盧 煬，李 林△，高斐宏，王慧穎，尤曉苗，李小薇(. 內蒙古醫(yī)科大學，呼和浩特 0000； . 天津中醫(yī)藥大學，天津 30093)

【實驗研究】

蒙藥十三味紅花密訣丸對過敏性鼻炎大鼠治療作用的研究?

盧 煬1，李 林1△，高斐宏1，王慧穎1，尤曉苗1，李小薇2
(1. 內蒙古醫(yī)科大學，呼和浩特 010010； 2. 天津中醫(yī)藥大學，天津 300193)

目的：觀察蒙藥十三味紅花密訣丸對AR大鼠血清中組胺、白三烯的影響，探討其治療AR的作用機制。方法：建立卵清蛋白誘導性過敏性鼻炎大鼠模型，并設正常對照組、模型對照組、鼻炎康組(409 mg·kg-1)、十三味紅花密訣丸高劑量組(1100 mg·kg-1)、十三味紅花密訣丸中劑量組(550 mg·kg-1)、十三味紅花密訣丸低劑量組(275 mg·kg-1)，連續(xù)喂藥21 d后，HE染色觀察大鼠鼻黏膜病理切片，用酶聯免疫法(ELISA)測定大鼠血清組胺與白三烯的含量。結果：蒙藥各劑量組和鼻炎康組行為學評分均得到有效改善，通過組間比較，蒙藥高劑量組、中劑量組行為學改善程度明顯優(yōu)于低劑量組和鼻炎康組；通過HE染色觀察，2種藥物均能不同程度地改善鼻黏膜的充血、水腫、炎性損傷；蒙藥各劑量組與鼻炎康組還能夠顯著改善AR大鼠血清中組胺、白三烯的水平，組間比較差異有統(tǒng)計學意義。結論：十三味紅花密訣丸不但能顯著改善過敏性鼻炎的典型癥狀，也能改善AR大鼠血清中組胺、白三烯水平，治療過敏性鼻炎療效確切。

蒙藥；十三味紅花密訣丸；卵清蛋白誘導性鼻炎；過敏性鼻炎；組胺；白三烯

過敏性鼻炎西醫(yī)學又稱之為變應性鼻炎(allergic rhinitis,AR)，是以 IgE為主導、多種免疫活性細胞和細胞因子參與的非感染性I型變態(tài)反應性疾病[1]。其典型癥狀是鼻塞、鼻癢，反復發(fā)作的連續(xù)噴嚏以及流清涕。過敏性鼻炎現已成為常見的鼻科疾病，被列為21世紀重點研究和防治的三大疾病之一[2]。蒙藥十三味紅花密訣丸，蒙語叫做敖必德森古日古木-13，首見于《醫(yī)訣補遺》，是蒙醫(yī)常用方劑，臨床用于治療高血壓性、神經性頭痛、過敏性鼻炎等效果良好。本實驗通過用十三味紅花密訣丸治療卵清蛋白(OVA)誘導的過敏性鼻炎大鼠，對十三味紅花密訣丸的療效進行研究，并對其藥物組成進行簡單探討，現報道如下。

1 材料

1.1 實驗動物

清潔級成年Wistar大鼠90只，雌雄各半，體質量(200±20)g，飼養(yǎng)室溫(23±2)℃、相對濕度(50±5)%條件下，每籠6只，保持室內安靜，適應性喂養(yǎng)1周后進行實驗，由內蒙古大學動物實驗中心提供(合格證號SCXK(蒙2002-0001))。

1.2 藥物、試劑及儀器

十三味紅花密訣丸(敖必德森-古日古木-13，內蒙古民族大學附屬醫(yī)院蒙藥制劑室，批號哲衛(wèi)準字9604-12，每日2次，每次2 g)，鼻炎康片(佛山德眾藥業(yè)有限公司，批號國藥準字Z20023063，每日3次，每次4片)，卵清蛋白(OVA，SIGMA公司，批號A5378-250MG)，組胺和白三烯 ELISA試劑盒(武漢基因美生物科技有限公司，批號20130810)，氫氧化鋁(Al(OH)3，國藥集團化學試劑有限公司，批號20130814)，生理鹽水(四平巨能藥業(yè)，生產批號A13091322)，水合氯醛(天津市福晨化學試劑廠，批號201121017)，DAB顯色試劑盒(邁新試劑，產品編號DAB-0031/1031)，PBS緩沖液(邁新試劑)，檸檬酸緩沖液(邁新試劑)，電子天平(梅特勒-托利多 PL403)，光學顯微鏡(CX21型 OLYMPUS公司)，中藥粉碎機(型號LX-08B)，石蠟包埋機(德國LEIKA，型號EG1150H+C)，醫(yī)用微波爐(G80F23CSP-Q5)。

