田金鳳,尚遠(yuǎn)宏,李學(xué)剛

(1.攀枝花學(xué)院干熱河谷特色生物資源研發(fā)四川省高校重點實驗室,四川攀枝花 617000;2.西南大學(xué) 藥學(xué)院 重慶市藥效評價工程技術(shù)研究中心,重慶 400716)

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玄參中化學(xué)成分的分離鑒定及其降糖活性研究

田金鳳1,2,尚遠(yuǎn)宏1,李學(xué)剛2,*

(1.攀枝花學(xué)院干熱河谷特色生物資源研發(fā)四川省高校重點實驗室,四川攀枝花 617000;2.西南大學(xué) 藥學(xué)院 重慶市藥效評價工程技術(shù)研究中心,重慶 400716)

本文探討分離玄參的化學(xué)成分,并研究玄參中分離出的化合物在 HepG2 細(xì)胞中降糖作用的影響。采用滲濾提取,結(jié)合大孔樹脂、硅膠柱層析、HSCCC色譜等分離方法,NMR波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu),MTT法檢測HepG2細(xì)胞活力,試劑盒檢測細(xì)胞消耗的葡萄糖。結(jié)果表明,分離出玄參中9個化合物:類葉升麻苷(1)、升麻素苷(2)、桃葉珊瑚苷(3)、哈巴苷(4)、蔗糖(5)、肉桂酸(6)、哈巴俄苷(7)、安格洛苷C(8)、二十七烷(9)。在0.1～2.5 μg/mL濃度范圍內(nèi),哈巴俄苷在HepG2細(xì)胞中降糖活性最好。其中,二十七烷為首次從該屬植物中分離得到,化合物7是一個潛在的降糖化合物,值得進(jìn)一步研究和開發(fā)。

玄參,分離鑒定,降糖活性,哈巴俄苷

玄參為玄參科植物玄參(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根,且為藥食兩用的藥材,其中環(huán)烯醚萜類和苯丙素苷類是玄參屬植物的主要化學(xué)成分[1],藥理研究表明其具降壓、抗血小板聚集、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、抗氧化和抗腫瘤等作用[2]。

糖尿病屬于代謝疾病,其主要表現(xiàn)為肝臟及其肌肉、脂肪組織等對葡萄糖的攝取存在障礙,以及肝臟葡萄糖輸出增多,使血液中的葡萄糖無法正常進(jìn)入細(xì)胞,導(dǎo)致人體血糖升高的一種疾病[3]。傳統(tǒng)中醫(yī)對糖尿病的記載和治療有著悠久的歷史,各種中藥被廣泛用于糖尿病的治療?，F(xiàn)在,從傳統(tǒng)中藥方劑中篩選單味藥,再從中分離降糖活性成分已成為糖尿病治療藥物的研究熱點[4-5]。Kim等[6]發(fā)現(xiàn)丹東玄參和S.borealikoreanaNakai.對晶狀體醛糖還原酶的抑制作用要明顯強(qiáng)于S.takesimensisNakai.和北玄參。張寧等[7]探討了玄參及其各組分(粗分的提取物)對糖尿病大鼠的降血糖作用,發(fā)現(xiàn)玄參水煎液組和大/小環(huán)烯醚萜苷組對高脂飼料喂養(yǎng)并結(jié)合小劑量STZ注射所導(dǎo)致的2型糖尿病大鼠具有降血糖作用。但關(guān)于玄參及其分離的單體的降血糖藥理作用及其機(jī)制研究的文獻(xiàn)尚未見相關(guān)報道,因此本部分實驗為了能更好的開發(fā)利用玄參藥食兩用的價值,以南川區(qū)為來源地的玄參為研究對象,采用大孔樹脂、硅膠、Sephadex LH-20等[8]色譜技術(shù)進(jìn)行提取分離純化,通過波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和結(jié)構(gòu)鑒定其化學(xué)成分,并以HepG2細(xì)胞高糖模型來研究其降糖活性,為進(jìn)一步研究玄參降糖藥效和開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

