張思依

湖北中醫(yī)藥大學針灸骨傷學院2014級研究生 湖北武漢 430061

針刺對高脂飲食誘導肥胖小鼠脂肪炎癥的影響

張思依

湖北中醫(yī)藥大學針灸骨傷學院2014級研究生 湖北武漢 430061

目的：觀察針刺對高脂飲食誘導的肥胖小鼠脂肪炎癥的影響。方法：將40只雄性C57BL/6小鼠隨機抽取10只做為正常組，普通飼料喂養(yǎng)。其余30只給予高脂飼料喂養(yǎng)16周，16周后形成肥胖模型。將造模成功的小鼠隨機分為3組，分別為模型組、非穴位組、穴位組，每組各10只小鼠，繼續(xù)給予高脂飲食喂養(yǎng)8周。正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)8周。穴位組選取小鼠特定穴進行針刺，非穴位組選取尾部非穴位針刺，每日一次，每次針刺15min，連續(xù)治療8周。末次治療后第二天紀錄各組小鼠體質量; 取材后，免疫組化法檢測小鼠脂肪中白細胞介素1β（IL-1β）的表達情況。結果：16周后給予高脂飲食的小鼠體質量較給予普通飼料的小鼠明顯上升（P＜0.05）。治療8周后穴位組小鼠較正常組體質量明顯下降（P＜0.05），IL-1β的表達明顯下。非穴位組小鼠體質量和IL-1 β的表達下降不明顯（P＞0.05）。結論：針刺穴位可以改善肥胖小鼠脂肪的炎癥反應。

針刺；肥胖；炎癥因子；小鼠

肥胖（obesity）是一種由多種因素引起的慢性代謝性疾病，其典型表現是脂肪在內臟，皮下組織中大量累積。隨著社會的發(fā)展，飲食結構的變化，肥胖作為一個嚴重的社會問題，已廣泛引起人們的注意。而研究者對于肥胖的機制研究也更加深入，近年來研究顯示，肥胖是一種慢性炎癥性疾病，脂肪組織中的 caspase1對于肥胖的發(fā)展有至關重要的影響［1］,caspase1是一種半胱氨酸蛋白酶,會被炎癥小體激活，并促進下游 IL-1β的成熟和分泌［2］。我們通過針刺干預高脂飲食誘導的肥胖C57BL/6小鼠，觀察針刺對脂肪組織中的IL-1β的含量的影響，探討針刺通過改善脂肪炎癥來改善肥胖的作用。

1 材料與方法

1.1 動物

8周齡SPF級C57BL／6雄性小鼠40只，小鼠體質量（22±2）g，購于南京大學-南京生物醫(yī)藥研究所。動物許可證：SYXK（蘇）2014-0002。

1.2 飼料

普通飼料購于華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心，高脂飼料購于江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，型號MD12032（45%fat Kcal%）

1.3 主要材料與試劑

戊巴比妥鈉（sigma）；SP檢測試劑盒、DAB試劑盒（北京中衫金橋生物技術有限公司）； IL－1β一抗（santa cruz）；中性樹膠（北京索萊寶科技有限公司）；熒光顯微鏡（日本尼康）；針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；蘇木素、二甲苯、乙醇（武漢谷歌生物有限公司）

1.4 動物模型制備及分組

40只小鼠普通飼料適應性喂養(yǎng)1周后，隨機抽取10只做為正常組，用于空白對照，其余30只給予高脂飲食16周， 16周后形成肥胖模型［3］，當高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠體質量明顯高于正常組（P＜0.05）為造模成功。將造模成功的小鼠隨機分為3組，分別為模型組、非穴位組、穴位組，每組各10只小鼠，繼續(xù)給予高脂飲食喂養(yǎng)8周。正常組繼續(xù)給予正常飼料喂養(yǎng)8周。所有小鼠在同一動物房飼養(yǎng)，溫度（22±2）°C ，相對濕度（50±10）%，12小時明暗交替，自由進水進食，每天更換飲水，墊料。定時清潔鼠籠和飲水器。

1.5 干預方法

針刺治療組采用標本配穴法用0.5寸毫針(1cm),在小鼠的關元穴斜刺1.5mm,雙側足三里穴直刺3mm，胰俞斜刺3mm。留針10min。隔天一次，治療8周。針刺非穴位組取小鼠尾部距離根部 0.5 cm 和 1 cm 各一點，用0.5寸毫針，45度進針2～3mm。第12周開始針刺治療，連續(xù)治療8周。

1.6 取材

治療結束后，給予小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉（0.1ml/10g）麻醉，眼眶采血，在冰上取附睪脂肪。用多聚甲醛固定組織后包埋，切片，備用。

1.7 觀察與檢測

1.7.1 體重檢測

用電子稱稱量各組小鼠16周和24周后的體質量。

1.7.2 IL-1β檢測

用免疫組化檢測各組小鼠附睪脂肪組織中IL-1β的表達水平。

1.8 統(tǒng)計學方法

采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方法分析，方差齊用LSD分析，方差不齊用Dunnett T3分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 體質量

