聶天瑩 陳鴻申+林紹霞+楊鴻波

摘要：在對(duì)唑草酮進(jìn)行殘留分析試驗(yàn)的過(guò)程中，對(duì)其濃度的分析檢測(cè)方法有很多。通過(guò)HPLC和 LC-MS對(duì)唑草酮原藥的檢測(cè)比較，得到HPLC對(duì)唑草酮的LOD為0.011 mg/L，LOQ為0.036 mg/L；LC-MS對(duì)唑草酮的LOD為0.036 ng/L，LOQ為2.04 ng/L，且HPLC和LC-MS對(duì)唑草酮原藥的檢測(cè)方法都具有易操作、分離特性好的特點(diǎn)，但LC-MS的檢出限比HPLC低，推薦LC-MS適合用來(lái)分析唑草酮含量較低的樣品，而HPLC適合用來(lái)分析唑草酮含量較高的樣品。

關(guān)鍵詞：唑草酮；HPLC；LC-MS

中圖分類號(hào)：O657文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1003-935X（2016）04-0048-08[KH+7mmD]

Comparison of Detection Methods of Carfentrazone [JZ]Ethyl by HPLC and LC-MS

[KH+7mmD][WT5BZ][JZ（]NIE Tianying，CHEN Hongshen，LIN Shaoxia，YANG Hongbo

[WT5”BZ]（1.Guizhou Academy of Testing and Analysis，Guiyang 550002，China；2. College of Life Sciences，Guizhou University，Guiyang 550025，China）

[JZ）][KH+7mmD][WT5”HZ]Abstract：

[WT5”BZ]There are many methods for determining the carfentrazone-ethyl concentration as part of residue analyses. The detection of carfentrazone-ethyl by HPLC and LC-MS was compared. The LOD and LOQ by HPLC were 0.011 mg/L and 0.036 mg/L，respectively. The LOD and LOQ by LC-MS were 0.036 ng/L and 2.04 ng/L，respectively. Both the HPLC and LC-MS detection methods for carfentrazone-ethyl are easy to operate. The characteristics of separation properties are good but the detection limit of LC-MS is lower than that of HPLC. LC-MS is suitable for the analysis of samples containing low concentrations of carfentrazone-ethyl and HPLC for those having high content samples of the herbicide.

唑酮草酯屬原卟啉原氧化酶抑制劑，即通過(guò)抑制葉綠素生物合成過(guò)程中原卟啉原氧化酶而引起細(xì)胞膜破壞，使葉片迅速干枯、死亡，適用于小麥、大麥、燕麥、水稻、玉米、大豆、柑橘、咖啡、棉花、高粱、葡萄園、草坪等田塊除草[1]。

目前有關(guān)唑草酮在水稻、小麥及甘蔗中的殘留分析方法相繼出現(xiàn)[2-11]。提取的唑草酮經(jīng)過(guò)了石油醚萃取，弗羅里硅土柱凈化后，乙酸乙酯洗脫，正己烷定容后采用氣相色譜檢測(cè)[3]。建立的分析方法雖能滿足試驗(yàn)需要，但在實(shí)際操作過(guò)程中較為繁瑣，且在分析唑草酮含量較低樣品時(shí)檢出限有時(shí)候往往達(dá)不到。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)高效液相色譜儀（Agilent HPLC 1220）和液相色譜質(zhì)譜連用儀（Agilent 1260-6410B，具有ESI離子源；Masshunter色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或色譜工作站）所建立的唑草酮分析方法的比較，豐富和優(yōu)化了唑草酮分析方法，以期為后續(xù)開(kāi)展唑草酮檢測(cè)分析試驗(yàn)提供參考。

1用HPLC建立的唑草酮檢測(cè)分析方法

1.1試驗(yàn)方法

1.1.1方法提要試樣用水溶解，以乙腈+水（含0.1%磷酸）為流動(dòng)相，用Agilent Extend-C18柱和VWD檢測(cè)器，用外標(biāo)法定量。

1.1.2試劑和溶液乙腈（色譜純，Merck KGaA，批號(hào)：JA028530）；磷酸（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：20130908）；超純水（電阻率：18.25 MΩ/cm）；鹽酸（分析純，成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20150311）；唑草酮標(biāo)準(zhǔn)品（已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)，ω≥99.5%，Dr. Ehrenstorfer Gmbh，批號(hào)：21211）。

1.1.3儀器高效液相色譜儀：Agilent HPLC 1220；色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或色譜工作站；微量進(jìn)樣器：100 μL；pH計(jì)：FE20。

