楊宣琴，趙園園，杜海燕，徐恩偉

食管鱗狀細(xì)胞癌中MTDH和c-myc的表達(dá)及意義

楊宣琴，趙園園，杜海燕，徐恩偉

目的 探討異黏蛋白(metadherin, MTDH)和c-myc基因在食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法 采用免疫組化法檢測(cè)78例ESCC、20例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和30例正常食管黏膜組織中MTDH和c-myc蛋白的表達(dá)。結(jié)果 MTDH和c-myc在ESCC組和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組中的陽性率高于正常食管黏膜組(P<0.01)，MTDH在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化的ESCC中高表達(dá)(P<0.05)。c-myc在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、浸潤(rùn)深的ESCC中高表達(dá)(P<0.05)，MTDH和c-myc表達(dá)與患者年齡、性別均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 MTDH和c-myc與食管癌前病變的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，MTDH和c-myc的協(xié)同作用共同參與ESCC的發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

食管腫瘤；鱗狀細(xì)胞癌；上皮內(nèi)瘤變；異黏蛋白；c-myc蛋白

食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，病死率較高。涉及多因素、多階段、多基因變異積累及相互作用的復(fù)雜過程，在分子水平上涉及眾多原癌基因、抑癌基因以及蛋白的改變。異黏蛋白(metadherin, MTDH)又名AEG-1、LYRIC或3D3，是近年來發(fā)現(xiàn)的癌基因。其在多種人類腫瘤組織中高表達(dá)，且被認(rèn)為與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良有關(guān)[1]。原癌基因c-myc可使細(xì)胞無限增殖，并能促進(jìn)細(xì)胞的分裂，與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)[2]。本文采用免疫組化法檢測(cè)78例食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)、20例癌旁高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及30例正常食管黏膜組織中MTDH和c-myc蛋白的表達(dá)，分析兩者在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選自山西省腫瘤醫(yī)院2012～2014年收治的78例未經(jīng)化放療、診斷明確的ESCC手術(shù)切除標(biāo)本，其中男性51例，女性27例；年齡40～77歲，平均58歲。≥60歲35例，<60歲43例；高分化13例，中分化45例，低分化20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。同時(shí)選擇同組病例癌旁20例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和30例正常食管黏膜組織作為對(duì)照。

1.2 方法 免疫組化檢測(cè)采用EnVision法。MTDH試劑盒購自廣州深達(dá)，c-myc試劑盒購自北京中杉金橋公司。取自石蠟包埋的ESCC組織，3 μm厚連續(xù)切片，65 ℃烤箱，15 min，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。脫水封固，鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判定 MTDH以細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，c-myc以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。陽性細(xì)胞數(shù)<10%或無陽性著色為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。臨床病理特征間指標(biāo)比較采用χ2檢驗(yàn)，指標(biāo)相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 MTDH和c-myc蛋白在ESCC組織中的表達(dá) 78例ESCC中MTDH和c-myc蛋白均過表達(dá)，陽性率分別為71.79%和61.53%，MTDH在正常食管黏膜組織、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、ESCC組織中的陽性率分別為6.67%、70.00%和71.79%，c-myc蛋白陽性率分別為3.33%、65.00%、61.53%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，MTDH和c-myc在上皮內(nèi)瘤變組及ESCC組的表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常食管黏膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而在上皮內(nèi)瘤變與ESCC組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2.2 MTDH和c-myc蛋白表達(dá)與ESCC臨床病理特征的關(guān)系 78例ESCC組織中，MTDH蛋白表達(dá)僅與ESCC分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，高分化者癌巢周邊瘤細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)，低分化者彌漫強(qiáng)表達(dá)，分級(jí)越高陽性率越高(P<0.05)，而與患者性別、年齡、浸潤(rùn)深度無關(guān)。c-myc蛋白在ESCC中的表達(dá)與MTDH相同，低分化者彌漫強(qiáng)表達(dá)(圖1～4)，c-myc在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、浸潤(rùn)深的ESCC中表達(dá)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MTDH和c-myc表達(dá)與患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05，表2)。

2.3 ESCC中MTDH與c-myc蛋白表達(dá)的相關(guān)性 ESCC組織中MTDH蛋白表達(dá)與c-myc蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.266，P<0.05，表3)。

3 討論

食管癌和其他惡性腫瘤一樣在多種致癌因素的作用下，部分組織細(xì)胞在基因水平上發(fā)生變化并失去原有的生長(zhǎng)調(diào)控能力，從而出現(xiàn)異常增生。MTDH是近年發(fā)現(xiàn)的癌基因，MTDH基因定位于8q22染色體，包含12個(gè)外顯子和11個(gè)內(nèi)含子，總長(zhǎng)度為85 482 bp。MTDH通過調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及相關(guān)基因的表達(dá)水平來促進(jìn)腫瘤的形成。MTDH通過PI3K/AKT、NF-κB、Wnt/β-catenin等信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，包括啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移以及提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物及放射線的耐受[3-5]。MTDH在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在多種腫瘤中呈過表達(dá)[6-8]。本實(shí)驗(yàn)顯示，MTDH在ESCC中陽性率為71.79%，高于癌旁正常食管黏膜組織(6.67%)，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而ESCC與高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示MTDH基因改變是ESCC發(fā)生的早期事件。其過表達(dá)在中低分化組中明顯高于高分化組，并與ESCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，提示MTDH表達(dá)與ESCC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)?？勺鳛樵u(píng)估ESCC惡性程度及轉(zhuǎn)移的指標(biāo)之一。c-myc基因是myc基因家族的重要成員之一， myc基因參與細(xì)胞凋亡，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[9-11]。雖然c-myc基因的確切功能尚未完全明確，但有研究表明c-myc蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，當(dāng)其不受調(diào)節(jié)過表達(dá)時(shí)，就會(huì)單獨(dú)或與其他因素協(xié)同引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)中c-myc在高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及ESCC組的陽性率(65.00%、61.53%)高于正常食管黏膜組(3.33%)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示c-myc基因異常表達(dá)與食管癌的形成有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示c-myc在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化差、浸潤(rùn)深的ESCC中表達(dá)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示c-myc基因異常表達(dá)可能與食管癌的分化、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

