閆海霞，陶大燕，何荊洲，黃昌艷，關(guān)世凱，蔣月喜，卜朝陽(yáng)

(廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，廣西 南寧 530007)

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月季和野薔薇的試管嫁接研究

閆海霞，陶大燕，何荊洲，黃昌艷，關(guān)世凱，蔣月喜，卜朝陽(yáng)*

(廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，廣西 南寧 530007)

【目的】研究月季和野薔薇的試管嫁接技術(shù)，為月季繁殖的有效途徑提供參考?！痉椒ā恳砸八N薇帶芽莖段為外植體，通過(guò)比較不同滅菌方法、不同激素種類和濃度的培養(yǎng)基對(duì)組培快繁的影響，篩選出適宜的滅菌方法以及培養(yǎng)基，從而建立野薔薇的無(wú)菌快繁體系，并以不同品種月季無(wú)菌苗的莖尖為接穗，野薔薇為砧木進(jìn)行遠(yuǎn)緣嫁接?！窘Y(jié)果】野薔薇的外植體滅菌宜采用75 %酒精溶液拭擦莖段表面后浸泡10 s，再用0.1 %的升汞溶液浸泡10 min，繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L，生根培養(yǎng)基為WPM+NAA 0.05 mg/L；保留砧木葉片有利于提高嫁接成活率和生根率；以繼代增殖培養(yǎng)25 d的月季莖尖為接穗，有利于遠(yuǎn)緣嫁接的成活。移栽以緋扇-野薔薇的成活率最高，其次為“卡羅拉-野薔薇”、“金鳳凰-野薔薇”、“紅雙喜-野薔薇”、 “龍沙寶石-野薔薇”、“遺產(chǎn)-野薔薇”?！窘Y(jié)論】不同月季品種與野薔薇嫁接的成活率因品種而異，砧木保留葉片與否以及接穗的繼代培養(yǎng)時(shí)間與嫁接成活率有著密切的關(guān)系。

月季；野薔薇；試管嫁接；砧木；接穗

【研究意義】薔薇屬植物主要分布在北半球的溫帶、亞熱帶及熱帶。我國(guó)是世界野生薔薇的起源和分布中心之一。月季(Rosachinensis)為薔薇屬植物，多年生落葉或常綠灌木，園林觀賞價(jià)值極高，是當(dāng)今世界五大鮮切花之一。月季規(guī)模化種植多以扦插苗為主，但扦插苗的種植年限通常為3～4年，而嫁接苗的種植年則高達(dá)8年，品種的種性不易退化，是月季種植生產(chǎn)的極佳選擇。試管嫁接具有可培育無(wú)毒苗、復(fù)壯優(yōu)良品種、促進(jìn)植物的改良、便于人工控制環(huán)境和提高成活率等優(yōu)點(diǎn)。因此，研究薔薇屬植物試管嫁接技術(shù)對(duì)縮短種苗繁育的進(jìn)程具有積極的意義。【前人研究進(jìn)展】嫁接技術(shù)分為試管外嫁接和試管嫁接。目前，月季嫁接以試管外嫁接為主，而試管嫁接應(yīng)用極少。試管嫁接技術(shù)在某些植物種類中[1-7]已有應(yīng)用，尤其是在果樹上的應(yīng)用。羅君琴[3]等進(jìn)行柑橘試管內(nèi)莖尖微芽嫁接技術(shù)試驗(yàn)，結(jié)果表明7-8月柑橘夏秋梢抽發(fā)期進(jìn)行“△”形法微芽嫁接，利于接穗莖尖存活及萌芽率提高；董麗芬[5]等研究核桃微體嫁接方法發(fā)現(xiàn)，30° V型刀具嫁接方法比劈接法和雙舌接法更適用于核桃的微體嫁接；Murashige[8]等將試管嫁接技術(shù)應(yīng)用于柑桔屬植物，獲得無(wú)病毒苗，挽救一些瀕臨滅絕的品種；蔣愛麗[9]以容易生根的葡萄種類為砧木進(jìn)行試管嫁接，克服了某些葡萄種類在培養(yǎng)基上難以生根的問(wèn)題。伊華林[10]采用試管嫁接解決了三倍體柑橘組培苗長(zhǎng)勢(shì)弱、生根難的問(wèn)題?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前試管嫁接技術(shù)在薔薇屬植物上的應(yīng)用已有較多研究，但月季和野薔薇嫁接的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】在建立月季組培快繁的基礎(chǔ)上，研究建立野薔薇的組培快繁體系，然后以野薔薇為砧木，月季為接穗，建立月季和野薔薇的遠(yuǎn)緣試管嫁接技術(shù)，為今后月季嫁接繁殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為月季組培苗和野薔薇，均由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所提供，6個(gè)品種的月季組培苗分別為：“卡羅拉”、“龍沙寶石”、“緋扇”、“遺產(chǎn)”、“金鳳凰”和“紅雙喜”。

