別立莉 王姣杰 單泓 李建斌

(河南省紅十字血液中心 河南 鄭州 450012)

懸浮紅細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的影響

別立莉 王姣杰 單泓 李建斌

(河南省紅十字血液中心 河南 鄭州 450012)

目的 探討懸浮紅細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的影響，為安全輸血提供理論依據(jù)。方法 將用于制備洗滌紅細(xì)胞的懸浮紅細(xì)胞按保存時(shí)間進(jìn)行分組，0～7 d內(nèi)為A組，7～14 d為B組，14～21 d為C組，21～28 d為D組，28～35 d為E組，每組按要求隨機(jī)選擇30袋，分別檢測(cè)每組洗滌紅細(xì)胞容量、紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞去除率、血漿蛋白清除率、血漿游離血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量、血紅蛋白含量、溶血率，同時(shí)檢測(cè)每組血液洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)。結(jié)果 A組和B組洗滌紅細(xì)胞的白細(xì)胞去除率相對(duì)較高，與C、D、E組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； A、B組溶血率與C、D、E組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞變形能力逐漸降低，A、B組與C、D、E組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，制備前的懸浮紅細(xì)胞與洗滌紅細(xì)胞D組和E組的紅細(xì)胞變性能力相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 懸浮紅細(xì)胞保存時(shí)間對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量有較大影響，洗滌紅細(xì)胞的上清蛋白質(zhì)含量和溶血率隨其制備原料紅細(xì)胞保存時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，紅細(xì)胞變形能力隨其制備原料紅細(xì)胞保存時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，建議使用不超過(guò)14 d的懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞。

懸浮紅細(xì)胞；儲(chǔ)存時(shí)間；洗滌紅細(xì)胞；質(zhì)量影響

洗滌紅細(xì)胞是臨床常用的紅細(xì)胞制品之一，可由保質(zhì)期內(nèi)的全血或懸浮紅細(xì)胞用等滲溶液洗滌3～6次，去除幾乎所有血漿成分和部分非紅細(xì)胞成分制備而成。臨床主要用于血漿蛋白過(guò)敏、非溶血性發(fā)熱反應(yīng)、高鉀血癥、腎功能不全等患者的輸血。當(dāng)前根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《全血及成分血質(zhì)量要求》(GBl8469-2012)，洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量控制項(xiàng)目分為外觀、容量、血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量、溶血率、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)[1]。對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞起始血液的要求，國(guó)標(biāo)僅規(guī)定使用保存期內(nèi)的全血或懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞，并未對(duì)起始血液的儲(chǔ)存時(shí)間進(jìn)行規(guī)定。研究證實(shí)離體后的紅細(xì)胞在保存期間隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞會(huì)有不同程度的儲(chǔ)存損傷，而不同保存時(shí)間對(duì)洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量是否有影響，目前報(bào)道較少。為此，本研究自2015年6月開(kāi)始對(duì)不同保存期的懸浮紅細(xì)胞制備的洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行了質(zhì)量檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 選取河南省紅十字血液中心2015年6月至2016年6月期間庫(kù)存懸浮紅細(xì)胞(保存期內(nèi)，規(guī)格2 U)，四聯(lián)袋生理鹽水(廠家：山東威高)，大容量低溫離心機(jī)，無(wú)菌接駁機(jī)，熱合機(jī)，電子秤，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，血漿游離血紅蛋白試劑盒，腦脊液與尿蛋白測(cè)定試劑盒(終點(diǎn)法；北京利德曼公司)，BL88-C型激光衍射紅細(xì)胞變形儀(天津)。