玄參來源于重慶南川區(qū)。玄參根經(jīng)西南民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境保護(hù)工程學(xué)院劉圓教授鑒定為ScrophularianingpoensisHemsl.的根。Sephadex LH-20 上海浩然生物技術(shù)有限公司;D101大孔樹脂、柱層析用硅膠(100～200目)和薄層層析硅膠板GF254 青島海洋化工廠;HepG2細(xì)胞株 第三軍醫(yī)大學(xué)現(xiàn)代高血壓研究所;胰蛋白酶、MTT Sigma公司;EDTA 鼎國生化試劑公司;葡萄糖酶法測定試劑盒、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基 南京建成生物工程研究所;青、鏈霉素 Hyclone公司;特級胎牛血清 Gibco公司;48孔板、96孔板 Corning公司;其它試劑均為分析純。

YP6000N電子天平 上海精密儀器科技有限公司;玻璃層析柱 上海亞榮生化儀器廠;AM-500M核磁共振儀 瑞士Bruker公司;TOMY SS-325滅菌鍋 TOMY KOGYO有限公司;EOS BRAVO全自動生化分析儀 上海安泰分析儀器有限公司;BioTek ELx808全自動酶標(biāo)讀數(shù)儀 美國伯樂公司;超凈工作臺 蘇州金燕凈化設(shè)備有限公司;二氧化碳培養(yǎng)箱 上海躍進(jìn)醫(yī)療儀器廠;HHW-21CU-600B恒溫水浴鍋 上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司;AVANTI J-30I高速冷凍離心機(jī) BECKMAN公司。

1.2 提取與分離

1.2.1 玄參的大孔樹脂提取 取6 kg干燥的玄參根,切片粉碎,在滲漉桶中加70%的乙醇提取48 h,三次,滲漉液合并,減壓濃縮成浸膏,玄參的浸膏得率約為28.4%。再取玄參的浸膏1420 g,溶于自來水中(上樣藥液比<5%),經(jīng)D101大孔樹脂柱色譜,依次用30%、60%、90%乙醇洗脫,減壓濃縮,回收乙醇,得30%乙醇浸膏為224 g、60%乙醇浸膏為105 g、90%乙醇浸膏為8 g。

1.2.2 柱層析分離 取30%乙醇浸膏100 g,經(jīng)硅膠(100～200目)柱色譜,以乙酸乙酯-甲醇(50∶1→1∶10)梯度洗脫,經(jīng)TLC檢識合并得到6個部位Fr. 1～6。Fr. 2經(jīng)硅膠、Sephadex LH-20分離得到化合物1(375 mg)、化合物2(350 mg)、化合物3(1.02 g);Fr. 4經(jīng)Sephadex LH-20、重結(jié)晶分離得到化合物4(2.45 g)、化合物5(68 mg)。

取60%乙醇浸膏20 g,硅膠柱色譜(100～200目),以氯仿-甲醇(25∶1→10∶1)梯度洗脫,經(jīng)TLC檢識合并得到4個部位Fr. 1～4。Fr.1經(jīng)氯仿-甲醇25∶1洗脫,重結(jié)晶分離得到化合物6(45 mg);Fr. 2經(jīng)高速逆流色譜(HSCCC)分離得到化合物7(0.44 g)和化合物8(0.62 g)。

取90%乙醇浸膏5 g,以石油醚-乙酸乙酯(25∶1→1∶1)梯度洗脫,經(jīng) TLC檢識合并得到4個部位 Fr. 1～4。Fr.2經(jīng)硅膠柱,用石油醚-乙酸乙酯(10∶1)洗脫,回收溶劑至干,適量乙酸乙酯溶解,再加適量甲醇而沉淀,過濾,沉淀放置后得白色粉末,為化合物9(22 mg)。

1.2.3 降糖活性

1.2.3.1 HepG2葡萄糖消耗實驗 參照相關(guān)文獻(xiàn)的方法[9-10],將胰酶消化好的HepG2細(xì)胞均勻地點在96孔板中(2×105個/mL),24 h后分別放入含有不同濃度的浸膏組分、化合物1～4,6～8的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。每種濃度設(shè)置3復(fù)孔,以200 μL PBS液為空白對照組。孵育24 h后,取115 μL培養(yǎng)基,用葡萄糖試劑盒在全自動生化分析儀上檢測培養(yǎng)基中葡萄糖殘存量。通過下式可以計算出細(xì)胞促進(jìn)葡萄糖消耗量。為了考慮細(xì)胞增殖的影響,葡萄糖消耗最終結(jié)果用GC/MTT表示[10-11](其中,促進(jìn)葡萄糖消耗量(GC)=空白培養(yǎng)基中葡萄糖殘存量-藥物組培養(yǎng)基中葡萄糖殘存量,MTT為“1.2.3.2 MTT實驗”中用酶標(biāo)儀于490 nm波長下檢測各孔的吸光度值)。