1.2 野薔薇組培快繁的建立

1.2.1 外植體的滅菌 以帶1個(gè)芽的莖段為外植體，先用中性洗滌劑浸泡10 min，并用自來(lái)水沖干凈后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)上，按照表1的方法進(jìn)行外植體的滅菌，接入MS培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接種20株，重復(fù)3次。每天觀察污染、成活情況，連續(xù)觀察15 d，計(jì)算污染率、成活率，并對(duì)各處理進(jìn)行比較分析，篩選出適宜的外植體滅菌方法。

污染率(%)=污染數(shù)/接種數(shù)×100

成活率(%)=成活數(shù)/接種數(shù)×100

1.2.2 繼代增殖培養(yǎng) 將初代培養(yǎng)中莖段上萌發(fā)的嫩芽切取下來(lái)，接入繼代增殖培養(yǎng)基(表2)，每種培養(yǎng)基接種20株，重復(fù)3次。培養(yǎng)20～50 d后，統(tǒng)計(jì)不定芽數(shù)量，計(jì)算增殖系數(shù)，并對(duì)各培養(yǎng)基進(jìn)行比較分析，篩選出適宜的繼代增殖培養(yǎng)基。

增殖系數(shù)=新芽數(shù)/接種數(shù)

1.2.3 生根培養(yǎng) 當(dāng)不定芽長(zhǎng)至高約2.0～3.5 cm時(shí)，接入生根培養(yǎng)基中(表3)，每種培養(yǎng)基接種20株，重復(fù)3次。培養(yǎng)25～30 d后，統(tǒng)計(jì)生根植株數(shù)，計(jì)算生根率，并對(duì)各培養(yǎng)基進(jìn)行比較分析，篩選出適宜的生根培養(yǎng)基。

生根率(%)=生根數(shù)/接種數(shù)×100

1.3 試管嫁接

1.3.1 試管嫁接方法 嫁接的操作在超凈工作臺(tái)上完成。選擇莖干具有一定粗度、高度為2.5～3.5 cm的野薔薇為砧木，切去頂芽，保留莖干長(zhǎng)度為1.5～2.0 cm，在莖干頂部中間縱切，切口長(zhǎng)度為0.2～0.3 cm。以不同月季品種的無(wú)菌苗為接穗，要求莖干較砧木的莖干小，莖尖長(zhǎng)度為1.0～1.5 cm，將其基部切成“V”字形。將砧木接入野薔薇生根培養(yǎng)基中，砧木與培養(yǎng)基垂直，然后將月季莖尖小心插入砧木的頂部切口中。

表1 野薔薇的外植體滅菌方法

表2 野薔薇繼代增殖培養(yǎng)基激素配比

1.3.2 砧木葉片對(duì)試管嫁接成活的影響 將不同品種的月季進(jìn)行繼代培養(yǎng)20～30 d后，取其莖尖與具有不同葉片的野薔薇砧木進(jìn)行遠(yuǎn)緣嫁接，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～35 d后，每種處理嫁接20株，重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)嫁接成活率、嫁接愈合時(shí)間、嫁接生根數(shù)，分析砧木葉片對(duì)試管嫁接成活的影響。

嫁接成活率(%)=成活數(shù)/嫁接數(shù)×100

1.3.3 不同繼代增殖時(shí)間的接穗對(duì)試管嫁接成活的影響 將不同繼代增殖時(shí)間的各月季品種與野薔薇(保留葉片2片)嫁接后，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～35 d后，每種處理嫁接20株，重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)嫁接成活率、嫁接愈合時(shí)間、嫁接生根數(shù)，分析不同繼代增殖時(shí)間的接穗對(duì)試管嫁接成活的影響。

1.3.4 嫁接后移栽 將接穗已長(zhǎng)新葉，主根有3條以上，根長(zhǎng)2.0 cm以上的嫁接瓶苗，置于溫室中煉苗2～3 d，然后揭蓋再煉苗1～2 d，洗去根部培養(yǎng)基，并50 %多菌靈可濕性粉劑1000倍溶液浸泡10 min后再移栽。移栽基質(zhì)采用泥炭混合珍珠巖，體積比為2∶1，pH 6.0～7.0。移栽后澆透定根水，每天澆水1次，25～30 d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

