何衛(wèi)社 劉樂霞 王德平 李國榮 馮麗娜 張燕

楊茂 鄧曉琴 田智 楊永紅 薛薇

街頭采血應(yīng)用膠體金標(biāo)法快速檢測HBsAg漏檢原因分析

何衛(wèi)社 劉樂霞 王德平 李國榮 馮麗娜 張燕

目的 分析膠體金標(biāo)法快速檢測HBsAg漏檢原因，以采取措施減少因HBsAg漏檢造成的血液報(bào)廢。方法 采用膠體金標(biāo)法復(fù)檢ELISA試劑檢測出的HBsAg陽性標(biāo)本，分析復(fù)檢情況，并對兩種方法進(jìn)行比較。結(jié)果 對57 480份標(biāo)本采用兩種ELISA試劑檢測出HBsAg陽性標(biāo)本319份，街頭HBsAg陽性漏檢率為0.55%；膠體金標(biāo)法復(fù)核319份標(biāo)本，陽性158份，占總漏檢標(biāo)本的49.5%；ELISA法陽性檢出率與膠體金標(biāo)法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。結(jié)論 街頭采血應(yīng)用膠體金標(biāo)法漏檢HBsAg的主要原因是方法學(xué)限制和人為因素，血站應(yīng)加強(qiáng)員工崗位技能、責(zé)任心的培訓(xùn)，制定質(zhì)量目標(biāo)，定期考核監(jiān)督，獎(jiǎng)懲并進(jìn)，降低漏檢造成的血液報(bào)廢。

街頭采血 膠體金標(biāo)法 HBsAg 漏檢

我國是乙型肝炎高度流行區(qū)，一般人群HBsAg攜帶率約9.09 %[1]。血站采用膠體金標(biāo)法快速檢測HBsAg對降低街頭采血的報(bào)廢率至關(guān)重要，但在快速篩查時(shí)仍會出現(xiàn)HBsAg 陽性漏檢?，F(xiàn)就血站街頭采血應(yīng)用膠體金標(biāo)法快速檢測HBsAg的漏檢原因進(jìn)行分析。

材料與方法

1 材料 膠體金標(biāo)法快速檢測HBsAg陰性的街頭無償獻(xiàn)血者標(biāo)本57 480人份。

2 儀器 AE380全自動(dòng)酶免分析儀；EVO全自動(dòng)一次性針加樣儀；FAMA24/20 后處理系統(tǒng)。

3 試劑 英科新創(chuàng)科技有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑（膠體金法），出廠及進(jìn)站質(zhì)量抽檢均合格，在有效期內(nèi)使用；ELISA試劑盒分別由索靈診斷醫(yī)療設(shè)備有限公司和珠海麗珠試劑股份有限公司提供，中國食品藥品檢定研究院批批檢和進(jìn)站質(zhì)量抽檢均合格，在有效期內(nèi)使用。

4 方法 嚴(yán)格按試劑說明書操作。對57 480份標(biāo)本經(jīng)兩種ELISA試劑檢測陽性的標(biāo)本，采用膠體金標(biāo)法進(jìn)行復(fù)測，記錄ELISA試劑S/CO值、膠體金標(biāo)法檢測結(jié)果以及陽性標(biāo)本檢測線出現(xiàn)時(shí)間。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0軟件包，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

結(jié)果

1 57 480份標(biāo)本用兩種ELISA試劑檢測出HBsAg陽性標(biāo)本319份，街頭HBsAg陽性漏檢率為0.55%；

2 采用膠體金標(biāo)法復(fù)核319份標(biāo)本，陽性158份，占總漏檢標(biāo)本的49.5%。10 min內(nèi)檢出陽性結(jié)果150份，占總漏檢標(biāo)本的47.0%，檢測線出現(xiàn)清晰的紅色，S/CO值均在27以上；10 min以后出現(xiàn)陽性結(jié)果的8份，檢測線出現(xiàn)淡淡的紅色，S/CO值在10~25；膠體金標(biāo)法復(fù)核陰性161份，占總漏檢標(biāo)本的50.5%，其中6份 S/CO值在29以上，余下S/ CO值均在1~10。