1.2.3.2 MTT實驗 參照相關(guān)文獻(xiàn)[9],在剩下的培養(yǎng)基中加入15 μL MTT,37 ℃孵育4 h,加200 μL DMSO,振蕩10 min,用酶標(biāo)儀在490 nm波長下檢測吸光度。

1.3 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1(C29H36O15,acteoside),淡黃色無定形粉末,mp 135～136 ℃,UV365下顯藍(lán)色熒光。1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:7.06(1H,d,J=2.0 Hz,H-2?),6.78(1H,d,J=8.0 Hz,H-5?),6.96(1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-6?),7.58(1H,d,J=16.0 Hz,H-7?),6.25(1H,d,J=16.0 Hz,H-8?),6.70(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.67(1H,d,J=8.0 Hz,H-5),6.56(1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-6),2.79(2H,m,H-7),3.72(1H,dd,J=16.0,8.0 Hz,H-8),4.02(1H,dd,J=16.0,8.0 Hz,H-8),4.38(1H,d,J=8.0 Hz,H-1′),3.39(1H,dd,J=9.3,8.0 Hz,H-2′),3.81(1H,t,J=9.3 Hz,H-3′),3.52(1H,t,J=9.3 Hz,H-5′),3.52(1H,m,H-6′),3.60(1H,m,H-6′),5.20(1H,d,J=1.5 Hz,H-1″),3.93(1H,d,J=1.5 Hz,H-2″),3.58(2H,m,H-3″,5″),3.30(1H,m,H-4″),1.09(3H,d,J=6.0 Hz,H-6″);13C-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:δ 168.35(C=O),131.46(C-1),117.17(C-2),146.14(C-3),144.09(C-4),116.62(C-5),121.26(C-6),36.56(C-7),72.26(C-8),104.18(C-1′),76.20(C-2′),81.65(C-3′),70.57(C-4′),76.02(C-5′),62.36(C-6′),103.02(C-1″),72.33(C-2″),72.04(C-3″),73.78(C-4″),70.41(C-5″),18.45(C-6″),127.63(C-1?),115.21(C-2?),144.61(C-3?),148.02(C-4?),116.30(C-5?),123.22(C-6?),146.83(C-7?),114.66(C-8?)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為類葉升麻苷[12]。

化合物2(C22H28O11,Prim-O-glucosylcimifugin),白色粉末,mp 126～128 ℃。1H NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:6.60(1H,s,8-H),6.37(1H,s,3-H),4.77(1H,m,2′-H),4.76(1H,d,J=13.8 Hz,-O-CH2a),4.58(1H,d,J=13.8 Hz,-O-CH2b),4.60(1H,d,J=7.8 Hz,1″-H),4.43(1H,m,6″a-H),3.93(3H,s,-OCH3),3.87(1H,m,6″b-H),3.68(1H,m,3′a-H),3.26-3.38(5H,in,3,b′-H及glc上2″,3″,4″,5″-H),1.29(3H,s,4′-CH3),1.24(3H,s,4′-CH3)。13C-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:179.55(C-4),167.10(C-5),165.04(C-2),161.39(C-7),157.01(C-10),118.45(C-6),112.42(C-9),111.06(C-3),103.77(C-1″),94.15(-C8),92.07(C-2′),78.16,77.95(C-3″或C-5″),74.96(C-2″),72.21(C-4′),71.53(C-4″),67.14(2-O-CH2),61.82(C-6″),60.48(5-O-CH3),28.18(C-3′),25.40(CH3-4′),25.31(CH3-4′)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為升麻素苷[13]。

