徐引弟，王治方，李海利，張青嫻，朱文豪，焦文強(qiáng)，郎利敏，王克領(lǐng)

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002）

傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和豬鏈球菌混合感染的診斷與防治

徐引弟，王治方，李海利，張青嫻，朱文豪，焦文強(qiáng)，郎利敏，王克領(lǐng)

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002）

2016年3月初，河南省某規(guī)?；i場(chǎng)肥育豬發(fā)病，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷，分離到1株傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和1株豬鏈球菌，對(duì)這兩種菌分別進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)。結(jié)果同時(shí)對(duì)這兩種菌敏感的藥物有：頭孢哌酮、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢唑啉、頭孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素。

傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌；豬鏈球菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

2016年3月初，河南省某規(guī)?；i場(chǎng)生長(zhǎng)肥育豬突然發(fā)病，表現(xiàn)為高燒、呼吸困難、口鼻流泡沫，有的出血，死亡極快。剖檢肺臟出血、間質(zhì)增寬水腫、心內(nèi)膜出血嚴(yán)重，其余臟器未見(jiàn)明顯病變。根據(jù)發(fā)病及剖檢情況初步懷疑為傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）和豬鏈球菌（Streptococcus Suis,SS）混合感染。因此對(duì)這兩種病原進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷，并對(duì)該混合感染病原進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 分離鑒定

1.1.1 分離純化 無(wú)菌將病料（肺、氣管、心血）接種于含NAD（Nicotinamide adenine dinucleotide，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）和血清的TSA（Tryptic Soy Agar，胰蛋白大豆瓊脂）固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)12～24 h。分別挑取可疑菌落抹片革蘭氏染色后在顯微鏡下觀(guān)察。

1.1.2 培養(yǎng)特性 將可疑菌落分別接種不含NAD和血清的TSA、不含NAD但含血清的TSA平板，觀(guān)察菌落生長(zhǎng)情況和形態(tài)大小。

1.1.3 PCR鑒定 參照文獻(xiàn)[1-2]，根據(jù)APP apxIV序列設(shè)計(jì)引物，上游引物：5-GCTCACCAACGTTTGCTC AT-3'，下游引物：5'-GGGGACGTAACTCGGTGATT-3'，PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物為377 bp大小的片段。參照文獻(xiàn)[3-5]，根據(jù)豬鏈球菌gdh基因序列設(shè)計(jì)引物，上游引物：5-GCAGCGTATTCTGTCAAACG-3'，下游引物：5-CCATGGACAGATAAAGATGG-3'，PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物為689 bp大小的片段，引物由上海生工生物工程公司合成。反應(yīng)體系（50 μL）：10×緩沖液5 μL， 2 mM dNTPs 1 μL，10 μM/L上下游引物各1 μL，TaqE 1 μL，模板（刮取少量新鮮菌落溶于生理鹽水中）1 μL，滅菌ddH2O 40 μL。反應(yīng)條件：94℃變性4 min，進(jìn)入循環(huán)：94℃1 min，59℃1 min，72℃30 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。

1.2 藥敏試驗(yàn)

將分離鑒定好的細(xì)菌接種于綿羊全血平皿，涂勻，選取相應(yīng)抗生素的藥敏紙片貼于培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)24 h，測(cè)量抑菌環(huán)直徑并判定結(jié)果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 培養(yǎng)特性

培養(yǎng)24 h后，平皿上有2種菌落，一種稍大黃色不透明，革蘭氏染色為革蘭氏陰性短小球桿菌，多散在，少量短鏈或長(zhǎng)鏈（圖1）。大菌落在加有血清和NAD的TSA培養(yǎng)基上24 h長(zhǎng)成半透明菌落，針尖大小，直徑1～2 mm，側(cè)對(duì)光線(xiàn)有虹光。在不含NAD和血清的TSA培養(yǎng)基、不含NAD但含血清的TSA培養(yǎng)基上均不能生長(zhǎng)，表明分離的菌株具有NAD依賴(lài)性。在血平板上48 h長(zhǎng)成針尖大小的半透明菌落，有溶血現(xiàn)象。另一種菌落較小，在加有血清的TSA培養(yǎng)基上24 h長(zhǎng)成半透明菌落，針尖大小直徑1～2 mm。在不含NAD和血清的TSA培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。在血平板上24 h長(zhǎng)成針尖大小的半透明菌落，有α溶血現(xiàn)象。革蘭氏染色為陽(yáng)性球菌或球桿菌，散在或成雙，部分形成短鏈（圖2）。

圖1 傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌菌體形態(tài)

圖2 豬鏈球菌菌體形態(tài)

2.2 PCR鑒定

對(duì)第1種菌落進(jìn)行APP的擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的條帶。對(duì)第2種菌落進(jìn)行SS的擴(kuò)增，也擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的條帶（圖3）。

圖3 APP和SS PCR擴(kuò)增結(jié)果

綜合以上鑒定結(jié)果，本次發(fā)病為傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和豬鏈球菌的混合感染。

2.3 藥物敏感試驗(yàn)

從藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果看，對(duì)傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌敏感的藥物有：頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢他定、頭孢克肟、頭孢曲松、頭孢唑啉、頭孢呋辛、阿奇霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、壯觀(guān)霉素。對(duì)傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌耐受的藥物有：阿莫西林、氨芐西林、利福平、四環(huán)素、卡那霉素、紅霉素、克林霉素、多西環(huán)素、慶大霉素、萬(wàn)古霉素、新霉素、復(fù)方新諾明、阿米卡星、林可霉素。

