郭 穎,祝鵬宇,孫穎哲,孫遠(yuǎn)征,趙廣然,武 丹,劉彥麟

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

夾脊電針對(duì)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響*

郭 穎,祝鵬宇,孫穎哲,孫遠(yuǎn)征△,趙廣然,武 丹,劉彥麟

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

目的：觀察夾脊電針對(duì)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響。方法：本實(shí)驗(yàn)以ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，選用經(jīng)PCR鑒定的ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠24只，按照隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠隨機(jī)分為電針組、手針組和模型組(均n=8只)，取同窩野生型小鼠8只作為陰性對(duì)照組。于小鼠日齡60天開(kāi)始干預(yù)，電針組針刺雙側(cè)L1～2、L5～6夾脊穴，軀干同側(cè)2 Hz電針治療；手針組針刺雙側(cè)L1～2、L5～6夾脊穴；模型組予以捆綁固定,20 min/次，2次/周，共4周；陰性對(duì)照組不做任何處置。于小鼠日齡120天時(shí)取腰膨大組織進(jìn)行HE染色和尼氏染色來(lái)觀察各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體及胞核的狀態(tài)并對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù)，透射電鏡觀察腰髓前角神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：HE染色可見(jiàn)模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清、固縮，胞質(zhì)胞核染色不清，核固縮，出現(xiàn)空泡狀改變；與模型組比較，手針組和電針組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目增多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)有所改善，空泡化減少，且電針組效果優(yōu)于手針組。尼氏染色可見(jiàn)模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，非神經(jīng)細(xì)胞增多，病變的神經(jīng)元出現(xiàn)尼氏體不清，核固縮，細(xì)胞體積減??；與模型組比較，手針組和電針組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目增多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)有所改善，能夠明顯減輕運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失，且電針組效果優(yōu)于手針組。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)：模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P<0.01)；手針組和電針組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組增多(P<0.05或P<0.01)，且電針組較手針組增多更明顯(P<0.05)。透射電鏡可見(jiàn)模型組小鼠腰髓前角神經(jīng)細(xì)胞萎縮，細(xì)胞膜皺縮，線粒體不同程度腫脹，嵴出現(xiàn)斷裂、減少，有些線粒體雖可辨認(rèn)，但已呈空泡狀，核膜凹陷變形或部分破裂，異染色質(zhì)聚集成塊，變性的神經(jīng)細(xì)胞周圍可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞圍繞形成衛(wèi)星現(xiàn)象；與模型組比較，手針組和電針組小鼠腰髓前角神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有所改善，且電針組改善更明顯。結(jié)論：夾脊電針能夠改善ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化，其效果優(yōu)于手針治療。

夾脊;電針；ALS-SOD1G93A；尼氏染色；電鏡

肌萎縮側(cè)索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病中最常見(jiàn)的一種類型，病變主要累及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元而出現(xiàn)范圍頗為廣泛的肌肉無(wú)力、萎縮、肌束震顫，同時(shí)伴有錐體束征的一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。該病起病隱襲，持續(xù)進(jìn)展，預(yù)后不良，患者多在3～5年內(nèi)死亡，患者及其家庭承受著巨大的痛苦和沉重的負(fù)擔(dān)。因此，探討ALS的發(fā)病機(jī)制及尋求有效的治療方法一直是醫(yī)學(xué)界關(guān)注、研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療ALS的有效手段匱乏，利魯唑(riluzole)是唯一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)的臨床藥物，該藥可使ALS患者的生存期平均延長(zhǎng)4～20個(gè)月，但卻不能改善患者的癥狀或逆轉(zhuǎn)進(jìn)行性惡化的趨向[1]。而中醫(yī)學(xué)對(duì)ALS發(fā)病的病因病機(jī)有獨(dú)到認(rèn)識(shí)，并在ALS治療方面另辟蹊徑，積累了大量的臨床實(shí)踐。經(jīng)過(guò)不斷探索研究，中藥及針灸等多種治療方法[2-8]被用于治療ALS，已在改善患者臨床癥狀和提高患者生活質(zhì)量方面顯示出明顯優(yōu)勢(shì)。導(dǎo)師孫遠(yuǎn)征教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，采用夾脊電針治療ALS患者，治療兩周即可明顯改善患者肌無(wú)力癥狀[9]。基于臨床研究結(jié)果，開(kāi)展了基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，采用夾脊電針治療ASL-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠，結(jié)果證實(shí)夾脊電針能夠改善小鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙，延緩其發(fā)病，延長(zhǎng)生存期[10]。在前期研究中，已揭示夾脊電針治療ALS的有效性，在本實(shí)驗(yàn)中，筆者進(jìn)一步觀察夾脊電針對(duì)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響，為繼續(xù)深入研究夾脊電針治療ALS的作用機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性B6SJL-TgN(SOD1-G93A)1 Gur小鼠和雌性 B6SJL/F1小鼠購(gòu)于美國(guó)Jackson實(shí)驗(yàn)室(Bar Harbour，ME，USA)，于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)動(dòng)物研究所恒溫(22℃～27℃)、恒濕(40%～50%)、無(wú)特殊病原體(Specific pathogen free，SPF)環(huán)境中進(jìn)行飼養(yǎng)繁殖，喂以滅菌水及顆粒型鼠類飼料。應(yīng)用PCR鑒定子代鼠， SOD1-G93A基因陽(yáng)性者用為模型動(dòng)物，陰性者用為野生型對(duì)照小鼠。