化合物3(C15H22O9，Aucubin),白色針狀結(jié)晶。1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:6.32(1H,dd,J=6.1,1.8 Hz),5.76(1H,s),5.09(1H,dd,J=6.1,3.9 Hz),4.96(1H,d,J=7.2 Hz),4.68(1H,dd,J=8.0 Hz),4.44(1H,dd,J=3.3,1.7Hz),4.34,4.18(各1H,AB,J=15.4 Hz),3.87(1H,dd,J=12.8,1.5Hz),3.68(1H,dd,J=12.8,5.3 Hz),3.37(1H,t,J=8.5 Hz),3.32(1H,m),3.23(1H,dd,J=8.5,8.0 Hz),2.89(1H,t,J=7.2 Hz),2.66(1H,m)。13C-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:148.02(C-8),141.98(C-3),130.24(C-7),105.71(C-4),99.92(C-1′),97.72(C-1),82.84(C-6),78.26(C-3′),77.89(C-5′),74.91(C-2′),71.56(C-4′),62.66(C-6′),61.41(C-10),47.93(C-9),46.27(C-5)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為桃葉珊瑚苷(mp 180～182 ℃)[14]。

化合物4(C15H24O10，Harpagide),mp 130～132 ℃,Amorphous powder.1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:d 1.24(3H,s,H-10),1.78(1H,dd,J=13.7/5.1 Hz,H-7a),1.89(1H,dd,J=14.5 Hz,H-7b),2.54(1H,s,H-9),3.89(1H,d,J=4.0 Hz,H-6),4.94(1H,dd,J=6.4/1.4 Hz,H-4),5.74(1H,s,H-1),6.32(1H,d,J=6.4 Hz,H-3),4.57(1H,d,J=8.0 Hz,H-1″),3.21(1H,t,J=8.4 Hz,H-2″),3.37(1H,t,J=8.6 Hz,H-3″),3.30(1H,dd,J=8.1 Hz,H-4″),3.31(1H,dd,J=5.8/2.1 Hz,H-5″),3.66(1H,dd,J=12.5/5.8 Hz,H-6a″),3.70(1H,dd,J=12.5/2.1 Hz,H-6b″);13C-NMR(CD3OD,500 MHz)δ ppm:93.65(C-1),142.84(C-3),108.51(C-4),72.21(C-5),77.63(C-6),47.44(C-7),78.65(C-8),59.77(C-9),24.99(C-10);99.24(glcC-1′),74.73(glcC-2′),78.26(glcC-3′),71.66(glcC-4′),78.04(glcC-5′),63.03(glcC-6′)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為哈巴苷[15]。

化合物5(C12H22O11,D-(+)-sucrose),無色結(jié)晶,mp 169～172 ℃,1H-NMR(D2O,500 MHz)δ ppm:5.41(1H,d,J=3.9 Hz,H-1),4.22(1H,dd,J=3.5,9.8 Hz,H-3′),4.06(1H,m,H-4′),3.90(1H,H-5′),3.49(1H,m,J=5 Hz,H-4),3.58(1H,dd,J=l.5 Hz,H-2),3.68(2H,s,H-l′),3.83(2H,H-6′),3.82(2H,H-6),3.86(1H,H-5),3.76(1H,H-3),13C-NMR(D2O,500 MHz)δ ppm:103.64(C-2′),92.13(C-1),81.33(C-5′),76.36(C-3′),73.95(C-4′),72.52(C-3),72.36(C-5),71.03(C-2),69.18(C-4),62.32(C-6′),61.30(C-1′),60.07(C-6),以上資料與文獻(xiàn)報導(dǎo)的蔗糖資料一致[16]。

化合物6(C9H8O2，Cinnamic acid),白色粉末,mp 133～135 ℃。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ ppm:7.82(1H,dd,H-2),7.57(2H,m,H-6),7.41(1H,m,H-4),7.40(2H,m,H-5),6.48(1H,dd,H-1);13C-NMR(CDCl3,500 MHz)δ ppm:172.74(C-1),147.30(C-2),134.22(C-3),130.94(C-4),129.15(C-5),128.57(C-6),117.51(C-7)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為肉桂酸[17]。