1.2 研究方法 把洗滌紅細(xì)胞原料血按不同儲(chǔ)存期分組，0～7 d內(nèi)為A組，7～14 d為B組，14～21 d為C組，21～28 d為D組，28～35 d為E組。每組按要求隨機(jī)選擇30袋。每袋懸浮紅細(xì)胞洗滌前稱重并留取小樣，同時(shí)記錄保存時(shí)間。洗滌紅細(xì)胞制備：按照血液中心洗滌紅細(xì)胞操作規(guī)程，將保存期內(nèi)2 U的懸浮紅細(xì)胞用無(wú)菌接駁機(jī)與四聯(lián)袋生理鹽水對(duì)接后，向懸浮紅細(xì)胞內(nèi)1次加入200 ml生理鹽水，邊加邊輕輕搖動(dòng)混勻，卡上止流夾，然后平衡，離心。離心條件：1 950 g，5 min，4 ℃。離心后，輕輕取出血袋放置在分漿夾上，打開(kāi)止流夾，把上清及白膜層轉(zhuǎn)移至廢液袋內(nèi)，卡上止流夾，然后再向血袋內(nèi)加入生理鹽水200 ml，重復(fù)上述步驟。依次洗滌3次后，按國(guó)標(biāo)規(guī)定2 U紅細(xì)胞加入100 ml生理鹽水，混勻后熱合斷離并留足樣管。每袋洗滌紅細(xì)胞終產(chǎn)品稱重并留取小樣。檢測(cè)方法：電子秤測(cè)量洗滌前后紅細(xì)胞質(zhì)量；全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)每袋懸浮紅細(xì)胞洗滌前后紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，紅細(xì)胞壓積，血紅蛋白含量；血漿游離血紅蛋白試劑盒檢測(cè)游離血紅蛋白濃度；上清蛋白質(zhì)濃度測(cè)定參考《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》中“腦脊液總蛋白測(cè)定”[2]，根據(jù)上述有關(guān)數(shù)據(jù)計(jì)算溶血率；采用BL88-C 型激光衍射紅細(xì)胞變形儀，通過(guò)激光衍射不同切應(yīng)力下紅細(xì)胞變形的衍射環(huán)，測(cè)出衍射環(huán)的橫徑(a)和縱徑(b)，計(jì)算出紅細(xì)胞變形指數(shù)DI=b/a，DI越高說(shuō)明變形能力越強(qiáng)，反之則變形能力弱。

2 結(jié)果

2.1 洗滌紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞去除率和血漿蛋白清除率 5組洗滌紅細(xì)胞回收率及血漿蛋白清除率相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組和B組白細(xì)胞去除率相對(duì)較高，與C、D、E組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；C、D、E組白細(xì)胞去除率相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 5組洗滌紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞去除率、血漿蛋白清除率比較±s，%)

注：與A組、B組比較，aP<0.05。

2.2 洗滌紅細(xì)胞的容量、血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量和溶血率 5組洗滌紅細(xì)胞的容量相似，都在國(guó)標(biāo)范圍內(nèi)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5組血紅蛋白含量都符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A、B組上清蛋白質(zhì)含量相對(duì)較低，但各組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A、B組溶血率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A、B組與其他各組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；D組和E組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；C組與D、E組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 5組洗滌紅細(xì)胞的容量、血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量和溶血率比較±s)

注：與A組、B組相比，bP<0.05；與C組相比，cP<0.05。

2.3 紅細(xì)胞變形能力 隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，懸浮紅細(xì)胞中的紅細(xì)胞變形能力逐漸降低，但A、B兩組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A、B組與其他各組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。D組和E組洗滌前后相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 5組洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)變化±s)

