20s震蕩，再次放置在室溫下，掌握好時(shí)間，一般為8min，以2500r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行10min離心處理后，將雜質(zhì)去除，將400μl預(yù)冷的乙醇加入進(jìn)行1次洗滌，再進(jìn)行10min離心處理，將雜質(zhì)去除，選擇美國(guó)PE公司的5700型DNA擴(kuò)增儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 檢測(cè)肝功能指標(biāo) 選擇西門子生化儀（ADVIA2400），嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求，對(duì)總膽紅素（TBiL）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 分別觀察兩組的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，包括CD4＋T細(xì)胞百分比、TBiL、ALT、AST以及HCV RNA定量等，并且記錄觀察組治療前后的CD4＋、PLT計(jì)數(shù)、TBIL、ALT、AST以及HCV RNA定量等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，其中計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，運(yùn)用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間AST、ALT以及TBiL比較，以P＜0.05為差異明顯。

2 結(jié)果

2.1 兩組人員治療前各項(xiàng)臨床指標(biāo)見表1。

表1 兩組人員治療前臨床各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比 （±s）

表1 兩組人員治療前臨床各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比 （±s）

CD4＋（%） TBiL（mmol/L）ALT（U/L）AST（U/L）HCV RNA定量（logIu/ml ）對(duì)照組（n＝90）3.98± 1.05 12.72± 5.4 25.1± 15.3 22.1± 14.50觀察組（n＝125）4.6± 2.31 t值 5.093 6.092 9.731 5.996 8.724 P值12.57± 3.77 14.35± 3.48 118.9± 50.23 67.5± 30.41＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.2 觀察組患者治療前后及隨訪24周時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表2。

觀察組治療前后及24周隨訪時(shí)的HCV RNA定量、CD4＋T細(xì)胞百分比TBiL、ALT以及AST等比較，差異有顯著性意義（P＜0.05）；但是PLT計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 觀察組治療前后及隨訪24周時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)比較 （±s）

表2 觀察組治療前后及隨訪24周時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)比較 （±s）

與治療前比較，*P＜0.05.

不同時(shí)段CD4＋（%）PTL計(jì)數(shù)（×109）TBIL（mmol/L）ALT（U/L）AST（U/L）HCV-RNA定量logIu/ml治療前12.57± 3.772.31治療結(jié)束時(shí)157.00± 88.00 14.35± 3.48 118.89± 50.23 67.50± 30.44 4.60± 0.76± 1.55隨訪24周8.98±*2.71 55.00± 76.00 13.02± 3.01 104.00± 30.25 43.45± 18.79 3.45±*2.44 162.00± 74.00 12.07±*1.14 28.56±*15.46 11.31± 12.09*0.11± 0.05*

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，患者感染HCV后，其免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果和臨床癥狀存在著一定的差別，其原因與HCV自身特性、細(xì)胞免疫應(yīng)答、白細(xì)胞抗原（HLA）等諸多因素有關(guān)［4、5］。CHC患者因?yàn)樽陨鞨LA-1限制，對(duì)HCV各類抗原表位的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）應(yīng)答弱，甚至不能應(yīng)答，無(wú)法清除體內(nèi)HCV病毒，在一定程度上增加了臨床治療難度［6，7］。

有報(bào)道顯示，在CTL免疫應(yīng)答中，CD4＋T細(xì)胞作為比較重要的一個(gè)調(diào)控細(xì)胞，與HCV的發(fā)生和發(fā)展有著密不可分的聯(lián)系，并且T細(xì)胞作為比較重要的人體免疫細(xì)胞，其免疫無(wú)能性和免疫抑制性均較強(qiáng)，其在IL-2濃度不高的情況下不能產(chǎn)生反應(yīng)，但是在IL-2高濃度情況下，容易經(jīng)TCR增殖或者激活，對(duì)患者體內(nèi)CD4＋T細(xì)胞中的IL-2轉(zhuǎn)錄和表達(dá)進(jìn)行抑制，對(duì)IL-2活化和增殖產(chǎn)生干擾，并且還能對(duì)CD8＋T細(xì)胞產(chǎn)生直接作用，對(duì)其殺傷效用進(jìn)行有效抑制［8，9］。