化合物7(Harpagoside,哈巴俄苷)和化合物8(Angroside C,安格洛苷C),已另文發(fā)表[18]。

化合物9(C27H56,Twenty-Seven alkane),白色蠟狀固體,mp 68.2 ℃,不溶于水、乙醇,易溶于石油醚、氯仿,可溶于苯、乙醚等有機(jī)溶劑中。無旋光性,無紫外吸收。1H-NMR(CD3OD,500 MHz):δ0.89(3H,t,J=7.0 Hz,Me),1.33-1.20(2H,α,β-CH2);13C-NMR(CD3OD,500 MHz):δ 14.31(C-1),22.89(C-2),32.13(C-3),29.57(C-4),29.90(C-5),29.90(C-6),29.90(C-7),29.90(C-8),29.90(C-9),29.90(C-10),29.90(C-11),29.90(C-12),29.90(C-13),29.90(C-14),29.90(C-15),29.90(C-16),29.90(C-17),29.90(C-18),29.90(C-19),29.90(C-20),29.90(C-21),29.90(C-22),29.90(C-23),29.57(C-24),32.13(C-25),22.89(C-26),14.31(C-27)。根據(jù)以上核磁的波譜資料與相關(guān)參考文獻(xiàn)的波譜資料基本一致,確定為二十七烷[19]。

2.2 玄參提取物及單體對HepG2細(xì)胞降糖活性的影響

實驗中用HepG2細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞降糖活性部位篩選,結(jié)果見圖1。各分離組分的GC/MTT均有劑量依賴關(guān)系,且在同一劑量下,各分離組分的葡萄糖消耗能力為:二甲雙胍>過大孔樹脂分離后的60%乙醇組分>玄參的滲濾浸膏>過大孔樹脂分離后的30%乙醇組分>過大孔樹脂分離后的90%乙醇組分。其中以過大孔樹脂分離的60%乙醇組分為玄參降糖活性的主要活性部位,而過大孔樹脂分離的30%乙醇組分和過大孔樹脂分離的90%乙醇組分的降糖活性較差。

圖1 玄參中粗提物對HepG2 細(xì)胞降糖活性的影響±s,n=3)Fig.1 Effect of different parts from Scrophularia ningpoensis Hemsley extracts on glucose consumption).注:30%、60%、90%乙醇部分是過大孔樹脂分離中 各洗脫的組分,與二甲雙胍相比,*p<0.05,**p<0.01。

在對各組分進(jìn)行了系統(tǒng)分離,而得到的9個化合物,其中蔗糖和二十七烷未用于細(xì)胞實驗的比較。從圖2可知,在0.1～2.5 μg/mL濃度下,各化合物對促進(jìn)HepG2細(xì)胞降糖的活性具有一定的劑量依賴關(guān)系,且在同一濃度時,各化合物的葡萄糖消耗能力為:化合物7(哈巴俄苷)的活性最強(qiáng),其次為化合物4、1、8,而3、2和6的活性較弱。

圖2 玄參中不同化合物對HepG2細(xì)胞 促進(jìn)葡萄糖消耗的影響±s,n=3)Fig.2 Effect of compounds from Scrophularia ningpoensis Hemsley ethanol extracts on glucose consumption注:與二甲雙胍組相比,*p<0.05,**p<0.01。

2.3 玄參提取物及單體對HepG2細(xì)胞增殖的影響

MTT法測定玄參中各組分和化合物對HepG2細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果見圖3和圖4。圖3結(jié)果表明,當(dāng)濃度大于0.1 mg/mL時,除過大孔樹脂分離的90%乙醇組分外,其余各藥物組均對細(xì)胞增殖有一定抑制作用,且作用顯著(p<0.05),這說明當(dāng)濃度超出一定范圍時,玄參中各組分對HepG2細(xì)胞消耗葡萄糖的促進(jìn)作用均受到抑制,其細(xì)胞毒性較大,會抑制細(xì)胞的增殖。而結(jié)合圖1可知,對于90%乙醇組分,雖細(xì)胞毒性較小,但葡萄糖消耗能力較差,其組分的降糖效果最不明顯。當(dāng)濃度小于0.1 mg/mL時,60%乙醇組分的細(xì)胞存活率較好,而圖1中其葡萄糖消耗能力較高,再次說明了該組分為玄參降糖活性的主要活性部位。

圖3 玄參的浸膏中不同部分 對HepG2細(xì)胞增殖的影響Fig.3 Dose dependent cytotoxicity of different fractions of Scrophularia ningpoensis Hemsley extracts注:與空白對照組相比,*p<0.05,**p<0.01。