表3 野薔薇生根培養(yǎng)基

移栽成活率(%)=成活數(shù)/移栽數(shù)×100

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2003軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，方差分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，Duncan′s 多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 野薔薇的外植體消毒滅菌

由表4可以看出，處理1、2、3的污染率、成活率存在顯著差異，處理1的成活率顯著低于處理2、3；處理4、5、6的污染率有顯著差異，處理4的成活率顯著低于處理5、6；處理7的污染率顯著低于8、9，其中處理8的成活率為100.00 %，顯著高于其他處理。由此可看出，在相同的酒精處理?xiàng)l件下，污染率隨著升汞滅菌時(shí)間的增加呈先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)采用酒精拭擦莖段再浸泡10 s時(shí)，升汞滅菌10min 的污染率最低，此時(shí)的成活率達(dá)最高，因此，適宜野薔薇莖段滅菌的方法是先用75 %酒精溶液拭擦后浸泡10 s，再用0.1 %升汞溶液滅菌10 min，污染率為0，成活率為100.00 %。

表4 不同滅菌方法對(duì)野薔薇外植體的影響

Table 4 Effects of different sterilization method on explant ofRosamultifloraThunb. Fl. Jap. explant

處理Treatments污染率(%)Contaminationrate成活率(%)Survivalrate176．67a23．33f236．67c63．33c30e51．67d473．33a26．67f553．33b46．67cd611．67d55．00cd768．33a40．00e80e100．00a90e78．33b

注：同列數(shù)據(jù)不同小寫字母表示差異達(dá)顯著水平(P<0.05)，下同。 Note：Different lowercase and capital letters in the same column indicated significant difference at 0.05 level. Thc same as below.

2.2 野薔薇的繼代增殖培養(yǎng)

通過(guò)表5的數(shù)據(jù)可知，不同6-BA和NAA組合配比對(duì)野薔薇的增殖培養(yǎng)的影響不同，主要表現(xiàn)為增殖系數(shù)的不同。經(jīng)方差分析，Y2的增殖系數(shù)顯著高于處理Y1、Y3；處理Y5的增殖系數(shù)顯著高于其余處理；處理Y8的增殖系數(shù)顯著高于處理Y7、Y9。由此表明，在相同NAA或6-BA濃度下，隨著兩種激素濃度的增加，增殖系數(shù)的變化趨勢(shì)是相同的，都是呈先上升后下降的趨勢(shì)。在6-BA濃度為3.0 mg /L時(shí)，增殖系數(shù)達(dá)到所在NAA濃度的峰值，其中，當(dāng)NAA的濃度為0.10 mg/L時(shí)，其增殖系數(shù)顯著高于其他組合配比，且長(zhǎng)勢(shì)好，植株健壯。由此可得，適宜野薔薇繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L，增殖系數(shù)為4.23。

2.3 野薔薇的生根培養(yǎng)

通過(guò)對(duì)表6的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析得出，B8的生根率顯著高于其余處理，生根時(shí)間顯著小于其余處理；B7的生根率顯著高于B1、B4，生根時(shí)間顯著短于B1、B4；B9的生根率顯著高于B3、B6，但生根時(shí)間和B6的無(wú)顯著差異。這表明，在相同的NAA濃度下，以WPM為基本培養(yǎng)基的生根率較高，在WPM+NAA 0.05 mg/L，生根率達(dá)最高，為91.67 %，生根時(shí)間最短，為16.00 d，在此培養(yǎng)基上，植株生長(zhǎng)好，小苗健壯。因此，適宜野薔薇生根的培養(yǎng)基為WPM+NAA 0.05 mg/L。

2.4 月季和野薔薇的試管嫁接

2.4.1 砧木葉片對(duì)遠(yuǎn)緣試管嫁接成活的影響 對(duì)表7的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析可知，以下處理間的成活率、生根率存在顯著差異：K1和K7，K2和K8，K3和K9，K4和K10，K5和K11，K6和K12，且后者的成活率、生根率顯著高于前者。由此表明，同一個(gè)月季品種，砧木葉片保留與否，對(duì)嫁接的成活率、生根率有顯著影響，保留葉片有利于提高嫁接成活率和生根率。不同月季品種嫁接成活率、生根率也有所不同，其中，緋扇-野薔薇的最高，成活率為93.33 %，生根率81.67 %，其他的成活率由高至低依次為：“卡羅拉-野薔薇”、“紅雙喜-野薔薇”、“金鳳凰-野薔薇”、“龍沙寶石-野薔薇”、“遺產(chǎn)-野薔薇”。