3 ELISA法陽性檢出率與膠體金標(biāo)法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=88.0（P＜0.001），見表1。

表1 膠體金標(biāo)法復(fù)檢與ELISA檢測結(jié)果比較

4 1~12月份膠體金法HBsAg漏檢情況見圖1，其中1~3月份和10~12月份平均漏檢率分別是0.66%、0.69%，均高于其他月份。

圖1 不同月份膠體金法HBsAg漏檢情況

討 論

采用膠體金標(biāo)法檢測HBsAg具有快速、操作簡單、準(zhǔn)確率高、無需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于血液采集前端篩查。血站通過獻(xiàn)血前使用膠體金法檢測HBsAg 篩選獻(xiàn)血者后采血，HBsAg陽性率控制在0.55 %，有效降低了無償獻(xiàn)血采集后的大量血液報(bào)廢。膠體金標(biāo)法因試劑靈敏度、檢測方法和人為觀察誤差的限制，存在一定的漏檢率［2］。漏檢原因主要是：①試劑本身缺陷，占漏檢總數(shù)的50.5%。HBsAg膠體金標(biāo)法adr、adw、ay三個(gè)亞型最低檢出量不高于2.5 ng/ml（約4 IU/ ml），《中國生物制品規(guī)范》要求HBsAg ELISA法adr、adw、ay三個(gè)亞型最低檢出量（IU/ml）分別不高于0.1、 0.1、 0.2，膠體金法最低檢出量低于ELISA法近20~40倍，其靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于ELISA法，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ELISA法陽性檢出率與膠體金標(biāo)法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另試劑包被片段不同或少數(shù)標(biāo)本可能存在HBV變異或者亞型導(dǎo)致陽性標(biāo)本漏檢，6份 S/CO值在29以上的標(biāo)本，膠體金標(biāo)法復(fù)檢仍為陰性，應(yīng)是此原因造成的。②人為因素。責(zé)任心不足，培訓(xùn)不到位，尤其是新進(jìn)員工的培訓(xùn)。試驗(yàn)操作未嚴(yán)格遵循說明書，如觀察時(shí)間不足，加樣不規(guī)范，加樣量不足，試劑貯存不當(dāng)受潮，檢測多個(gè)標(biāo)本時(shí)標(biāo)識不到位等，影響結(jié)果的正確判斷。③環(huán)境因素。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1~3月份和10~12月份平均漏檢率分別是0.66%、0.69%，均高于其他月份，環(huán)境溫度低、濕度大，導(dǎo)致反應(yīng)時(shí)間長，造成漏檢。

通過上述漏檢原因分析，血站應(yīng)采取切實(shí)有效的措施降低HBsAg的漏檢。①加強(qiáng)操作人員責(zé)任心、崗位技能培訓(xùn)，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間，在溫度較低情況下可以適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間，試劑貯存注意防潮，標(biāo)本和HBsAg試紙條進(jìn)行唯一性標(biāo)識，防張冠李戴。②根據(jù)較強(qiáng)陽性及強(qiáng)陽性的S/CO值試驗(yàn)數(shù)據(jù)測算本站HBsAg試劑漏檢率，為采血部門制定量化考核質(zhì)量目標(biāo)，監(jiān)管職能科室加強(qiáng)考核監(jiān)督，定期考核獎(jiǎng)懲并進(jìn)。③改善采血車上的環(huán)境，使車上溫度和濕度盡量保持在適合試劑反應(yīng)的最佳狀態(tài)。④做好試劑的質(zhì)控把關(guān)。同時(shí)廠家也應(yīng)加強(qiáng)試劑的改進(jìn)，提高靈敏度，更適于街頭采血。

有報(bào)道采用膠體金標(biāo)法檢測HBsAg強(qiáng)陽性的S/ CO值均在25以上，較強(qiáng)陽性的S/CO值在9~25［3］，我們試驗(yàn)中較強(qiáng)陽性及強(qiáng)陽性的S/CO值均在27以上，與報(bào)道不符，可能與HBsAg不同滴度的人群分布有關(guān)，也與實(shí)驗(yàn)室的檢測系統(tǒng)不一樣有關(guān)。建議每個(gè)血站通過摸索本血站的較強(qiáng)陽性及強(qiáng)陽性HBsAg的S/CO值，量化制定適合自己血站的街頭HBsAg試劑漏檢率，不要照抄照搬。陽性標(biāo)本的S/CO值在10以下時(shí)，膠體金標(biāo)法與ELISA法陰性標(biāo)本檢測結(jié)果的一致性為100%，與楊俊鴻等報(bào)道相符［3］。

1 倪語星，尚紅.臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：445.