1.1.4液相色譜操作條件色譜柱：Agilent Extend-C18柱；250 mm×4.60 mm（i.d.），5 μm；進(jìn)樣體積：20 μL；流速：0.8 mL/min；流動(dòng)相：01%磷酸水溶液-乙腈，體積比12 ∶[KG-*3]88；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm；運(yùn)行時(shí)間：7 min。

1.1.5方法選擇性用上述分析方法測(cè)定95%唑草酮原藥，試驗(yàn)結(jié)果唑草酮保留時(shí)間為 3.940 min，唑草酮與雜質(zhì)峰間的分離度為8.53，大于1.5，方法對(duì)測(cè)定試驗(yàn)溶液中唑草酮具有特定選擇性（圖1）。

1.1.6測(cè)定在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)的標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針唑草酮峰面積的相對(duì)變化小于1.2%后，進(jìn)行測(cè)定。

1.2方法驗(yàn)證

1.2.1線性相關(guān)性試驗(yàn)稱取唑草酮標(biāo)樣 0.010 03 g 置于25 mL容量瓶中，用乙腈并稀釋至刻度，得到濃度為400 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈稀釋，得到濃度為 10 mg/L 的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液。用上述濃度為 10 mg/L 的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈稀釋，得到唑草酮濃度為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L的系列標(biāo)樣溶液。按“1.1.4”節(jié)的色譜操作條件進(jìn)行分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到唑草酮線性方程為y=3397x+1.07，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，線性相關(guān)性的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1和圖2、圖3。

1.2.2重復(fù)性試驗(yàn)取“1.2.1”節(jié)配制的濃度為0.2 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.1.4”節(jié)的色譜操作條件進(jìn)行精密度試驗(yàn)測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表2和圖4。

1.2.3檢出限和定量限取“1.2.1”節(jié)配制的濃度為0.1 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.1.4”節(jié)的色譜操作條件重復(fù)測(cè)定6次，S/N≈3和S/N≈10時(shí)溶液濃度為該方法的檢出限和定量限。試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法對(duì)唑草酮LOD為 0.011 mg/L，LOQ為0.036 mg/L。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。

2.1試驗(yàn)方法

2.1.1方法提要試樣用水溶解，使用Agilent 1260-6410B LC/MS/MS測(cè)定，以水（含0.1%甲酸）溶液+乙腈為流動(dòng)相，Agilent XDB-C18柱和MSD檢測(cè)器，對(duì)試樣中的唑草酮進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。

2.1.2試劑和溶液乙腈：色譜純（Merck KGaA，批號(hào)：JA028530）；甲酸：色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20150424）；超純水：電阻率，18.25 MΩ/cm；唑草酮標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)，ω=99.5%，批號(hào)：21211。

2.1.3儀器液相色譜質(zhì)譜連用儀：Agilent 1260-6410B，具有ESI離子源；Masshunter色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或色譜工作站；色譜柱：Agilent XDB-C18柱；50 mm×4.60 mm（i.d.），1.8 μm；微量進(jìn)樣器：100 μL。

2.1.4儀器操作條件

2.1.4.1HPLC操作條件進(jìn)樣體積：20 μL；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：25%水（含0.1%甲酸）溶液+75%乙腈（體積比）；保留時(shí)間：唑草酮3.32 min。

2.1.4.2MSD操作條件離子源：ESI源，正離

子模式；離子源參數(shù)：干燥氣體，N2；氣體溫度，300 ℃；氣體流速，8 L/min；Nebulizer，40 psi；Capillary，4 000 V；監(jiān)測(cè)模式：MRM；監(jiān)測(cè)離子參數(shù)見(jiàn)表4、圖7。2.1.5方法選擇性建立上述分析方法測(cè)定95%唑草酮原藥，試驗(yàn)結(jié)果表明，試樣中唑草酮保留時(shí)間為3.32 min，目標(biāo)峰可實(shí)現(xiàn)基線分離，不存在其他雜質(zhì)干擾現(xiàn)象。

2.1.6測(cè)定在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)的標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針唑草酮標(biāo)樣峰面積的相對(duì)變化小于2%后，進(jìn)行測(cè)定。