臨床研究資料表明，相比較正常健康人群而言，CHC患者外周血內(nèi)的CD4＋T細(xì)胞含量明顯升高，如果將外周血內(nèi)的CD4＋T細(xì)胞去除，能夠增強(qiáng)HCV特異性反應(yīng)，并且CHC患者外周血內(nèi)的T細(xì)胞含量與疾病嚴(yán)重程度呈正比關(guān)系，對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行分離后，發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞具有誘導(dǎo)HCV形成抗原特異性的能力，能夠?qū)CV感染的慢性化發(fā)展產(chǎn)生直接作用［10，11］。

本次研究結(jié)果，提示抗病毒治療可以使CHC患者的傷害減輕，治愈率提高，避免加重肝臟損害［12］。有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)，與無(wú)應(yīng)答患者相比，有應(yīng)答患者的CD4＋T細(xì)胞、ALT、AST以及HCV RNA定量均較低，說(shuō)明CHC患者的體內(nèi)HCV RNA處于不斷復(fù)制過(guò)程，對(duì)CD4＋T細(xì)胞的活化和增殖起到積極的誘導(dǎo)作用，升高患者體內(nèi)的CD4＋T細(xì)胞百分比，使患者機(jī)體免疫不能將HCV病毒清除，從而導(dǎo)致HCV慢性轉(zhuǎn)化［13，14］。

此外，抗病毒治療在一定程度上能夠?qū)D4＋T細(xì)胞百分比進(jìn)行抑制，使機(jī)體肝功能和免疫清除得到明顯改善，減輕患者的臨床癥狀，從而達(dá)到治療目的［15］。需要注意的是，因?yàn)榛颊叽嬖趥€(gè)體差異性，在抗病毒治療中，其CD4＋T細(xì)胞百分比下降程度也存在著一定的差別，并且停藥后患者CD4＋T細(xì)胞恢復(fù)上升和維持水平也不同，所以應(yīng)該根據(jù)患者實(shí)際情況，制定個(gè)性化治療方案，有效預(yù)防復(fù)發(fā)［16］。

綜上所述，在CHC患者的臨床診斷和治療中，外周血中的CD4＋T細(xì)胞能夠作為判斷疾病和療效的重要指標(biāo)之一，并且根據(jù)患者病情，及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療，可以減少肝臟損害，提高治愈率，改善預(yù)后，值得推廣。

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The relationship between regulatory T cells in peripheral blood CD4＋and antiviral therapy in patients w ith chronic hepatitis C

WANG Ping，LIU Xiao-hui，LIU Guo－h(huán)ui.Departmentof Integrated traditional and westernmedicine，The third people hospitial of Shenzhen（Shenzhen Guangdong，518000）China

Objective：To discuss The relationship between regulatory T cells in peripheral blood CD4＋and antiviral therapy in patients with chronic hepatitis C.M ethods：125 cases of chronic hepatitis C patients were admitted to our hospital as the research object from May 2014 to March 2016，and then 90 cases ofhealthy peoplewere selected at the same time as the control group.the peripheral blood of patients before and after treatmentwere collected and the percentage of CD4＋cell in peripheral blood cells was detected.At the same time，liver function and HCV-RNA also were detected and compared between the two groups.Results：Compared with control group，the quantitative of TBIL，ALT，AST and HCV-RNA were significanthigher in observation group（P＜0.05）；At the same time，the quantitative of CD4＋，TBIL，ALT，AST and HCV-RNA had statistical significance before and after treatment in observation group（P＜0.05）；but therewas no difference in PLT（P＞0.05）.Conclusion：When Patients with chronic hepatitis C were given antiviral treatment，it would reduce liver damage，improve the cure rate.and CD4＋cells in peripheral blood could be used as an important index to judge the curative effect and prognosis.

peripheral blood；antiviral；chronic hepatitis C

2016－12－08 編輯：陳盛鐸）

10.3969/j.issn.1005-0264.2017.03.007