1.2 動(dòng)物分組

選用經(jīng)PCR鑒定的ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠24只，按照隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠隨機(jī)分為電針組、手針組和模型組(均n=8只)。取同窩野生型小鼠8只作為陰性對(duì)照組。

1.3 各組處置

模型組：小鼠日齡60天開(kāi)始，予以捆綁固定20 min，2次/周，共處置4周。

手針組：小鼠日齡60天開(kāi)始，同模型組方法捆綁固定后，進(jìn)行針刺干預(yù)，針刺穴位依據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸手冊(cè)》進(jìn)行定位。選用杏林牌針灸針0.17 mm×7 mm，針刺雙側(cè)L1～2、L5～6夾脊穴，進(jìn)針4～5 mm，針刺后留針20 min，2次/周，共治療4周。

電針組：小鼠日齡60天開(kāi)始，同模型組方法捆綁固定后，與手針組相同方法針刺雙側(cè)L1～2、L5～6夾脊穴，針刺后將同一組導(dǎo)線的正負(fù)極連接至脊柱的同一側(cè)，雙側(cè)導(dǎo)線分別連接后接入電麻儀，采用疏波(頻率為2 Hz)，電流強(qiáng)度以小鼠下肢肌肉收縮為度，每次留針20 min，2次/周，共治療4周。

陰性對(duì)照組：不做任何處置。

1.4 HE染色和尼氏染色觀察腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)及計(jì)數(shù)

1.4.1 取材及操作 針刺干預(yù)結(jié)束后，于小鼠日齡120天時(shí)取材進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。按照隨機(jī)數(shù)字表法每組隨機(jī)取6只小鼠，留取小鼠脊髓腰段，置于20 ml 4%多聚甲醛中固定，再切取腰膨大部位，石蠟包埋、切片、染色及封片后，光鏡400倍下觀察腰髓腰膨大前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化。

1.4.2 觀察方法 觀察與判定:小鼠腰髓前角神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)是否正常，有無(wú)空泡形成，神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)胞核染色是否均勻，細(xì)胞核形態(tài)是否正常，細(xì)胞核有無(wú)固縮。

計(jì)數(shù):對(duì)連續(xù)切片的每第5張切片的脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù)，每段腰膨大組織觀察10個(gè)切片，取其均值作為每例平均每高倍視野內(nèi)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)(個(gè)/HP)。HE染色識(shí)別神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為具有多極細(xì)胞體，顆粒狀細(xì)胞質(zhì)，有核仁，無(wú)論細(xì)胞大小均屬神經(jīng)元。尼氏染色識(shí)別神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核內(nèi)有一個(gè)清晰的大核仁，周圍為淡藍(lán)染色的細(xì)胞質(zhì)。

1.5 電鏡觀察腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化

取材及操作:針刺干預(yù)結(jié)束后，于小鼠日齡120天取材進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。按照隨機(jī)數(shù)字表法每組隨機(jī)取2只小鼠，留取小鼠脊髓腰膨大段，置于2.5%戊二醛中固定，修塊、固定、丙酮梯度脫水、包埋、聚合、組織塊的修整、半薄切片制備、超薄切片的定位、載網(wǎng)及3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色后，透射電鏡下觀察運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組小鼠腰髓前角HE染色結(jié)果

2.1.1 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)變化 陰性對(duì)照組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，輪廓清晰，無(wú)散在空泡形成，胞質(zhì)胞核染色均勻，核仁清晰可見(jiàn),見(jiàn)封三彩圖1-a;模型組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，固縮，胞質(zhì)胞核染色不清，核固縮，出現(xiàn)空泡狀改變,見(jiàn)封三彩圖1-b;手針組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)較模型組改善，部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)胞質(zhì)胞核染色不清，空泡化較模型組少,見(jiàn)封三彩圖1-c;電針組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組、手針組增多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)較模型組改善，部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)胞質(zhì)胞核染色不清，空泡化明顯減少,見(jiàn)封三彩圖1-d。

