羅玉龍　周吉秋　武楠　黃偉　張森

【中圖分類號】R364.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）05-0-01

膿毒癥伴發(fā)心肌損傷造成心臟功能障礙是膿毒癥患者常見的死亡原因之一，預(yù)防和控制膿毒癥患者心肌損傷可有效降低膿毒癥患者的死亡率。目前認(rèn)為膿毒癥造成心臟損傷的主要原因包括炎癥細(xì)胞因子的浸潤，氧化應(yīng)激損傷等。瓜氨酸，一種不存在于蛋白質(zhì)中的L-a-氨基酸能促進(jìn)精氨酸進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞，在一定程度上提升精氨酸的作用，可通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)NO的生成，同時瓜氨酸還具擴張血管、降血壓、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖等作用。本研究擬通過盲腸結(jié)扎穿孔模型，通過補充瓜氨酸，探討其對膿毒癥大鼠心臟的組織病理變化、心肌酶水平和抗氧化能力的變化，為膿毒癥心肌損傷的預(yù)防及治療提供新思路。

1.材料和方法

1.1 主要材料和儀器 瓜氨酸（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司），蛋白定量測試盒、總超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測試盒（南京建成生物研究所），生化自動分析儀。

1.2 實驗動物和分組 無特定病原體級健康雄性Wistar大鼠，體重250～300g，7～10周齡。大鼠按隨機數(shù)表法分六組：正?？瞻讓φ战M（Normal）、假手術(shù)組（sham）、膿毒癥組（CLP）、瓜氨酸治療組（CLP+Cit），各組8只大鼠。

1.3 動物模型制備 Wister大鼠稱重、編號。Normal組不做特殊處理；sham組麻醉開腹，略微翻動盲腸后縫合關(guān)腹；CLP組行CLP術(shù)，麻醉后沿腹中線做一條長約2cm切口，于盲腸中段部位4.0絲線結(jié)扎打結(jié)，21號無菌針頭貫穿腸管，擠壓盲腸末端讓糞便內(nèi)容擴散到腹膜后關(guān)腹；CLP+Cit組術(shù)前瓜氨酸灌胃給藥7d，劑量為200mg/kg·d-1，余操作同膿毒癥組。

1.4 標(biāo)本采集與處理 各大鼠于術(shù)后6h、12h麻醉后經(jīng)腹主動脈取血5ml，待血清析出后3000r/min離心15min，取上清-80℃保存?zhèn)錅y。取血后處死大鼠，摘除大鼠心臟放入4℃生理鹽水中漂洗，去除包膜及血管，取各組大鼠少量心肌組織以10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色后光鏡下觀察心肌組織病理變化，余下心臟標(biāo)本-80℃保存?zhèn)錅y。

1.5 大鼠血生化檢測 取大鼠1ml血清，全自動生化分析儀檢測血清肌酸激酶CK、肌酸激酶同工酶CK-MB、乳酸脫氫酶LDH、a-羥丁酸脫氫酶的水平HBDH；南京建成生物工程研究所的NO測定試劑盒和NOS分型測定試劑盒測定各組大鼠血清NO含量及iNOS活力；

1.6 大鼠心臟組織SOD、MDA的測定 取大鼠心臟組織100mg，制備成10%的組織勻漿，取上清得到組織勻漿液，考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白定量測定，采用南京建成生物工程研究所的SOD、MDA試劑盒測定心臟組織勻漿液中SOD、MDA水平。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用spss17.0軟件包對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式進(jìn)行描述，計量資料組間比較采用單因素方差分析進(jìn)行，所有檢驗以雙側(cè)Ρ<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 大鼠心臟組織病理學(xué)（HE×400）

光鏡下，HE染色可見Normal組大鼠心肌橫紋肌纖維（×400倍）結(jié)構(gòu)清晰，肌纖維核呈卵圓形，位于細(xì)胞中央；CLP組大鼠心肌纖維間被炎性細(xì)胞浸潤，心肌細(xì)胞變細(xì)，心肌間質(zhì)水腫；CLP+Cit組大鼠心肌纖維間炎性細(xì)胞浸潤較CLP組輕，心肌細(xì)胞大小變化不大，心肌間有滲出現(xiàn)象。

2.2 大鼠心肌酶檢測

在術(shù)后6h，12h兩個時間點，CLP組大鼠血清CK、HBDH及NO顯著高于CLP+Cit組（P<0.05），而CLP組與CLP+Cit組血清LDH、iNOS差別不大（P>0.05）。

2.3 大鼠心臟組織SOD、MDA的測定

在實行CLP造模術(shù)后，CLP+Cit12h亞組大鼠心臟組織中SOD的活力值均高于CLP組相對應(yīng)的亞組（P<0.05）；而CLP12h亞組大鼠心臟組織中MDA的水平均高于CLP+Cit相對應(yīng)的亞組（P<0.05）。

3.討論

膿毒癥初期，機體啟動快速防御機制清除病原體，外周血中性粒細(xì)胞數(shù)目增多，吞噬性增強，血小板的數(shù)目增多，粘附與聚集性加強。另外，膿毒癥所產(chǎn)生釋放的炎癥因子對組織臟器細(xì)胞可通過直接造成臟器損傷。最后，在內(nèi)毒素及炎癥細(xì)胞因子的作用下，iNOS的活力增加，誘導(dǎo)生成更多的NO，加重炎癥反應(yīng)。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)補充瓜氨酸能緩解早期膿毒癥促炎細(xì)胞因子的釋放，并增加機體后期抗炎細(xì)胞因子的釋放，緩解膿毒癥大鼠炎癥反應(yīng)。

研究結(jié)果顯示，補充外源性瓜氨酸后，病理損害減輕，血清NO濃度下降，CLP+Cit組的血清CK、LDH、HBDB也均低于CLP組，提示瓜氨酸可降低血清中CK、CK-MB、LDH、HBDH、NO水平，提高心臟抗氧化能力，減輕膿毒癥對心臟組織的損害。其作用機制可能與瓜氨酸作為精氨酸的合成前體，一方面促進(jìn)了精氨酸的合成，提升了精氨酸的作用，造成NO的生成增多，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子的生成減少，改善了大鼠的缺血缺氧的病態(tài)；另一方面瓜氨酸可通過“Cit-NO”循環(huán)，拮抗NO大量生成，避免了NO蓄積所造成負(fù)反應(yīng)對大鼠的損害；但具體的作用機制還有待繼續(xù)深入的研究。

參考文獻(xiàn)

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