2 韓建國. HBsAg全血金標(biāo)法檢測漏檢原因分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2003，5（3）：206.

3 楊俊鴻，彭楷，劉加偉，等.單采血小板乙型肝炎病毒表面抗原快速檢測的漏檢分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（16）：2275-2276.

（本文編輯：姚萍）

·儀器評價(jià)·

國產(chǎn)METIS 150全自動(dòng)血型儀參數(shù)優(yōu)化與性能驗(yàn)證

楊茂 鄧曉琴 田智 楊永紅 薛薇

【摘 要】 目的 對國產(chǎn)METIS 150全自動(dòng)血型儀進(jìn)行試驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化和性能驗(yàn)證。方法 用已知血型標(biāo)本，分別對標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋法、紅細(xì)胞懸液加量、試劑紅細(xì)胞加量、抗-A/抗-B/抗-D稀釋倍數(shù)及加量、標(biāo)本血漿加量等可選參數(shù)進(jìn)行預(yù)選，以結(jié)果正確率最高為依據(jù)確定優(yōu)化參數(shù)；優(yōu)化血型儀參數(shù)后，用已知標(biāo)本對ABO定型和Rh（D）篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性和方法敏感性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 離心條件、反應(yīng)溫度、振蕩方式、吸液、注液、洗針等六項(xiàng)廠家推薦參數(shù)適當(dāng)；標(biāo)本紅細(xì)胞12 μl+300 μl鹽水制備懸液，25 μl/孔紅細(xì)胞懸液+25 μl抗-A、抗-B原液，正定型結(jié)果正確率可達(dá)100%；25 μl/孔紅細(xì)胞懸液和1∶10稀釋抗-D 25 μl/孔，Rh（D）篩查結(jié)果正確率可達(dá)100%；血漿70 μl/孔+試劑紅細(xì)胞25 μl/孔，反定型結(jié)果正確率可達(dá)100%。參數(shù)優(yōu)化后，ABO定型和Rh（D）篩查結(jié)果準(zhǔn)確率達(dá)100%，4份A2B亞型定型正確，4份疑難血型提示結(jié)果疑問，1年時(shí)間檢測全部獻(xiàn)血者標(biāo)本30 694份血型結(jié)果無錯(cuò)誤。結(jié)論 參數(shù)優(yōu)化后，METIS 150血型儀檢測血型的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于臨床供血標(biāo)本的血型檢測。

【關(guān)鍵詞】 ABO血型 Rh（D） 全自動(dòng)血型儀 試驗(yàn)參數(shù) 性能驗(yàn)證

ABO血型和RH（D）血型是獻(xiàn)血者血液檢測規(guī)定項(xiàng)目[1]。傳統(tǒng)的血型檢測方法主要有玻板法和試管法等，近年來微板法血型檢測技術(shù)應(yīng)用增多。微板法結(jié)合數(shù)字成像技術(shù)研發(fā)的全自動(dòng)血型儀，具有批量處理標(biāo)本、敏感性高、自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，在血站實(shí)驗(yàn)室得到廣泛應(yīng)用[2，3]。全自動(dòng)血型檢測方法可標(biāo)準(zhǔn)化、可溯源、可防范人為差錯(cuò)、適合計(jì)算機(jī)管理，已被法規(guī)[4]推薦使用。目前主流的全自動(dòng)血型儀多為開放系統(tǒng)，設(shè)備廠家僅向用戶推薦部分設(shè)備使用參數(shù)，一般不提供配套試劑，用戶可自選血型試劑。市售血型試劑尚未完全標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)備廠家無法詳盡提供對于特定試劑的針對性參數(shù)。商品化血型試劑多宣稱適用于各種檢測方法，少有提供適合全自動(dòng)血型儀使用的具體參數(shù)。這些原因使得不同用戶對相同血型儀的使用體驗(yàn)存在較大差別，甚至有截然不同的使用評價(jià)。本文以保證全自動(dòng)血型檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性為目的，對國產(chǎn)METIS 150全自動(dòng)血型儀進(jìn)行試驗(yàn)參數(shù)優(yōu)選和性能驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)告如下。

材料與方法

1 標(biāo)本

1.1 預(yù)選試驗(yàn)標(biāo)本：隨機(jī)選取已知血型血液標(biāo)本300份，含A型、B型、O型各90份，AB型30份，EDTA-K2抗凝，自然沉降2 h以上或1 000 r/min離心3 min，使紅細(xì)胞與血漿分界清楚。