2.1.2 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù) HE染色結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組比較，模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P<0.01)；手針組和電針組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組明顯增多(P<0.05或P<0.01)，且電針組較手針組增多更明顯(P<0.05)，見(jiàn)表1和圖2。由此可知，手針和電針均可減輕腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失，且電針效果優(yōu)于手針治療。

表1 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)比較±s,個(gè)/HP)

注：與陰性對(duì)照組比較，☆P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，△P<0.01；與手針組比較，**P<0.05

圖2 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)

2.2 各組小鼠腰髓前角尼氏染色結(jié)果

2.2.1 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)變化 陰性對(duì)照組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，輪廓清晰，尼氏體、核仁清晰可見(jiàn)，無(wú)散在空泡形成,見(jiàn)封三彩圖3-a;模型組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，非神經(jīng)細(xì)胞增多，神經(jīng)細(xì)胞體積減小，尼氏體不清，核固縮，出現(xiàn)空泡狀改變,見(jiàn)封三彩圖3-b;手針組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)較模型組改善，神經(jīng)細(xì)胞體積減少，部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)尼氏體染色不清，空泡化較模型組少,見(jiàn)封三彩圖3-c;電針組：小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組、手針組增多，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)較模型組改善，部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)尼氏體染色不清，空泡化明顯減少,見(jiàn)封三彩圖3-d。

2.2.2 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù) 尼氏染色結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組比較，模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P<0.01)；手針組和電針組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目較模型組明顯增多(P<0.05，P<0.01)，且電針組較手針組增多更明顯(P<0.05)，見(jiàn)表2和圖4。由此可知，手針和電針均可減輕腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失，且電針效果優(yōu)于手針治療。

表2 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)比較±s,個(gè)/HP)

注：與陰性對(duì)照組比較，☆P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，△P<0.01；與手針組比較，**P<0.05

圖4 各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)

圖5 各組小鼠腰髓前角透射電鏡結(jié)果

2.3 各組小鼠腰髓前角神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果

陰性對(duì)照組：神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)基本正常，胞質(zhì)細(xì)胞器豐富、清晰，線粒體膜完整，嵴清晰，核膜完整，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻,見(jiàn)圖5-a1、5-a2。

模型組：神經(jīng)細(xì)胞萎縮，細(xì)胞膜皺縮，線粒體不同程度腫脹，嵴出現(xiàn)斷裂、減少，有些線粒體雖可辨認(rèn)，但已呈空泡狀，核膜凹陷變形或部分破裂，異染色質(zhì)聚集成塊，變性的神經(jīng)細(xì)胞周圍可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞圍繞形成衛(wèi)星現(xiàn)象,見(jiàn)圖5-b1、5-b2。

手針組：神經(jīng)細(xì)胞輕度萎縮，細(xì)胞膜皺縮，形態(tài)尚可，部分線粒體腫脹、嵴消失及空泡化，核膜不完整、內(nèi)陷，染色質(zhì)較不均勻，出現(xiàn)輕度聚集，見(jiàn)圖5-c1、5-c2。

電針組：神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)尚可，線粒體輕度腫脹，部分嵴消失，空泡化減少，核膜雖有內(nèi)陷，但結(jié)構(gòu)較完整，核內(nèi)染色質(zhì)分布較均勻,見(jiàn)圖5-d1、5-d2。

3 討論

ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的主要病理學(xué)特征是腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的變性、丟失，它的丟失表現(xiàn)為發(fā)病前的緩慢丟失和發(fā)病后的快速丟失，主要為腰髓和頸髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元丟失，而胸髓前角和各脊髓節(jié)段的后角及側(cè)柱神經(jīng)元?jiǎng)t相對(duì)保留。至終末期，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元丟失總數(shù)達(dá)70%以上[11-12]。