2 方法

2.1 AR大鼠模型的建立及分組[3-4]

大鼠造模分為腹腔注射致敏與鼻腔滴注激發(fā)兩個階段。腹腔注射致敏是將卵清蛋白(OVA)0.3 mg與氫氧化鋁[Al(OH)3]30 mg溶于1ml生理鹽水中制成懸濁液。除空白組外，其他大鼠均進行腹腔注射，2 d 1次共7次；空白組僅以氫氧化鋁[Al(OH)3]30 mg+生理鹽水1ml混勻后腹腔注射，2 d 1次共7次。鼻部滴注激發(fā)是全身抗原攻擊完成后，以0.5%OVA+生理鹽水混合液鼻腔滴注，每側鼻孔滴加20 μL，每日2次共7 d。空白組只用生理鹽水滴注。于末次鼻部滴注激發(fā)后30 min內觀察動物搔鼻、噴嚏及流涕等行為。

根據鼻部癥狀評分標準[5]制定計分方法：鼻癢：輕度：輕擦鼻幾次，1分；重度：到處摩擦，抓撓鼻面部不止，2分;噴嚏：1～3個1分，4～10個2分，11個以上3分;鼻涕：流至前鼻孔1分，超過前鼻孔2分，流涕滿面3分。采用疊加量化計分法，總分多于5分則表示造模成功。

根據癥狀評分造模成功率為80%。取60只造模成功大鼠隨機分為模型、蒙藥高劑量、蒙藥中劑量、蒙藥低劑量與鼻炎康5組，其余造模未成功大鼠作為空白組共6組。

2.2 給藥方法

所有藥物灌胃前均用中藥粉碎機打成細粉，并用生理鹽水溶解?？瞻捉M正常喂食、給水,模型組正常喂食、給水,蒙藥十三味紅花高劑量組給予十三味紅花密訣丸懸濁液(1100 mg·kg-1)灌胃，蒙藥中劑量組給予十三味紅花密訣丸懸濁液(550 mg·kg-1)灌胃，蒙藥低劑量組給予十三味紅花密訣丸懸濁液(275 mg·kg-1)灌胃，鼻炎康組給予鼻炎康懸濁液(409 mg·kg-1)灌胃。各治療每天灌胃1次，連續(xù)灌胃21 d。

2.3 標本采集

血清：于末次灌胃后1 h內將各治療組大鼠用10%水合氯醛腹腔麻醉，抽取右心室血4ml，室溫下凝固2 h，置于3000 r/min的離心機中15 min，將得到的血清轉至新管并置于4 ℃冰箱內保存待測。

組織標本：采集靜脈血后將大鼠處死剝離上頜骨，沿鼻中隔兩上沿剪開，取完整鼻中隔及下鼻甲，剝取鼻黏膜組織放入10%甲醛溶液中固定24 h，常規(guī)切片并HE染色，在顯微鏡下觀察鼻黏膜組織病理學的變化。

2.4 指標檢測

2.4.1 大鼠癥狀觀察 觀察大鼠搔鼻、噴嚏、流涕等過敏性鼻炎的典型癥狀。

2.4.2 大鼠鼻黏膜病理切片觀察 在CX21型奧林巴斯顯微鏡下(200倍)觀察鼻黏膜病理切片的病理改變。

2.4.3 對大鼠血清組胺、白三烯含量的測定 采用酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒進行檢測，具體步驟參考試劑盒說明書。

2.5 統(tǒng)計學方法

3 結果

3.1 大鼠癥狀觀察

以模型組大鼠鼻部癥狀記分作為治療前結果，以治療組模型大鼠鼻部癥狀記分作為治療后結果，分別記錄第7、14、21天的行為學評分并進行比較。

組內比較，給藥7 d后，蒙藥各劑量組和鼻炎康組大鼠行為學評分均有所降低，與給藥前比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；給藥14 d后，蒙藥各劑量組和鼻炎康組大鼠行為學評分繼續(xù)降低，與給藥7 d后行為學評分比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；給藥21 d后，蒙藥各劑量組和鼻炎康組大鼠行為學評分與給藥14 d后行為學評分比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