1.2 少見血型標(biāo)本：已知A2B型4份，B3、A2B3、A3、AB3型各1份。

1.3 驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本：待檢獻(xiàn)血者血液標(biāo)本1 256份，含A型389份、B型352份、O型396份、AB型119份，其中Rh（D）陽性1 246份，初篩陰性10份。

1.4 性能驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本：血型儀投入使用后1年內(nèi)，檢測獻(xiàn)血者標(biāo)本30 694份。

2 試劑 抗-A、抗-B由上海血液生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)（批號20150102、20150611、20150918）；A、B、O紅細(xì)胞試劑由上海血液生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)（批號20155340、20155333、20165302、20165305、20165308、20165316、20165320、20165330、20165333）；抗-D由英國Millipore生產(chǎn)（批號BMH1305C、BMH1503D、BMA1302B）。

3 儀器

3.1 儀器：深圳愛康生產(chǎn)METIS 150全自動(dòng)血型儀，配套供應(yīng)12*8孔U-V底微孔試驗(yàn)板，一次性使用。

3.2 METIS 150血型儀工作原理：將標(biāo)本血漿和標(biāo)本紅細(xì)胞鹽水懸液自動(dòng)定量分配到12*8孔U-V底試驗(yàn)微孔，分別加入試劑紅細(xì)胞、抗-A、抗-B、抗-D試劑，經(jīng)混勻、離心、再振蕩混懸后，用

CCD數(shù)字成像儀掃描分析記錄各孔影像。紅細(xì)胞有凝集時(shí)，凝塊聚攏在U-V型微孔底中央呈“細(xì)胞扣”狀，無凝集則紅細(xì)胞均勻分散于微孔，凝集和不凝集分別呈現(xiàn)不同外觀，圖像識別處理器根據(jù)各試驗(yàn)孔成像情況判斷各孔凝集狀況（凝集+或不凝集-），計(jì)算機(jī)綜合正定型、反定型和Rh（D）凝集試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告最終血型。正、反定型結(jié)果相符，以A、B、O、AB報(bào)告，正、反定型結(jié)果不符則以血型疑問（結(jié)果？）報(bào)告。

4 方法

4.1 參數(shù)識別：試驗(yàn)參數(shù)分為固定參數(shù)與可優(yōu)化參數(shù)，離心條件、反應(yīng)溫度、振蕩方式、吸液、注液、洗針參數(shù)等按廠家推薦設(shè)置為固定參數(shù)。標(biāo)本血漿、抗血清和試劑紅細(xì)胞加量，標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋方法、紅細(xì)胞懸液加量為可優(yōu)化參數(shù)。

4.2 參數(shù)優(yōu)選：根據(jù)儀器成像儀的靈敏度、最適判讀的細(xì)胞凝集塊直徑、凝集法血型試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和廠家推薦，結(jié)合正交試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行試驗(yàn)參數(shù)預(yù)選。設(shè)置預(yù)選參數(shù)后，檢測預(yù)選試驗(yàn)標(biāo)本，選擇ABO正定型、反定型和Rh（D）正確率最高的參數(shù)作為優(yōu)選參數(shù)。

4.3 優(yōu)選參數(shù)驗(yàn)證：設(shè)置優(yōu)化參數(shù)后，用驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本驗(yàn)證血型檢測結(jié)果的正確率。

4.4 重復(fù)性試驗(yàn)：對1 256份驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本和8份少見血型標(biāo)本（A2B型4份，A2B3、B3、AB3、A3型各1份）隨機(jī)排序，于第1、4、7天重復(fù)檢測血型，記錄重復(fù)檢測正確率。

4.5 敏感性試驗(yàn)：用少見血型標(biāo)本（A2B型4份，B3、A2B3、A3、AB3型各1份），隨機(jī)插入驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本中盲試，記錄分析試驗(yàn)結(jié)果，驗(yàn)證血型儀對疑難血型檢出的敏感性。

4.6 性能驗(yàn)證試驗(yàn)：設(shè)置優(yōu)化參數(shù)后，統(tǒng)計(jì)分析1年內(nèi)使用血型儀對全部獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的血型檢測結(jié)果，驗(yàn)證血型儀的使用性能。