表5 不同培養(yǎng)基對(duì)野薔薇繼代增殖培養(yǎng)的影響

Table 5 Effects of different medium on multiplication ofRosamultifloraThunb. Fl. Jap. explant

處理Treatments增殖系數(shù)Multiplicationcoefficient生長(zhǎng)情況GrowingsituationY12．95e差，大部分植株細(xì)弱Y23．37d良，部分植株細(xì)弱Y33．08e良，部分植株細(xì)弱Y43．87b差，大部分植株細(xì)弱Y54．23a好，植株健壯Y63．65c良，少量植株莖尖死亡Y73．55c差，大部分植株細(xì)弱Y83．97b良，部分植株細(xì)弱Y93．62c良，少量植株莖尖死亡

2.4.2 不同繼代增殖時(shí)間的接穗對(duì)試管嫁接成活的影響 由表8分析可知，T2的嫁接成活率、生根率顯著高于T1、T3，T8的嫁接成活率、生根率顯著高于T7、T9，T14的嫁接成活率、生根率顯著高于T13、T15；T11的成活率顯著高于T10，T17的成活率顯著高于T16；T4、T5、T6的成活率無(wú)顯著差異。由此表明，接穗的繼代增殖培養(yǎng)時(shí)間對(duì)嫁接成活率、生根率的影響因品種而異，隨著繼代增殖培養(yǎng)時(shí)間的增加，嫁接成活率、生根率呈先增加后下降的趨勢(shì)。繼代增殖培養(yǎng)時(shí)間對(duì)“卡羅拉-野薔薇”、“緋扇-野薔薇”、“金鳳凰-野薔薇”這3個(gè)嫁接組合的成活率影響顯著，對(duì)龍沙寶石-野薔薇的成活率影響不顯著。由此可見，當(dāng)接穗的繼代增殖時(shí)間為25 d時(shí)，有利于遠(yuǎn)緣嫁接的成活。

表6 不同培養(yǎng)基對(duì)野薔薇生根的影響

表7 砧木葉片對(duì)遠(yuǎn)緣嫁接的影響

2.5 不同品種和野薔薇遠(yuǎn)緣嫁接苗的移栽

通過(guò)對(duì)表9數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，Z3的成活率顯著高于其他處理，為96.67 %；Z1、Z2、Z5、Z6的移栽成活率無(wú)顯著差異；Z4的移栽成活率最低，為80.00 %，顯著低于Z1、Z3、Z5。由此可見，不同嫁接組合的移栽成活率不同，其中緋扇-野薔薇的移栽成活率最高，其他組合的移栽成活率由高至低依次為：“卡羅拉-野薔薇”、“金鳳凰-野薔薇”、“紅雙喜-野薔薇”、“龍沙寶石-野薔薇”、“遺產(chǎn)-野薔薇”。

3 討 論

月季與野薔薇試管嫁接時(shí)，嫁接成活受多種因素的影響。首先是接穗和砧木親和力的影響，表現(xiàn)為不同品種的接穗對(duì)嫁接親和力的影響。本試驗(yàn)中不同嫁接組合的成活率不同，主要是由于接穗品種間的差異，即接穗來(lái)源植株的遺傳特性，生長(zhǎng)特性[11]。其次，砧木保留葉片與否也會(huì)影響嫁接的成活率。本試驗(yàn)研究結(jié)果認(rèn)為保留砧木葉片有利于提高嫁接成活率和生根率，這與前人研究的結(jié)果是一致的：柑桔莖尖嫁接時(shí)砧木帶子葉嫁接成活率高于不帶子葉的[11]；進(jìn)行阿拉伯膠樹試管嫁接時(shí)砧木上的葉子有助于植株的生長(zhǎng)[12]；月見草與大巖桐進(jìn)行嫁接，當(dāng)砧木保留一定的葉片時(shí)，其嫁接成活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于切去所有葉片時(shí)的成活率[13]。砧木保留葉片利于嫁接植株進(jìn)行光合作用制造營(yíng)養(yǎng)，對(duì)成活率具有一定的促進(jìn)作用[14]。但周瑞金等[15]認(rèn)為當(dāng)培養(yǎng)基適宜時(shí)，砧木是否帶有葉片對(duì)嫁接成活的影響不大，且砧木保留葉片不利于嫁接操作，嫁接時(shí)以去掉砧木上的葉片為宜。接穗的繼代增殖時(shí)間對(duì)嫁接的成活也有很大的影響，盧吟濤等[16]指出接穗的苗齡與遠(yuǎn)緣試管嫁接能否成功有著密切的關(guān)系。處于幼齡的接穗其體細(xì)胞處于感受態(tài)，分生組織活動(dòng)最為活躍，遺傳物質(zhì)容易整合到該類細(xì)胞中。在本試驗(yàn)中，采用了3種不同繼代增殖時(shí)間的月季莖尖為接穗，以繼代增殖培養(yǎng)25 d的月季莖尖為接穗的嫁接成活最高。