組間比較，統(tǒng)計并比較各治療組給藥 7、14、21 d的行為學評分，發(fā)現各治療組行為學評分均有不同程度改善，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中蒙藥高劑量組、中劑量組改善明顯，與低劑量組、鼻炎康組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1顯示，十三味紅花密訣丸與鼻炎康均能夠有效緩解過敏性鼻炎的典型癥狀，但十三味紅花密訣丸在改善過敏性鼻炎癥狀方面藥效優(yōu)于鼻炎康。

表1 給藥后第1、7、14、21天大鼠行為評分比較分)

注：與空白組比較：△P<0.05；與模型組同時間點比較：*P<0.05；與給藥前比較：▽P<0.05；與本組給藥后7 d比較：#P<0.05；與本組給藥后14 d比較：▲P<0.05；與低劑量組、鼻炎康組同時間點比較：aP<0.05

3.2 鼻黏膜病理學觀察

圖1顯示，鏡下可見空白對照組大鼠鼻黏膜層結構正常，僅見個別嗜酸性粒細胞(EOS)；模型組大鼠鼻黏膜上皮部分被破壞，可見大量EOS細胞及其他炎性細胞浸潤；蒙藥高劑量組鼻黏膜上皮部分完整，鏡下可見少量EOS細胞；蒙藥中、小劑量組鼻黏膜鏡下可見結構破壞，可發(fā)現壞死，黏膜下層可見許多EOS細胞，小劑量組更為顯著；鼻炎康組鼻黏膜上皮部分完整，結構基本完整，可見少量EOS細胞。

圖1 各組大鼠鼻黏膜病理切片圖(HE×200)注：A.正常組；B.模型組；C.蒙藥高劑量組；D.蒙藥中劑量組；E.蒙藥低劑量組；F.鼻炎康組

3.3 大鼠血清組胺、白三烯表達比較

表2顯示，造模后模型組大鼠血清中組胺、白三烯指標明顯上升，與空白組大鼠比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；灌胃21 d后，蒙藥各劑量組、鼻炎康組大鼠血清中組胺、白三烯指標水平較模型組明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與空白組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；且各治療組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2 蒙藥十三味紅花密訣丸對AR大鼠血清組胺、白三烯水平的影響

注：與空白組比較：△△P<0.01；與模型組比較：*P<0.05

4 討論

組胺是過敏性鼻炎發(fā)生過程中的一種重要炎性介質，是由嗜堿粒細胞和肥大細胞脫顆粒后產生，可作用于H1受體，從而引起血管擴張、血管壁通透性增高、腺體分泌增多等癥狀。白三烯也是過敏性鼻炎發(fā)生過程中的一種重要炎性介質，主要由嗜酸粒細胞和巨噬細胞合成與釋放[6]。 白三烯是目前已知的最強氣道刺激物，較組胺強100～1000倍，可促進氣道收縮。在炎性反應中，可促進黏液的分泌、水腫和增加血管的通透性，進而促進鼻腔黏膜的充血和氣流受阻[7]。

十三味紅花密訣丸由紅花、當藥、制泡囊草、金腰子、熊膽、制木鱉子、制石花、旋覆花、煅龍骨、制綿羊顱骨、草烏、查干泵嘎、制爐甘石13味藥物組成。方中紅花活血止痛，當藥抑制希拉清熱，龍骨殺黏止痛，草烏殺黏消炎，金腰子抑制希拉清熱，石花清熱解毒，旋覆花殺黏止痛燥黃水，爐甘石清肝明目，木鱉子抑制希拉，泡囊草殺黏消腫清潤，熊膽清希拉。本方多采用活血化瘀藥，整方配伍清熱、殺黏、調理三根平衡，是蒙醫(yī)學中治療偏頭痛、高血壓及各類鼻炎的經典方劑?，F代藥理學研究表明，活血化瘀藥物能夠改善血液循環(huán)，抑制炎性反應的滲出和增生，抑制增生和變性結締組織，對炎性因子介導的過敏性疾病有良好的作用，對神經系統(tǒng)和增生性疾病也有作用[7]。本研究中，蒙藥各劑量組過敏性鼻炎模型大鼠經灌胃治療后，典型癥狀出現次數明顯較模型組少，說明十三味紅花密訣丸治療過敏性鼻炎具有良好的作用。