3 討論

一般手工洗滌紅細(xì)胞制品中白細(xì)胞去除率>80%、血漿去除率>90%，還可以去除絕大部分紅細(xì)胞儲(chǔ)存期間產(chǎn)生的細(xì)胞活性因子和血鉀、乳酸等對(duì)受血者不利的成分，因此，洗滌紅細(xì)胞是一種相對(duì)更加安全的血液制品。對(duì)洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量控制，新國(guó)標(biāo)《全血及成分血質(zhì)量要求》(GBl8469-2012)將舊國(guó)標(biāo)GBl8469-200l中的紅細(xì)胞回收率、血漿蛋白清除率分別改變?yōu)槌善废礈旒t細(xì)胞的血紅蛋白含量和上清蛋白質(zhì)含量，取消了對(duì)白細(xì)胞清除率的要求，同時(shí)增加了溶血率<0.8%的規(guī)定。對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞起始血液的要求，國(guó)標(biāo)僅規(guī)定使用保存期內(nèi)的全血或懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞，并未對(duì)起始血液的儲(chǔ)存時(shí)間進(jìn)行規(guī)定。研究證實(shí)血液在儲(chǔ)存過(guò)程中由于受多種因素的影響，其形態(tài)、功能和生物化學(xué)等方面均發(fā)生不同程度的變化，且隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)變化更加顯著，這些變化統(tǒng)稱為紅細(xì)胞“儲(chǔ)存損傷”[3]。儲(chǔ)存損傷會(huì)影響血液的質(zhì)量、降低紅細(xì)胞運(yùn)輸和釋放氧的能力、促進(jìn)潛在有害中間產(chǎn)物的產(chǎn)生，給臨床輸血帶來(lái)安全隱患[4]。

本研究為了更加全面的了解懸浮紅細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的影響，自2015年6月開(kāi)始將血液中心制備的洗滌紅細(xì)胞，按起始血液保存時(shí)間的長(zhǎng)短進(jìn)行分組，每組按要求隨機(jī)選擇30袋，分別檢測(cè)各組洗滌前后全部新國(guó)標(biāo)要求的洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量控制指標(biāo)，同時(shí)還檢測(cè)了紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞清除率和紅細(xì)胞變形能力，結(jié)果提示各個(gè)組的紅細(xì)胞回收率及血漿蛋白清除率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A組白細(xì)胞清除率相對(duì)較高，與C、D、E組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；李美霖等[5]分別用保存7、14、21、28、35 d的懸浮紅細(xì)胞為原料血制備洗滌紅細(xì)胞，結(jié)果表明隨懸浮紅細(xì)胞保存時(shí)間的延長(zhǎng)，其制備的洗滌紅細(xì)胞的溶血率和上清蛋白質(zhì)含量均呈上升趨勢(shì)，從而建議使用保存期14 d內(nèi)的原料血制備洗滌紅細(xì)胞。研究報(bào)道隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞的脆性增大，在制備過(guò)程中，由于機(jī)械碰撞破壞紅細(xì)胞，易造成溶血[6]。有研究表明保存15 d以后的全血制備的洗滌紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常變化，出現(xiàn)棘形紅細(xì)胞，囊泡化后的紅細(xì)胞易溶血，紅細(xì)胞壽命縮短，影響洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量，認(rèn)為保存10 d內(nèi)的全血最佳[7]。本研究提示保存14 d以上的懸浮紅細(xì)胞制備的洗滌紅細(xì)胞溶血率明顯高于14 d以內(nèi)的庫(kù)存血組。洗滌紅細(xì)胞的制備過(guò)程中因?yàn)楂I(xiàn)血者個(gè)體差異、洗滌的方法和步驟不同、制備人員的操作差異等均可能對(duì)洗滌紅細(xì)胞的溶血率產(chǎn)生影響。制備洗滌紅細(xì)胞時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程，注重細(xì)節(jié)，從離心力的選擇，到所用生理鹽水的溫度等，最終各組洗滌紅細(xì)胞均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