2.2方法驗(yàn)證

2.2.1線性相關(guān)性試驗(yàn)稱取唑草酮標(biāo)樣（ω=99.5%）0.010 03 g，置于25.00 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，得到濃度為400 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈稀釋，得到濃度為10 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液。將上述濃度為10 mg/L的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈稀釋，吸取適當(dāng)該儲(chǔ)備液配制成梯度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.1.4”節(jié)儀器操作條件進(jìn)行分析，以唑草酮濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到唑草酮線性方程為y=14.79x+18.55，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，線性相關(guān)性的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5和圖7、圖8。

2.2.2重復(fù)性試驗(yàn)取“2.2.1”節(jié)配制的濃度為50 ng/mL的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.1.4”節(jié)儀器操作條件連續(xù)測(cè)試6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，驗(yàn)證方法的精密度，結(jié)果見(jiàn)表6和圖9。

2.2.3檢出限和定量限取“2.2.1”節(jié)配制的濃度為50 ng/mL的唑草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.1.4”節(jié)

色譜操作條件重復(fù)測(cè)定6次，根據(jù)S/N值計(jì)算出LOD和LOQ值，試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法對(duì)唑草酮LOD為0.63 ng/mL，LOQ為2.04 ng/mL（表7、圖10）。

3結(jié)論[JP]

本試驗(yàn)用Agilent HPLC 1220和Agilent 1260-6410B建立了唑草酮原藥的2種分析方法，2種方法相比較有以下特點(diǎn)：（1）用HPLC建立的分析方[JP+1]法測(cè)定95%唑草酮原藥，保留時(shí)間為 3.940 min，唑草酮與雜質(zhì)峰間的分離度為8.53，大于1.5，線性方程為y=33.97x+1.07，其線性相關(guān)系數(shù)為0999 8；用LC-MS建立的分析方法測(cè)定95%唑草酮原藥，保留時(shí)間為3.32 min，目標(biāo)峰可實(shí)現(xiàn)基線分離，不存在其他雜質(zhì)干擾現(xiàn)象。且相鄰兩針唑草酮標(biāo)樣峰面積的相對(duì)變化小于2%，線性方程為y=14.79x+18.55，其線性相關(guān)系數(shù)為 0.999 8，且2種分析方法操作起來(lái)都較簡(jiǎn)單。（2）2種分析方法相對(duì)比而言，用 LC-MS建立的分析方法檢出限（0.036 ng/L）要比HPLC建立的分析方法檢出限（0.011 mg/L）低106個(gè)數(shù)量級(jí)，

且 LC-MS的定量限（2.04 ng/L）也比HPLC的定量限（0.036 mg/）低106個(gè)數(shù)量級(jí)。

在具體試驗(yàn)過(guò)程中，遇到唑草酮含量較低的樣品，推薦用本試驗(yàn)建立的LC-MS分析方法來(lái)分析低濃度（ng/L）的唑草酮樣品。

[HS+7mm][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1]胡耐冬，劉長(zhǎng)令. 新型三唑啉酮類除草劑唑酮草酯[J]. 精細(xì)與專用化學(xué)品，2003，11（14）：21-24.

[2]張志勇，王冬蘭，吳長(zhǎng)付，等. 唑草酮在水稻和稻田中的氣相色譜檢測(cè)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，27（1）：195-198.[HT][HJ]

[3]張夏力，劉新剛，路彩紅，等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法測(cè)定小麥中唑草酮的殘留及消解動(dòng)態(tài)[J]. 植物保護(hù)，2012，38（1）：115-119.

[4]楊玉霞，莫仁甫，王天順，等. 毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定唑草酮在甘蔗及其土壤中的殘留量[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，24（6）：2230-2233.

[5]胡西洲，程運(yùn)斌，胡定金. 農(nóng)藥多殘留分析中QuEchERS方法介紹[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥，2006，5（4）：24-29，44.

[6]曹新梅，仲蘇林，吳建蘭，等. 唑草酮20%微囊懸浮劑高效液相色譜分析方法[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2010，31（5）：38-40.

[7]吳進(jìn)龍，張志一，單煒力，等. 唑草酮原藥高效液相色譜分析方法研究[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2008，29（2）：9-12.

[8]USP official. USP proposes revision of general chapter <1225> Validation of compendial procedures：Adding a section on Life Cycle Management[S/OL]. 2007-12-01. [2016-08-20]. http：//[JP2]www.gmp-compliance.org/gmp-news/usp-proposes-revision-[JP+1]of-general-chapter-1225-validation-of-compendial-procedures-adding-a-section-on-life-cycle-management.

[9]CIPAC No.3807：2003：Guidelines on method validation to be performed in support of analytical methods for agrochemical formulations[S/OL]. 2003-06-28.