5 質(zhì)量控制 使用A、B、O型質(zhì)控標(biāo)本，檢測結(jié)果符合預(yù)期認(rèn)為試驗(yàn)有效。

6 數(shù)據(jù)分析處理 采用Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以血型結(jié)果正確率為評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可接受標(biāo)準(zhǔn)為常規(guī)標(biāo)本結(jié)果正確率100%，疑難標(biāo)本（正、反定型結(jié)果不符）疑問（結(jié)果？）提示率100%。標(biāo)本因素、人為因素等非儀器原因，以及與參數(shù)設(shè)置無關(guān)原因所致的錯(cuò)誤結(jié)果，統(tǒng)計(jì)時(shí)不計(jì)入錯(cuò)誤結(jié)果。

結(jié)果

1 正定型參數(shù)預(yù)選結(jié)果 據(jù)傳統(tǒng)的正定型試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，抗血清原倍使用凝集反應(yīng)更快（親和力更好），凝塊更大、更致密，考慮標(biāo)本紅細(xì)胞需用鹽水稀釋，反應(yīng)孔中已有較多量鹽水，所以預(yù)選試驗(yàn)時(shí)抗-A、抗-B使用原倍和1∶1、1∶5、1∶10、1∶20稀釋。儀器成像儀靈敏度為最小凝集點(diǎn)直徑1.5 mm，紅細(xì)胞凝塊聚攏后直徑2.5~3 mm最適合成像儀判讀，擬形成直徑2.5~3 mm紅細(xì)胞凝塊，2%~4%紅細(xì)胞懸液量約需25 μl，25 μl也在儀器最適分配量范圍內(nèi)。標(biāo)本紅細(xì)胞12 μl+生理鹽水300 μl混勻后，取25 μl懸液分配至試驗(yàn)孔，分別加抗-A、抗-B原液20 μl，形成的凝集塊大小、形狀和致密程度最適合血型儀判讀，用預(yù)選試驗(yàn)標(biāo)本測試，凝集孔均能100%被判定為凝集（+），不凝集孔內(nèi)紅細(xì)胞經(jīng)振蕩混懸后，也能100%被正確識別為不凝集（–）。

2 反定型參數(shù)預(yù)選結(jié)果 形成直徑2.5~3 mm凝集塊的紅細(xì)胞懸液量約需25 μl，所以選擇待檢血漿70 μl/孔，試劑紅細(xì)胞25 μl/孔。選此參數(shù)時(shí)，紅細(xì)胞凝塊在微孔底部聚攏直徑2.5~3 mm，可被成像儀正確識別為凝集（+），未凝集孔紅細(xì)胞經(jīng)振蕩混懸后也可被準(zhǔn)確識別為不凝集（–）。

3 Rh（D）參數(shù)預(yù)選結(jié)果 Rh（D）與ABO正定型同步檢測可優(yōu)化試驗(yàn)過程，縮短試驗(yàn)時(shí)間，所以Rh（D）選擇與正定型相同的標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋方法和懸液加量?？?D試劑以原倍和1∶1、1∶5、1∶10、1∶20稀釋，每孔分別加10 μl、15 μl、20 μl、25 μl、30 μl，正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，各種稀釋倍數(shù)和15 μl以上加量，Rh（D）陽性及陰性標(biāo)本結(jié)果準(zhǔn)確率均可達(dá)到100%。但試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抗-D過濃會因“攜帶污染”影響ABO定型試驗(yàn)結(jié)果，加量過小會影響加樣精密度，所以選擇1∶10稀釋抗-D，每孔加25 μl。用預(yù)選試驗(yàn)標(biāo)本對此預(yù)選參數(shù)反復(fù)測試，Rh（D）陽性和陰性標(biāo)本報(bào)告正確率均達(dá)100%。

4 可優(yōu)化參數(shù)預(yù)選試驗(yàn)結(jié)果見表1。

5 固定參數(shù)驗(yàn)證結(jié)果見表2，廠家推薦參數(shù)的驗(yàn)證結(jié)果理想，可設(shè)為固定參數(shù)。

6 參數(shù)優(yōu)選結(jié)果 在預(yù)試驗(yàn)結(jié)果正確率100%的預(yù)選參數(shù)中，綜合考慮儀器加樣模塊性能、分配誤差、“攜帶污染”、最優(yōu)及保險(xiǎn)原則后，優(yōu)選參數(shù)結(jié)果見表3。優(yōu)選參數(shù)與廠家推薦略有不同。