表8 接穗的繼代增殖時(shí)間對(duì)遠(yuǎn)緣嫁接的影響

表9 不同月季品種和野薔薇試管嫁接苗的移栽成活

4 結(jié) 論

野薔薇以莖段為外植體進(jìn)行無(wú)菌快繁，滅菌采用酒精拭擦后浸泡10 s再用升汞滅菌10 min，繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L，生根培養(yǎng)基為WPM+NAA 0.05 mg/L；保留砧木葉片有利于提高嫁接成活率和生根率；當(dāng)接穗繼代增殖時(shí)間為25 d時(shí)，對(duì)遠(yuǎn)緣嫁接的成活有利；移栽以緋扇-野薔薇的成活率最高，其次為卡羅拉-野薔薇、金鳳凰-野薔薇、紅雙喜-野薔薇、龍沙寶石-野薔薇、遺產(chǎn)-野薔薇。不同月季品種與野薔薇嫁接的成活率因品種而異，砧木保留葉片與否以及接穗的苗齡與嫁接成活率有著密切的關(guān)系。

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(責(zé)任編輯 王冠玉)

Study oninvitroGrafting ofRosachinensisandRosamultifloraThunb. Fl. Jap.

YAN Hai-xia, TAO Da-yan，HE Jing-zhou, HUANG Chang-yan, GUAN Shi-kai, JIANG Yue-xi, BU Zhao-yang*

(Flower Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Guangxi Nanning 530007,China)

【Objective】Study on the technology ofinvitrografting ofRosachinensisandRosamultifloraThunb. Fl. Jap provided effective ways for the propagation of rose cutting.【Method】With theRosamultifloraThunb. Fl. Jap. bud stem segments as explants, by comparing different sterilization methods, different types and concentrations of hormone medium influence on tissue micropropagation, screened out suitable sterilization method and culture medium, thus established sterile rapid breeding system of theRosamultifloraThunb. Fl. Jap., and in different cultivars of sterileRosachinensis’s seedling as a scion, theRosamultifloraThunb. Fl. Jap. was conducted on distant related grafting for the root stock.【Result】The results showed that theRosamultifloraThunb. Fl. Jap. was suitable for sterilization of explants with 75 % alcohol solution to wipe the surface of the stems after soaking for 10 seconds, and soaks with 0.1 % mercuric chloride solution for 10 minutes, subculture proliferating medium was MS+6-BA 3.0 mg/L+0.10 mg/L NAA, the rooting medium was WPM+NAA 0.05 mg/L. Keeping the root stock blade was helpful to enhance the survival rate of grafting and rooting rate; It was beneficial to the survival of distant grafting by the subculture proliferating medium of 25 d ofRosachinensisstem tip as a scion. The highest survival rate of transplanting wasHiohgi-multiflora, followed byCarola-RosamultifloraThunb. Fl. Jap., Golden Scepter-RosamultifloraThunb. Fl.Jap.,Double Delight-RosamultifloraThunb. Fl. Jap., Rose Eden-RosamultifloraThunb. Fl. Jap., and Heritage-RosamultifloraThunb. Fl. Jap.【Conclusion】The survival rate of different varieties ofRosachinensisandRosamultifloraThunb. Fl. Jap. was different with variety. There was close relationship between rootstock retaining leaves or not , the subculture time and grafting survival rate.

Rosachinensis;RosamultifloraThunb. Fl. Jap.;Tube grafting; Root stock; Scion

1001-4829(2017)7-1636-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.7.029

2017-02-28

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科攻15980 06-5-8，桂科能1598022-1-5)；南寧市西鄉(xiāng)塘區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2015302)；廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2015YT89)；廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)專項(xiàng)(2017YM45)

閆海霞(1981-)，女，廣西貴港人，碩士，副研究員，主要從事花卉新品種選育與示范推廣工作，*為通訊作者，卜朝陽(yáng)(1966-)，女，研究員，從事觀賞植物的生物技術(shù)研究工作，E-mail：yangnv@126.com。

S685.12

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