變形性是紅細(xì)胞的重要特性，其變化直接影響著各種紅細(xì)胞制品的質(zhì)量。庫(kù)存血隨保存時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)影響血液的流變特性，特別是對(duì)紅細(xì)胞(RBC)的變形性和聚集性的影響，導(dǎo)致血液質(zhì)量下降，使回輸后效果降低，也可導(dǎo)致輸血者出現(xiàn)凝血機(jī)制的變化。王竹筠等[8]在研究血液保存時(shí)間對(duì)庫(kù)存血流變特性的影響中提示隨庫(kù)存血保存時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)對(duì)全血黏度、血漿黏度、RBC變形性及聚集性產(chǎn)生重要影響，特別是在第3周出現(xiàn)非常顯著變化，RBC變形性的降低影響RBC的運(yùn)氧功能，通過(guò)毛細(xì)血管時(shí)易遭破壞，降低了輸血效果，從流變學(xué)角度考慮庫(kù)存血在2周內(nèi)使用更好。本研究結(jié)果提示，A組與B組洗滌紅細(xì)胞的變形指數(shù)明顯高于C、D、E組，表明隨著原料血儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞變形能力逐漸降低，洗滌紅細(xì)胞制品有相似變化，與上述報(bào)道結(jié)論一致；對(duì)洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)比較，發(fā)現(xiàn)D組和E組洗滌前后相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這可能與制備洗滌紅細(xì)胞的起始血液儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)，在制備洗滌紅細(xì)胞過(guò)程中紅細(xì)胞更易受損傷有關(guān)。

總之，懸浮紅細(xì)胞保存時(shí)間對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量有較大影響，洗滌紅細(xì)胞的上清蛋白質(zhì)含量和溶血率隨其制備原料紅細(xì)胞保存時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，紅細(xì)胞變形能力隨其制備原料紅細(xì)胞保存時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，建議使用不超過(guò)14 d的懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞，以免影響臨床輸血效果。

[1] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB18469-2012 全血及成分血質(zhì)量要求[M].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第1版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:342-344．

[3] Hess J R.Red cell changes during storage[J]. Transfus Apher Sci,2010,43(1):51-59.

[4] Zubair A C.Clinical impact of blood storge lesions[J]. An J Hematol,2010,85(2):117-122.

[5] 李美霖,段錦,麻靜敏,等.不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備洗滌紅細(xì)胞效果分析[J].河北醫(yī)藥,2015, 37(18):2752-2756.

[6] 胡文娟,曾四海,蘇紅,等.提高聯(lián)袋封閉式洗滌紅細(xì)胞制品質(zhì)量的體會(huì)[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012,18(5):146.

[7] 王愛(ài)梅,梁文華,王群,等.不同保存期全血制備洗滌紅細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2004,6(3):173-176．

[8] 王竹筠,滕本秀.血液保存時(shí)間對(duì)庫(kù)存血流變特性的影響[J].中國(guó)血液流變學(xué)雜志,1999,9(2):3-5.

The quality effect of suspended red blood cells storage time on the preparation of washed red blood cells

Bie Lili，Wang Jiaojie，Shan Hong，Li Jianbin

(HenanProvincialRedCrossBloodCenter，Zhengzhou450012，China)

Objective To explore the quality effect of suspended red blood cells (SRBCs) storage time on the preparation of washed red blood cells (WRBCs), and provide theoretical basis for safe blood transfusion.Methods According to the storage time, SRBCs were divided into 5 groups: A(0～7 d), B(7～14 d), C(14～21 d), D(21～28 d), E(28～35 d). Then, 30 bags of SRBCs were randomly selected from each group and prepared into WRBCs. Finally, red blood cells volume, red blood cell recovery rate, white blood cell removal rate, plasma protein clearance rate, plasma free hemoglobin, supernatant protein, hemoglobin, hemolytic rate and erythrocyte deformation index were measured.Results White blood cell removal rates of group A and B were significantly higher than that of C, D and E(P<0.05). The hemolytic rates were significantly different between group A,B and C, D, E(P<0.05). With the storage time, the red blood cell deformation ability gradually decreased, and there was statistically difference between group A, B and C, D, E(P<0.05). Erythrocyte deformation index SRBCs and WRBCs of group D, E was significantly different(P<0.05).Conclusion SRBCs storage time has a great impact on the quality of WRBCs. With the prolonging of SRBCs storage time, supernatant protein and hemolytic rate are increased and erythrocyte deformation index is reduced, so it suggests that the SRBCs are no more than 14 days.

suspended red blood cells；storage time；washed red blood cells；quality effect

R 457.1

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.10.003

2017-03-13)