表1 各組小鼠體質量（x ± s, g ）

如表1所示，16周后，與正常組比較，模型組小鼠體質量明顯上升（P＜0.05）,穴位組體質量明顯上升（P＜0.05），非穴位組體質量明顯上升（P＜0.05），高脂飼料持續(xù)16周喂養(yǎng)可成功形成肥胖小鼠模型；24周后，與模型組比較，穴位組體質量明顯降低（P＜0.05），非穴位組體質量下降不明顯。

2.2 脂肪組織IL－1β的表達

圖1 各組小鼠脂肪組織IL－1β的表達

如圖1所示，與正常組比較，模型組小鼠脂肪組織中IL-1β的表達明顯升高。與模型組比較，穴位組脂肪組織中 IL-1β的表達明顯降低，非穴位組脂肪組織中IL-1β的表達下降不明顯。

3 討論

肥胖是一種復雜的疾病，是誘發(fā)胰島素抵抗、2型糖尿病的危險因素之一，與代謝性疾病、心血管疾病以及慢性炎癥性疾病等密切相關［4］。多項調查顯示［5］［6］，肥胖的發(fā)病率逐年攀升,已成為不容忽視的社會問題。長期營養(yǎng)過剩的條件下，脂肪組織為應對高營養(yǎng)水平會改變其形態(tài)，功能，數量，而后肥大增生［7］，其功能失調以及引起脂肪的炎癥反應，進而引起其他組織如肝臟，骨骼肌的炎癥，誘導一系列疾病。

本實驗，我們通過高脂飲食誘導小鼠肥胖模型。中醫(yī)學認為肥胖的病機有痰濕、氣虛、陽虛、血瘀等，因此我們采用標本配穴法，選取關元、足三里、胰俞等穴位，對肥胖小鼠進行特定穴位針刺治療，以固本培元，和胃化濕，達到減肥和改善炎癥水平的作用。IL-1β是一個主要的炎癥細胞因子，主要由巨噬細胞產生，與肥胖導致的胰島素抵抗密切相關［8］。還有研究表明［9］［10］，無論是在巨噬細胞或是脂肪細胞中，都有 IL-1β的產生，從而降低肥胖患者的胰島素敏感性，糖耐量，進而誘導胰島素抵抗的發(fā)生和加重 2型糖尿病。研究發(fā)現［11］，在人類脂肪細胞和小鼠3T3-L1細胞中，IL-1β影響葡糖糖的轉運和脂肪酸的攝取。肥胖時出現的炎癥反應的一個重要特征在于它被啟動的最初主要位于脂肪組織，故我們檢測脂肪組織中I L-1β的表達來檢測炎癥水平。研究發(fā)現模型組小鼠體質量較正常組明顯上升，脂肪組織中 IL-1β的表達明顯上升。穴位組小鼠較模型組體質量明顯下降，脂肪組織 IL-1β的表達明顯降低。非穴位組小鼠較模型組體質量和脂肪組織 IL-1β的表達有所下降，但變化不明顯。提示針刺特定穴位可以改善肥胖和肥胖時脂肪組織的炎癥狀態(tài)。大量研究表明，針刺對肥胖小鼠具有良好的減肥效果［12］［13］［14］。針刺干預肥胖可能與糾正脂代謝紊亂有關，也可能直接抑制炎癥因子或通過降低血糖水平減輕體重，解除糖脂毒性作用［15］。針刺對于肥胖的治療作用可以說時毋庸置疑，而炎癥與肥胖密切相關，炎癥因子水平在肥胖患者脂肪組織中表達水平明顯上升，但具體通過何種途徑使得炎癥因子水平上調尚不清楚。但抑制 IL-1β的產生可能是治療肥胖和胰島素抵抗的一個新靶點，對于肥胖和炎癥關系的新認識可能為防治肥胖提供新途徑，針刺特定穴可以改善炎癥從而調節(jié)肥胖及其并發(fā)癥顯示出了良好的前景。

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Effects of Acupuncture on Inflammation of Liver in Mice on a Chronic High-Fat-Diet

Objective To observe the effects of acupuncture on inflammation of eWAT in mice on a chronic high-fat diet. Methods 40 male C57BL/6 mice were randomly divided into the control group(n=10), others were fed for 16 weeks a high-fat-diet. After 16 weeks, the model mice were divided into three group: model group(n=10)、sham acupuncture group(n=10)、acupuncture group(n=10). The mice of acupuncture group to acupuncture on “Guanyuan”、“Zusanli” of both sides、“Yishu” of both sides with 15 minutes. The mice of sham acupuncture group to acupuncture tail. After 8 weeks of treatment, at the second day of the last acupuncture , to observe body weight. IL-1β expression of mice were determined with IHC. Results Compared with the control group, there’s an increase in body weight in the mice on a chronic high-fat diet; Compared with the model group, there’s a decrease in body weight from the acupuncture group (P＜0.05), and in the IL-1β level; There’s no significant differency on the results of body weight and the IL-1β level between the sham acupuncture group and the model group (P＞0.05). Conclusions Acupuncture can improve inflammation of eWAT in obese mice.

Acupuncture; Obesity; Inflammation; Mice

R711.3

A

1672-5018（2017）01-023-02