尼氏小體(Nissl’s Body,Nissl granules)作為神經(jīng)細(xì)胞的特征性結(jié)構(gòu)之一，又稱為虎斑樣物質(zhì)，是指神經(jīng)細(xì)胞中特異性嗜堿性顆粒群，呈粒狀、微粒狀或虎斑狀，存在于神經(jīng)元除軸突和軸丘以外的胞漿中，是粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體中的核蛋白，化學(xué)本質(zhì)是核糖核酸及蛋白質(zhì)，它的功能與神經(jīng)元的功能具有非常密切的關(guān)系，常作為判斷神經(jīng)細(xì)胞存活的標(biāo)志。因此，通過(guò)尼氏染色觀察尼氏小體的變化可以反映神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生的病理生理變化。而運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元計(jì)數(shù)無(wú)疑是評(píng)價(jià)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠疾病進(jìn)展最可靠和最客觀的指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)中，筆者采用HE染色和焦油紫尼氏染色觀察了各組小鼠日齡120天時(shí)腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的形態(tài)變化并對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù)。HE染色結(jié)果可見(jiàn)，模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，固縮，胞質(zhì)胞核染色不清，核固縮，出現(xiàn)空泡狀改變，定量分析發(fā)現(xiàn)較陰性對(duì)照組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降了50%，手針組小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降32%，電針組小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降14%；尼氏染色結(jié)果可見(jiàn)，模型組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元總數(shù)明顯減少，非神經(jīng)元細(xì)胞增多，病變的神經(jīng)元出現(xiàn)尼氏體不清，核固縮，細(xì)胞體積減小，定量分析發(fā)現(xiàn)較陰性對(duì)照組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降了59%，手針組小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降41%，電針組小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目下降21%，HE染色和尼氏染色結(jié)果具有一致性，均提示手針和電針治療減緩了腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失，且電針效果優(yōu)于手針。同時(shí)通過(guò)透射電鏡觀察了各組小鼠腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果證實(shí)夾脊電針對(duì)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角神經(jīng)元形態(tài)學(xué)病變有改善作用，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，從而改善小鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙，延緩發(fā)病，延長(zhǎng)生存期?；谇捌趯?shí)驗(yàn)的結(jié)果，接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)將致力于開(kāi)展夾脊電針干預(yù)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠有效性機(jī)制方面的研究，為夾脊電針向臨床推廣提供更加可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] Miller RG,Mitchell JD,Lyon M,et al.Riluzole for amyotrophic lateral sclerosisALS)/motor neuron disease(MND)[J].Cochrane Database Syst Rev,2007,24(1):CD001447

[2] 吳國(guó)鳳,任飛,張碩.燒山火手法治療進(jìn)行性脊肌萎縮癥和肌萎縮性側(cè)索硬化癥15例[J].中國(guó)針灸,2000(7):400

[3] 劉兆周.健脾補(bǔ)腎熄風(fēng)法治療肌萎縮側(cè)索硬化癥的臨床研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2005

[4] 周懷明.針刺治療肌萎縮側(cè)索硬化癥20例[J].中國(guó)針灸,2006(9):37

[5] 孫麗霞.健脾益肺法對(duì)肌萎縮側(cè)索硬化患者運(yùn)動(dòng)功能及中醫(yī)癥候的影響研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2009

[6] 李婧.從肺脾論治對(duì)肌萎縮側(cè)索硬化患者運(yùn)動(dòng)/生存功能的影響[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2012

[7] 展文國(guó).裴正學(xué)教授治療肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥1例報(bào)告[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2013,7(9):144

[8] 袁彩林,申鵬飛.“補(bǔ)脾益腎，固本培元”法針刺治療肌萎縮側(cè)索硬化1例[J].廣西中醫(yī)藥,2015,38(2):52-53

[9] 孫遠(yuǎn)征,許娜.夾脊電針結(jié)合中藥改善肌萎縮側(cè)索硬化癥1例[J].針灸臨床雜志,2014,30(7):28-29

[10] 孫遠(yuǎn)征,孫穎哲.夾脊電針對(duì)ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠病程進(jìn)展和行為學(xué)的影響[J].針灸臨床雜志,2016,32(6):74-77

[11] Chiu AY,Zhai P,Dal Canto MC,et al.Age-dependent penetrance of disease in a transgenic mouse model of familial amyotrophic lateral selerosis[J].Mol Cell Neurosci,1995,6(4):349-362

[12] Feeney SJ,McKelvie PA,Austin L,et al.Presymptomatic motor neuron loss and reactive astrocytosis in the SOD1 mouse model of amyotrophic lateral sclerosis[J].Muscle Nerve,2001,24(11):1510-1519

《針灸臨床雜志》關(guān)于抵制學(xué)術(shù)不端行為的聲明

隨著我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，自然科學(xué)的學(xué)術(shù)研究已進(jìn)入了一個(gè)繁榮期。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前，我國(guó)學(xué)術(shù)論文的年產(chǎn)量已居世界前列。這源于科研工作者的嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度及銳意進(jìn)取的精神，為科技發(fā)展做出了很大的成績(jī)，但也同時(shí)存在學(xué)術(shù)不端行為等不和諧的音符，損害了科學(xué)研究的嚴(yán)肅性和實(shí)事求是的精神，敗壞了學(xué)術(shù)風(fēng)氣。