本次研究發(fā)現，十三味紅花密訣丸和鼻炎康均能夠有效且持續(xù)地緩解過敏性鼻炎的典型癥狀。HE染色的病理切片也說明，十三味紅花密訣丸對過敏性鼻炎引起的炎癥因子釋放、水腫等癥狀有良好的緩解作用。通過組間結果比較說明，十三味紅花密訣丸對過敏性鼻炎典型癥狀的改善程度明顯優(yōu)于鼻炎康，2種藥物均能改善AR大鼠血清中組胺、白三烯水平，差異無統(tǒng)計學意義，療效大致相同。

十三味紅花密訣丸作為蒙醫(yī)藥學中的經典方劑，由于客觀條件有限，對其的研究及推廣很少。本研究旨在通過與鼻炎康片進行比較，觀察十三味紅花密訣丸治療過敏性鼻炎的療效。通過對研究結果分析，說明蒙藥十三味紅花密訣丸對過敏性鼻炎具有良好的療效。

[1] 那木生加甫,巴圖孟克.蒙藥治療過敏性鼻炎的體會[J]. 中國民族醫(yī)藥雜志, 2011, 17(8): 5.

[2] 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會.變應性鼻炎的診治原則和推薦方案[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2005,40(3):166-167.

[3] 趙秀杰,董震,楊占泉,等.鼻超敏反應實驗模型的建立[J].中華耳鼻咽喉科雜志,1993，28(1)：17-18

[4] 李穎.雷公藤甲素對變應性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影響的研究[D]. 鄭州：鄭州大學, 2007.

[5] 柴江平,劉仁平,葛海生,等.柴新鼻敏康對大鼠變應性鼻炎的治療作用[J]. 中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,2012,18(8):884-885.

[6] BUSSE W, KRAFT M. Cysteinyl leukotrienes in allergic inflammation: strate-gic target for therapy[J]. Chest,2005,127(4):1312-1326.

[7] 姜慧,賈飛飛,申旭波，等.變應性鼻炎的現況調查[J].中國醫(yī)藥導報,2009,6(16):186-187.

Study on Mongolian Medicine Thirteen Flavor Safflower Secret Pill on the Therapeutic Effect of Allergic Rhinitis in Rats

LU Yang1, LI Lin1△, GAO Fei-hong1, WANG Hui-ying1, YOU Xiao-miao1, LI Xiao-wei2
(1.InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China; 2.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300193,China)

Objective: To observe the influences of Histamine and Leukotrienes on Mogolian Thirteen Safflower Mijue Pill Treatment of Allergic Rhinitis in order to study the mechanism of AR. Methods:The establishment of ovalbumin-induced rat model of AR, and set up the normal control group, model group, Mongolian high(1100 mg·kg-1)，Mongolian medium(550mg·kg-1)， Mongolian low(275mg·kg-1)and Biyankang group(409 mg·kg-1). Feeding drugs for 4 weeks, HE observed Nasal pathologic morphology of the organization. Determination of serum histamine and leukotrienes rats by ELISA. Results: Mongolian medicine groups and Biyankang group behavior scores were improved, through the comparison between the two groups, the Mongolian medicine high dose group behavior improved significantly better than the low dose group, Biyankang group; By HE staining, two kinds of drugs can improve nasal congestion, edema and inflammatory damage to varying degrees; Mongolian medicine in each dose group and rhinitis Kang group can significantly improve the AR rat serum histamine, leukotriene levels. And there was no significant difference between groups. Conclusion: Mongolian medicine thirteen flavor safflower secret pill can not only improve the allergic rhinitis, also can improve the level of serum histamine and leukotriene AR in rats, the treatment effect of allergic rhinitis exactly.

Mogolian Medicine; Thirteen Safflower Mijue Pill; Ovalbumin induced rhinitis; Allergic Rhinitis; Histamine; Leukotriene

盧 煬(1989-),男,內蒙古赤峰人，醫(yī)學碩士，從事蒙醫(yī)傳統(tǒng)方劑治療過敏性鼻炎的相關研究。

△通訊作者：李 林(1965-),男,內蒙古呼和浩特人，教授，醫(yī)學碩士，從事中醫(yī)內科學、免疫學的臨床與研究，Tel:13947185566,E-mail:lilin5566888@163.com。

R291.2

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1006-3250(2017)08-1085-03

2017-01-23