對(duì)豬鏈球菌敏感的藥物有：頭孢哌酮、阿莫西林、氨芐西林、頭孢他定、氧氟沙星、頭孢噻肟、頭孢曲松、氯霉素、頭孢唑啉、頭孢呋辛、利福平、復(fù)方新諾明、青霉素G。對(duì)豬鏈球菌耐受的藥物有：阿奇霉素、頭孢克肟、四環(huán)素、卡那霉素、紅霉素、恩諾沙星、克林霉素、多西環(huán)素、慶大霉素、萬(wàn)古霉素、新霉素、環(huán)丙沙星、阿米卡星、林可霉素、壯觀(guān)霉素。

綜合2種菌的藥敏結(jié)果，對(duì)2種菌同時(shí)敏感的藥物有：頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢他定、頭孢曲松、頭孢唑啉、頭孢呋辛、氧氟沙星、氯霉素。

2.4 綜合防治

根據(jù)鑒定結(jié)果，確定本次發(fā)病原因?yàn)閭魅拘孕啬し窝追啪€(xiàn)桿菌和豬鏈球菌混合感染，采取了相應(yīng)的綜合防治措施，首先隔離發(fā)病豬，徹底消毒，全群添加氟苯尼考和氧氟沙星，發(fā)病豬注射頭孢噻肟。1周后，病情得到了控制，豬群恢復(fù)正常，未再有發(fā)病死亡情況。

3 討論

由于及時(shí)快速地確診了病原，本次疫情很快得到了很好的控制。對(duì)于急性發(fā)病死亡的情況以及剖檢情況我們初步懷疑為傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、豬鏈球菌、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒其中之一或混合感染。對(duì)于后3種病毒病，我們進(jìn)行了PCR鑒定，均為陰性，排除了病毒病的可能。而從病料中大量分離到傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌和豬鏈球菌，且兩種菌的含量高，沒(méi)有分離到其它病菌，因此本次鑒定的結(jié)果是科學(xué)可靠的，符合疫情。根據(jù)鑒定結(jié)果制定的防治措施科學(xué)得當(dāng)，及時(shí)控制了疫情，減少了損失。

[1]陳凡．胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌血清學(xué)分型和基因分型的研究[D]．武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004．

[2]Schaller A,Djordjevic S P,Eamens G J,et al.Identification and detection of Actinobacillus pleuropneumoniae by PCR based on the gene apxⅣA[J].Vet Microbiol,2001,79(1):47-62.

[3]何孔旺，倪艷秀，王繼春，等．豬鏈球菌分子流行病學(xué)[J]．中國(guó)人畜共患病雜志，2002，18（5）：45-47．

[4]閆若潛，趙明軍，張志凌，等．河南省致病性豬鏈球菌血清型及耐藥性狀況調(diào)查[J]．河南畜牧獸醫(yī)（綜合版），2007，28（5）：25-27．

[5]Okwumabua O,O'Connor M,Shull E.A polymerase chainreaction (PCR)assay specific for Streptococcus suis based on the gene encoding the glutamate dehydrogenase[J].FEMS Microbiol Lett, 2003,218(1):79-84.

（編輯：柳青）

頸眩湯

組成：赤芍12克，當(dāng)歸10克，熟地黃20克，川芎12克，天麻12克，白術(shù)15克，茯苓15克，竹茹10克，丹參20克，甘草3克。

功效：活血養(yǎng)血，祛痰化瘀，通絡(luò)止眩。

主治：頸椎病眩暈。

用法：煎服，1日1劑，早、中、晚各服1次。

方解：頸椎病眩暈癥多見(jiàn)于中老年人，屬于中醫(yī)學(xué)眩病范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病是因老年體弱、正氣不足、氣血虧虛、肝腎不足、久病氣血凝滯、夾痰夾瘀、脈絡(luò)不通而發(fā)病。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為無(wú)痰不作眩，本病病機(jī)為本虛（氣血虧虛、肝腎不足）標(biāo)實(shí)（瘀血痰阻）。頸眩湯乃治療痰瘀致眩之方。方中赤芍和血通絡(luò)；當(dāng)歸、熟地黃和血養(yǎng)血治頭暈?zāi)垦?；川芎上行頭目，以活血祛瘀；天麻平肝息風(fēng)而止頭眩；白術(shù)、茯苓健脾燥濕，與天麻配伍共增化痰止眩之功；竹茹祛痰，以竹之脈絡(luò)通人之脈絡(luò)也；丹參活血通絡(luò)祛瘀；甘草調(diào)和諸藥。諸藥共用以達(dá)化痰祛瘀止眩、養(yǎng)血通絡(luò)的功效。

加減運(yùn)用：伴眠差者加牡蠣、五味子；伴嘔吐者加半夏、藿香；伴耳鳴者加柴胡、黃芪、通草；伴面色淡白或萎黃，神疲乏力者加黃芪、太子參、阿膠；伴腰膝酸軟，夜尿頻多者加芡實(shí)、菟絲子、牛膝；伴頭目脹痛，急躁易怒者加鉤藤、石決明；伴口苦目赤，心煩者加龍膽草、黃芩、梔子。

（摘自《中國(guó)中醫(yī)藥報(bào)》2016.11.24霍 田/文）

S858.285.1

A

1002-1957(2017)02-0103-02

2017-01-13

河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（162102110042）；河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目（2016）

徐引弟（1974-），女，湖北浠水人，副研究員，博士，主要從事動(dòng)物病原微生物研究.E-mail：445177674@qq.com