圖4結(jié)果表明,在0.1～2.5 μg/mL濃度下,化合物1～4,6～8的細(xì)胞存活率均較高。而從圖2和圖4可知,哈巴俄苷的葡萄糖消耗能力最高,對促進(jìn)HepG2細(xì)胞降糖的活性具有一定的劑量依賴關(guān)系。

圖4 玄參中不同化合物對HepG2 細(xì)胞增殖的影響Fig.4 Dose dependent cytotoxicity of different compound

哈巴俄苷在HepG2細(xì)胞中降糖活性為玄參中首次發(fā)現(xiàn),為進(jìn)一步研究玄參的物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了基礎(chǔ),但是單一某種細(xì)胞模型實驗并不能完全確定玄參中化學(xué)成分的降糖作用的影響,還需要結(jié)合體外的多種細(xì)胞實驗和體內(nèi)高糖動物實驗等來進(jìn)一步研究分子機(jī)制,同時,玄參中其它未分離的成分是否有較好的降糖作用也需進(jìn)一步的探討。

3 結(jié)論

本實驗對玄參70%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究,從中分離得到9個化合物,分別鑒定為類葉升麻苷、升麻素苷、桃葉珊瑚苷、哈巴苷、蔗糖、肉桂酸、哈巴俄苷、安格洛苷C、二十七烷。同時,采用人肝癌細(xì)胞HepG2建立了高糖細(xì)胞模型,分離的化合物對降糖的活性均具有不同程度的促進(jìn)作用,且在0.1～2.5 μg/mL濃度范圍內(nèi),哈巴俄苷在HepG2細(xì)胞中降糖活性最好。其中,二十七烷為首次從該屬植物中分離得到,哈巴俄苷是一個潛在的降糖化合物,值得進(jìn)一步研究和開發(fā)。

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Study on the separation of chemical componentsand hypoglycemic activity ofScrophularianingpoensisHemsl.

TIAN Jin-feng1,2,SHANG Yuan-hong1,LI Xue-gang2,*

(1. Key Laboratory of Dry-hot Valley Characteristic Bio-Resources Development at university ofSichuan Province,Panzhihua University,Panzhihua 617000,China;2.College of Pharmacetical Sciences,Southwest University,Chongqing EngineeringResearch Center for Pharmacodynamics Evaluation,Chongqing 400716,China)

This paper investigated the action of hydrophilic constituents fromScrophularianingpoensisHemsl. on glucose-lowering effect metabolism in HepG2 cells. The crude extract by diacolating with 70% ethanol was redissolved in water and was loaded on a glass column containing D101 macroporous resin,and was separated by silica gel column and HSCCC to obtain compounds. The structures of compounds were identified by1H and13C-NMR spectroscopic data,and cell assay was performed by MTT and Kit methods in high glucose model. Compounds were identified as acteoside(1),prim-O-glucosylcimifugin(2),aucubin(3),harpagide(4),D-(+)-sucrose(5),cinnamic acid(6),harpagoside(7),angroside C(8)and twenty-seven alkane(9). Antihyperglycemic activity of each compounds in 0.1～2.5 μg/mL concentration range was selected,and glucose consumption ability of harpagoside was the highest. Twenty-seven alkane was isolated from the genus ofScrophularianingpoensisHemsl. for the first time. Antihyperglycemic activity of compound 7 ofScrophularianingpoensiswould be potentialand rich resources for drug development.

ScrophularianingpoensisHemsl.;separation and identification;antihyperglycemic activity;harpagoside

2016-12-08

田金鳳(1981-)，女，博士，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)，E-mail：tjfasyh@163.com。

*通訊作者:李學(xué)剛(1964-)，男，博士，教授，研究方向：中藥，E-mail：shyh611@126.com。

四川省教育廳重點基金項目(14ZA0345,15ZA0370)；四川省高校重點實驗室開放基金項目(GR-2015-E-01,szjj2017-110)；攀枝花市社會發(fā)展科技計劃項目(2014TX-10-3,2016CY-S-10)；攀枝花學(xué)院博士科研啟動經(jīng)費項目(bkqj2015026,bkqj2015023)。

TS201.1

A

1002-0306(2017)13-0025-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.13.005