黃洪欣杜興莉姜長青*

（1 山東省青島公安消防醫(yī)院，山東 青島 266016；2 山東省青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266011）

實驗研究

β-catenin和VEGF在磷狀細胞癌中的表達及其相關(guān)性

黃洪欣1杜興莉2姜長青2*

（1 山東省青島公安消防醫(yī)院，山東 青島 266016；2 山東省青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266011）

目的探討β-catenin和VEGF在皮膚磷狀細胞癌（SCC）組織中的表達相關(guān)性及其意義。方法應(yīng)用免疫組化Polymer方法檢測30例皮膚SCC和27例皮膚組織慢性炎的β-catenin和VEGF的表達。結(jié)果皮膚SCC中β-catenin主要呈細胞核和（或）細胞質(zhì)異位表達，陽性表達率為96.7%；VEGF在SCC的陽性率明顯高于皮膚組織慢性炎（70.0%和22.2%，P＜0.01）；且β-catenin與VEG的表達呈顯著正相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論SCC中β-catenin異位表達可能是VEGF高表達的重要原因，其在磷狀細胞癌發(fā)生中可能扮演重要作用。

磷狀細胞癌（SCC）；β-catenin；VEGF

近年研究發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤、肝癌及卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌中均存在Wnt信號通路異常[1]。目前關(guān)于β-catenin和VEGF蛋白與皮膚磷狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系尚不清楚，本文采用免疫組化Polymer法檢測30例皮膚SCC中β-catenin和VEGF蛋白的表達，進一步探討兩種蛋白在皮膚SCC中的相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料：收集青島市市立醫(yī)院2013年至2016年期間，臨床手術(shù)切除的30例皮膚SCC和27例皮膚組織慢性炎標本，年齡61～95歲，一抗β-catenin和VEGF和二抗試劑盒均購自北京中衫試劑有限公司，一抗工作濃度1∶100。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色：蠟塊切片后，依次脫蠟水化，蒸餾水沖洗2次，3%的雙氧水15 min后PBS洗片3次，枸櫞酸修復(fù)抗原后PBS洗3次，加一抗放4 ℃冰箱中過夜，PBS洗3次后加Ⅱ抗，37 ℃孵育20 min，PBS洗3次，DAB顯色、蘇木素液復(fù)染、梯度脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片、光鏡觀察。

1.2.2 結(jié)果判定：依據(jù)Maruyama等[2]的方法判斷β-catenin染色結(jié)果，從細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核3方面進行綜合判斷，細胞膜陽性表達率＞70%為正常表達，不足判定為表達減弱或缺失；胞質(zhì)或胞核陽性表達率＞10%判定為陽性表達。

依據(jù)許良中等[3]的方法，VEGF染色結(jié)果從染色強度和染色細胞所占百分比兩方面進行綜合判斷，染色強度無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。著色細胞占計數(shù)細胞百分比率為0者，記0分，＜10%為1分，10%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度與陽性細胞百分比相乘，＜3分者為陰性，≥3分者為陽性。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。β-catenin和VEGF在SCC與皮膚組織慢性炎之間的關(guān)系采用χ2檢驗；兩種蛋白相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)檢驗，P＜0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫組化檢測β-catenin和VEGF在SCC和皮膚組織慢性炎中的表達：β-catenin在皮膚SCC組化染色（圖1），β-catenin在SCC和皮膚組織慢性炎陽性表達率分別為96.7%和11.1%，因此β-catenin在兩組之間的表達有顯著差異（P＜0.01）；VEGF在皮膚組織慢性炎與SCC中陽性表達為22.2%和70.0%（圖2），因此VEGF在兩組之間的表達也有顯著差異（P＜0.01）。

圖1 β-catenin在SCC中陽性表達

圖2 VEGF在SCC中陽性表達

2.2 皮膚SCC中β-catenin與VEGF表達的關(guān)聯(lián)性分析：統(tǒng)計學(xué)分析β-catenin和VEGR的陽性表達關(guān)系有顯著相關(guān)性（P＜0.01，r=0.678），其中兩種蛋白均陽性為21例，β-catenin陽性而VEGF陰性者1例，8例為兩種蛋白均陰性。

3 討 論

皮膚磷狀細胞癌（SCC）是向表皮基底細胞層上方的角朊細胞分化的惡性腫瘤，其惡性度高、侵襲性強且易轉(zhuǎn)移擴散。近年研究表明：經(jīng)典β-catenin信號通路異常與多種惡性腫瘤的發(fā)病有密切關(guān)系，例如結(jié)腸癌、胃癌[4]。當(dāng)β-catenin信號通路出現(xiàn)異常，變異的β-catenin積累增多，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，發(fā)揮其病理及致癌作用。本研究結(jié)果表明β-catenin在皮膚SCC中的陽性表達率高達96.7%，與其在皮膚組織慢性炎陽性表達率11.1%比較，有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01），提示β-catenin的異位表達與皮膚SCC的發(fā)生關(guān)系密切。

本研究結(jié)果顯示，在皮膚SCC中VEGF的陽性表達率70.0%，高于皮膚組織慢性炎的陽性表達率22.2%，且有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01），這與Bowden等研究結(jié)果相似，說明VEGF的異常高表達與皮膚SCC的發(fā)生也有密切關(guān)系。本實驗初步探討β-catenin和VEGF在皮膚SCC中的表達及其關(guān)聯(lián)性，然而需明確二者在皮膚SCC中的作用機制，還需要運用多種方法進行大量、細致的研究。

[1] Lustig B,Behrens J.The Wnt signaling pathway and its role in tumor development[J].J Cancer Res Clin Oncol,2003,129(4)：199-221.

[2] Maruyama K,Ochiai A,Akimoto S,et al.Cytoplasmic beta-catenin accumulation as a predictor of hematogenous metastasis in human colorectal cancer[J].Oncology,2000,59(4)：302-309.

[3] 許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標準[J].中國癌癥雜志,1996,6(4)： 229-231.

[4] 韓向春,康金旺,鄭力強,等.Wnt-1、β-catenin、APC和cyclin D1蛋白在胃癌中的表達[J].腫瘤防治研究,2011,38 (2)：163-166.

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1671-8194（2017）09-0019-01

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