為了凈化公共學(xué)術(shù)平臺(tái)，維護(hù)正常的學(xué)術(shù)環(huán)境，倡導(dǎo)優(yōu)良學(xué)風(fēng)，學(xué)術(shù)期刊承擔(dān)著不可推卸的使命和責(zé)任，為此，《針灸臨床雜志》鄭重聲明，凡經(jīng)學(xué)術(shù)不端文獻(xiàn)系統(tǒng)檢測(cè)，確屬一稿多投、重復(fù)發(fā)表、抄襲剽竊、虛假注釋、不實(shí)參考文獻(xiàn)等任何一種情況者，均視為學(xué)術(shù)不端行為。自本聲明公布之日起，凡在我刊投稿的文章若被發(fā)現(xiàn)有學(xué)術(shù)不端行為者，本刊將不予刊發(fā)。

自本聲明公布之日起，凡向《針灸臨床雜志》投稿的作者，均視同認(rèn)可本聲明，并請(qǐng)依此自律。

《針灸臨床雜志》將繼續(xù)堅(jiān)決貫徹黨的中醫(yī)政策和“雙百方針”，認(rèn)真把握“振興中醫(yī)藥學(xué)術(shù)，交流中醫(yī)藥科研、教學(xué)、臨床和中西醫(yī)結(jié)合經(jīng)驗(yàn)及成果”的辦刊宗旨，堅(jiān)持“科學(xué)技術(shù)工作必須面向經(jīng)濟(jì)建設(shè)”的方針，認(rèn)真貫徹國(guó)家有關(guān)科學(xué)技術(shù)和編輯出版方面的政策、法令、條例，遵守宣傳紀(jì)律和報(bào)刊管理的有關(guān)規(guī)定，正確執(zhí)行國(guó)家出版紀(jì)律及有關(guān)保密、版權(quán)、專利、國(guó)界等規(guī)定，愿同各類期刊和學(xué)術(shù)界同仁一道，為搭建健康、公平、開(kāi)放的學(xué)術(shù)平臺(tái)，為科技進(jìn)步和文教事業(yè)的發(fā)展貢獻(xiàn)自己的力量。

Effect of Electroacupuncture at Jiaji Points(EX-B2)on Morphology of Lumbar SpinalAnterior Horn Neurons in the Transgenic Mice with Amyotrophic Lateral Sclerosis(ALS)

GUO Ying,ZHU Peng-yu,SUN Ying-zhe,SUN Yuan-zheng△,ZHAO Guang-ran,WU Dan,Liu Yan-lin

(TheSecondAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150001,China)

Objective：To observe the effect of electroacupuncture at Jiaji point (EX-B2) on morphology of lumbar spinal anterior horn neurons in the transgenic mice with ALS. Methods：24 ALS-SOD1G93Atransgenic mice were randomly divided into three even groups, that is electroacupuncture (group E), acupuncture group(group A) and model group(group M). Eight non-transgenic littermates were assigned to blank group(group B). Interventions to ALS-SOD1G93Atransgenic mice began from their age of 60 days. Group E was treated by electroacupuncture at Jiaji points (EX-B2), with the electrical stimulation at the frequency of 2 Hz. The four-week intervention was 20 minutes per time and twice a week. Group A was only treated by acupuncture at Jiaji points (EX-B2) and group C was disposed by firm binding. None intervention was given to group B. At the age of 120 days, HE staining, Nissl staining and transmission electron microscopy were used to ALS-SOD1G93Atransgenic mice to observe the anterior horn of the lumbar spinal cord pathological morphology, and detect the amount of motor neurons.Results：Analysis from HE staining, Nissl staining and transmission electron microscopy showed that group E and group A could significantly reduce morphological lesions and increase the amount of motor neurons compared with group C(P<0.05 orP<0.01), and group E was better than group C. Conclusion：Electroacupuncture at Jiaji points(EX-B2) can improve morphological changes of motor neurons in the anterior horn of the lumbar spinal cord in ALS-SOD1G93Atransgenic mice, which is better than by manual acupuncture.

Jiaji points(EX-B2);Electroacupuncture;AlS-SOD1G93A;Nissl staining;Electron microscopy

實(shí)驗(yàn)研究

國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項(xiàng)目,編號(hào)：國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)[2014]20號(hào)。

郭穎(1985-)，女，主治醫(yī)師，主要從事針灸治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床和基礎(chǔ)研究。

△通訊作者：孫遠(yuǎn)征(1957-)，男，主任醫(yī)師，教授，主要從事針灸防治神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床研究。

R245.97

A

1005-0779(2017)05-0060-05

2016-11-13