6 優(yōu)化參數(shù)驗(yàn)證結(jié)果 設(shè)置優(yōu)化參數(shù)后，于第1、4、7 d對隨機(jī)排序的1 256份驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本和8份少見血型標(biāo)本，重復(fù)檢測血型，ABO正、反定型和Rh（D）檢測試驗(yàn)結(jié)果全部正確。

7 敏感性試驗(yàn)結(jié)果 不同操作者對隨機(jī)插入驗(yàn)證試驗(yàn)標(biāo)本中的8份少見血型標(biāo)本進(jìn)行3次盲樣檢測，4份A2B檢測結(jié)果均正確判為AB型，符合中國藥典對A2B型的檢出要求，4份特殊標(biāo)本（B3、A2B3、A3、AB3型各1份）均因正、反定型結(jié)果不符判讀為疑問（結(jié)果？）。

表1 可優(yōu)化參數(shù)預(yù)選試驗(yàn)結(jié)果

表2 廠家推薦固定參數(shù)驗(yàn)證結(jié)果

8 性能驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 參數(shù)優(yōu)選后1年內(nèi)，對30 694份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本所作ABO正、反定型和Rh（D）試驗(yàn)結(jié)果全部正確，取代手工檢測方法后，未收到用血醫(yī)院對血站出庫血液血型結(jié)果錯(cuò)誤的報(bào)告，也未發(fā)現(xiàn)因嚴(yán)重乳糜、溶血、黃疸標(biāo)本導(dǎo)致血型檢測結(jié)果錯(cuò)誤。

表3 METIS 150參數(shù)優(yōu)選結(jié)果

討 論

準(zhǔn)確鑒定血型是臨床輸血安全的基礎(chǔ)，血站出庫血液血型須100%準(zhǔn)確，英國血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會（BCSH）文件《血型、抗體篩查和交叉配血新技術(shù)的評價(jià)、確認(rèn)和實(shí)施指南》明確要求對血型檢測系統(tǒng)，特別是非標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)進(jìn)行評價(jià)和確認(rèn)，確認(rèn)內(nèi)容包括設(shè)備參數(shù)、判定參數(shù)和試劑使用相關(guān)參數(shù)等。全自動(dòng)血型儀多為開放式系統(tǒng)，原理不盡相同，市售血型鑒定用抗血清效價(jià)和試劑紅細(xì)胞濃度多有不同，但設(shè)備廠家很少就特定試劑提供針對性參數(shù)，推薦參數(shù)多為設(shè)備自身參數(shù)和使用某種試劑的粗略參數(shù)。優(yōu)化設(shè)備參數(shù)，驗(yàn)證確認(rèn)設(shè)備性能，既是法規(guī)[4，5]要求，也是質(zhì)量保證的基礎(chǔ)，許多實(shí)驗(yàn)室都對所用血型儀參數(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證和優(yōu)化[2，6]。本文資料顯示血型儀試驗(yàn)參數(shù)會影響血型結(jié)果正確率，所以，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對所用血型儀進(jìn)行性能驗(yàn)證，以結(jié)果準(zhǔn)確為標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)化參數(shù)設(shè)置。

國產(chǎn)METIS 150血型儀使用96孔U-V形底微孔板為載體，用CCD數(shù)字成像儀判斷凝集反應(yīng)狀態(tài)，其試驗(yàn)原理和結(jié)果判定基礎(chǔ)仍為傳統(tǒng)的鹽水凝集試驗(yàn)。紅細(xì)胞上抗原與相應(yīng)抗血清反應(yīng)，使紅細(xì)胞相互凝集形成肉眼可見的凝塊，通過離心促進(jìn)細(xì)胞凝集，縮短試驗(yàn)時(shí)間，使凝塊更加致密。紅細(xì)胞凝集塊在微孔U-V形底部中央聚攏為“細(xì)胞扣”狀小圓點(diǎn)，未凝集紅細(xì)胞經(jīng)振蕩在試驗(yàn)孔內(nèi)散開為均勻一致的混懸態(tài)，凝集和不凝集有不同的外觀。凝集反應(yīng)的影響因素主要有抗原抗體比例、反應(yīng)時(shí)間、溫度、Ph值、電解質(zhì)等，相對于采用梯度微孔板作載體的自動(dòng)血型儀[6]而言，METIS 150血型儀原理簡單，更少受這些因素影響，不同凝集狀態(tài)的圖像區(qū)分度才是影響其結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素，所以參數(shù)選擇與其他原理血型儀[3]有所不同，本文以血型凝集試驗(yàn)特點(diǎn)和能被CCD成像儀準(zhǔn)確識別為主要參考進(jìn)行參數(shù)優(yōu)選。中國藥典《抗-A抗-B血型定型試劑（人血清）》[7]要求抗-A、抗-B應(yīng)檢出A2B和A2型，對鹽水凝集試驗(yàn)原理的方法而言，使用原倍抗血清或減少抗血清稀釋，增大血漿標(biāo)本加量時(shí)，理論上更有利于凝集反應(yīng)，所以本文參數(shù)優(yōu)化時(shí)注重考慮減少抗血清稀釋和保證紅細(xì)胞量適合成像儀判定凝集狀態(tài)，還充分考慮了設(shè)備性能，在儀器最適分配范圍內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本和試劑分配，以保證分配量的準(zhǔn)確性和精密度。METIS 150血型儀使用永久性鋼針，需要注意抗-D不稀釋或稀釋倍數(shù)過小可能出現(xiàn)加樣針“攜帶污染”影響ABO結(jié)果的現(xiàn)象。另外，試劑紅細(xì)胞濃度一般為2%~4%，更換紅細(xì)胞試劑時(shí)要考慮不同廠家或不同批號間存在的差異，應(yīng)注意凝集孔中“細(xì)胞扣”大小和無凝集孔外觀是否適合成像儀判讀，必要時(shí)應(yīng)調(diào)整試劑紅細(xì)胞用量。