①②③④

圖1 c-myc在高分化食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，EnVision法 圖2 c-myc在低分化食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，EnVision法

圖3 MTDH在高分化食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，EnVision法 圖4 MTDH在低分化食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，EnVision法

表1 MTDH和c-myc在正常食管黏膜、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

與正常食管黏膜組相比，*P<0.01；與高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組相比，△P>0.05

表2 MTDH和c-myc蛋白表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

表3 MTDH和c-myc在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

在惡性腫瘤發(fā)生的癌基因研究中，許多學(xué)者提出了基因協(xié)同作用假說。他們認(rèn)為在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各階段，至少有2個(gè)或2個(gè)以上功能不同的異常激活的基因各自發(fā)揮不同作用，并在時(shí)間和空間上相互配合，協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞癌變。PI3K/AKT通路在調(diào)節(jié)MTDH表達(dá)方面起重要作用，MTDH是Ha-ras的下游目的基因，Ha-ras通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT通路導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子c-myc連接到MTDH啟動(dòng)子區(qū)域的E-BOX盒上，從而誘導(dǎo)MTDH轉(zhuǎn)錄。MTDH反過來激活PI3K/AKT信號(hào)通路，進(jìn)而在某些應(yīng)激情況下能起到抗凋亡、保護(hù)正常細(xì)胞的作用。c-myc可以誘導(dǎo)MTDH轉(zhuǎn)錄，MTDH同樣也可以誘導(dǎo)c-myc表達(dá)，進(jìn)一步增強(qiáng)致瘤作用[12-13]。本實(shí)驗(yàn)ESCC組織中MTDH蛋白表達(dá)與c-myc蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者協(xié)同作用，共同參與ESCC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。通過聯(lián)合檢測(cè)MTDH和c-myc在ESCC組織中的表達(dá)及其生物學(xué)特性，了解各個(gè)指標(biāo)之間的關(guān)聯(lián)性可為ESCC早期診斷、早期治療及判斷預(yù)后提供參考。

[1] Emdad L, Das S K, Dasqupta S,etal. AEG-1/MTDH/LYRIC:signaling pathways, downstream genes, interacting proteins, and regulation of tumor angiogenesis[J]. Adv Cancer Res, 2013,120:75-111.

[2] Fields W R, Desiderio J G, Putnam K P,etal. Quantification of chan-ges in cmyc mRNA levels in normal human bronchialep ithelial(NHBE) andlung adenocarcinoma (A549) cells following chemi-caltreatment[J]. Toxicol Sci, 2001,63(1):107-141.

[3] Emdad L, Lee S G, Su Z Z,etal. Astrocyte elevated gene-1(AEG-1) functions as an oncogene and regulates angiogenesis[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2009,106(50):21300-21305.

[4] Hu G, Chong R A, Yang Q,etal. MTDH activation by 8q22 genomic gain promotes chemorsistance and metastasis of poor-prognosis breast cancer[J]. Cancer Cell, 2009,15(1):9-20.

[5] Sarkar D, Emdad L, Lee S G,etal. Astrocyte elevated gene-1: far more than just a gene regulated in astrocytes[J]. Cancer Res, 2009,69(22):8529-8535.

[6] 蔣莉萍, 余海紅, 肖 鳳. MTDH在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 診斷病理學(xué)雜志, 2015,22(5):304-306.

[7] Kochanek D M, Wells D G. CPEB1 regulates the expression of MTDH/AEG-1 and glioblastoma cell migration[J]. Mol Cancer Res, 2013,11(2):149-160.

[8] Luparello C, Longo A, Vetrano M. Exposure to cadmium chloride influences astrocyte-elevated gene-1 (AEG-1) expression in MDA-MB231 human breast cancer cells[J]. Biochimie, 2012,94(1):207-213.

[9] Nair R, Roden D L, Teo W S,etal. c-Myc and Her2 cooperate to drive a stem-like phenotype with poor prognosis in breast cancer[J]. Oncogene, 2014,33(30):3992-4002.

[10] Khaleghian M, Shakoori A, Razavi A E,etal. Relationship of amplification and expression of the C-MYC gene with survival among gastric cancer patients[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2015,16(16):7061-7069.

[11] Li T, Tang L, Bian D,etal. Detection of hTERC and c-MYC genes in cervical epithelial exfoliated cells for cervical cancer screening[J]. Int J Mol Med, 2014,33(5):1289-1297.

[12] Lee S G, Jeon H Y, Su Z Z,etal. Astrocyte elevat ed gene-1 contributes to the pathogenesis of neuroblastoma[J]. Oncogene, 2009,28(26):2476-2484.

[13] Lee S G, Su Z Z, Emdad L,etal. Astrocyte elevated gene-1( AEG-1)is a target gene of oncogenic Ha-ras requiring phosphatidylinositol 3-kinase and c-Myc[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2006,103(46):17390-17395.

山西省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(2011043)

山西省腫瘤醫(yī)院病理科，太原 030013

楊宣琴，女，碩士，副主任醫(yī)師。E-mail: yxq6622@163.com 徐恩偉，男，碩士，副主任醫(yī)師，通訊作者。E-mail: xewcn@qq.com

時(shí)間：2017-6-20 11:18 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.021.html

R 735.1

A

1001-7399(2017)06-0680-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.021

接受日期：2017-02-17