優(yōu)選參數(shù)后，METIS 150血型儀用于獻(xiàn)血者血液標(biāo)本檢測，普通血型標(biāo)本ABO正、反定型和Rh（D）篩查結(jié)果正確率均達(dá)到100%，能準(zhǔn)確檢出常見亞型，正確提示疑難血型。本文結(jié)果驗(yàn)證確認(rèn)了國產(chǎn)METIS 150血型儀用于臨床供血標(biāo)本血型檢測的可行性，1年使用情況表明，前述優(yōu)化參數(shù)設(shè)置適當(dāng)，用METIS 150血型儀進(jìn)行獻(xiàn)血者標(biāo)本血型檢測能夠保證質(zhì)量。使用期間更換了多個(gè)批號試劑未更改參數(shù)，未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重乳糜、溶血、黃疸標(biāo)本導(dǎo)致的結(jié)果錯(cuò)誤，提示METIS 150血型儀參數(shù)適應(yīng)性良好，對試劑和標(biāo)本無苛刻要求。

參 考 文 獻(xiàn)

1 GB18467-2011.獻(xiàn)血者健康檢查要求.

2 孫波，曹丹，李文超，等.自動(dòng)輸血檢測分析系統(tǒng)OLYMPUS PK7300在血型試驗(yàn)中的參數(shù)設(shè)置[J].中國輸血雜志，2010，23（S1）：126.

3 賈俊杰，王瑞，劉亞慶，等.全自動(dòng)血型分析系統(tǒng)試驗(yàn)參數(shù)的評價(jià)與驗(yàn)證[J].中國輸血雜志，2014，27（4）：354.

4 中華人民共和國衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程[S].2015.

5 中華人民共和國衛(wèi)生部.血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范[S].

6 徐利紅，喻蕾，勵(lì)曉濤.Olympus PK7200血型儀血型檢測可靠性探討[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，17（34）：5377.

7 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：344-347.

（收稿日期：2016-11-26）

（本文編輯：姚萍）

R446.11 R512.6+2

A 【文章編號】 1671-2587（2017）03-0295-02

2016-10-22）

R457.1+1 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A

1671-2587（2017）03-0297-05

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.03.024

065000 河北省廊坊市人民醫(yī)院（何衛(wèi)社，王德平）；河北省滄州市中心血站（劉樂霞，李國榮，馮麗娜，張燕）

何衛(wèi)社（1966–），男，河北廊坊人，副主任技師，主要從事輸血工作，（Tel）18003368990（E-mail）tianwaiyoutian8270@sina.com。

DOI：10.3969/j.issn.1671-2587.2017.03.025

作者單位：614000 四川省樂山市中心血站

作者簡介：楊茂（1661–），男，四川樂山人，主管技師，主要從事血站管理工作，（E-mail）416161910@qq.com。

△共同第一作者，通訊作者：鄧曉琴（1963–），女，主任技師，學(xué)士，從事血液檢測和實(shí)驗(yàn)室管理，（Tel）13183630928（E-mail）1030033968@qq.com。