杜蕊+段佛龍+李金璐+徐小丹+蔣大兵+秦燕

【摘要】目的：觀察納米銀凝膠治療右旋葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)的小鼠直腸潰瘍的有效性。方法：30只昆明小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。模型組、治療組小鼠自由飲用4% DSS溶液，連續(xù)7d，同時(shí)給予對(duì)照組飲用冷卻白開水。第8天，治療組小鼠行納米銀凝膠灌腸治療（01mL/只·d），其余小鼠給予等量單純凝膠灌腸，共7d。每天監(jiān)測(cè)小鼠體重，大便性狀和隱血情況。后處死小鼠，HE染色觀察直腸組織的病理學(xué)改變。結(jié)果：納米銀凝膠治療7d后，治療組小鼠體重增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；直腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分模型組小鼠在治療前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005），而治療組小鼠的評(píng)分值在治療前后有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005）。病理形態(tài)學(xué)顯示：模型組小鼠直腸黏膜上皮壞死脫落，可見明顯潰瘍?cè)睿委熃M小鼠直腸形態(tài)明顯改善。結(jié)論： 納米銀凝膠對(duì)小鼠直腸潰瘍具有一定的治療作用，為納米銀凝膠拓展新用途提供了理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】納米銀；直腸潰瘍；治療效果

【中圖分類號(hào)】R2855【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）05-0055-03

隨著人們生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)的改變，直腸潰瘍?cè)谖覈?guó)的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)[1]。但直腸潰瘍的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，大多學(xué)者認(rèn)為是局部直接損傷或各種原因引起的局部缺血所致，常伴有感染及菌群失調(diào)。若直腸潰瘍經(jīng)久不愈還有惡變的可能。調(diào)查發(fā)現(xiàn)直腸癌往往以直腸潰瘍?yōu)槭紕?dòng)因素[2]，因此直腸潰瘍應(yīng)引起人們的高度重視。

納米銀（Nano Silver）是利用前沿納米技術(shù)將銀納米化，其可產(chǎn)生強(qiáng)大的殺菌作用，且具有廣譜性和無耐藥性，其次還能促進(jìn)傷口的愈合、細(xì)胞的生長(zhǎng)及受損細(xì)胞的修復(fù)等[3]，目前在臨床上被應(yīng)用于治療婦科疾病、口腔潰瘍、燒傷等?；诖耍狙芯客ㄟ^建立直腸潰瘍小鼠模型，觀察納米銀的治療作用，為擴(kuò)展納米銀在臨床上的用途提供一定的理論依據(jù)，為直腸潰瘍的治療提供新的策略。

1儀器與材料

11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠。級(jí)別：SPF；動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2015-030。體重18～22g，雌雄不限，購(gòu)自大理大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

12材料AGS-NM400納米銀凝膠（批號(hào)：15102804501；Ag含量≥400ppm；pH（70±05）；粒徑15nm；密度120g/mL；上海滬正納米科技有限公司）；NJ-001單純凝膠（批號(hào)：15102804501；上海滬正納米科技有限公司）；DSS（MW：35000～50000，上海翊圣生物科技有限公司）；隱血試紙（珠海貝索生物技術(shù)有限公司），甲醛、蘇木素-伊紅染液、二甲苯等試劑均為分析純。

13儀器KD-MB生物組織包埋機(jī)（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司）；YR-18全自動(dòng)染色機(jī)（孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司）；HM315石蠟切片機(jī)（德國(guó) MICROM GmbH）；菜斯AXIOSKOP20多功能顯微鏡（蔡司遠(yuǎn)東有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），自制小鼠灌腸裝置（1mL注射器、頭皮針）[4]。

2方法

21實(shí)驗(yàn)分組及模型制備取30只昆明小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（對(duì)照組）、直腸潰瘍模型組（模型組）及納米銀凝膠治療組（治療組），每組10只。模型組和治療組小鼠自由飲用4% DSS（分子量：35000～50000）溶液，連續(xù)7d[5]，同時(shí)給對(duì)照組小鼠自由飲用冷卻白開水。第8天，治療組小鼠開始給納米銀凝膠灌腸（01mL/只），1次/d，而對(duì)照組、模型組小鼠以相同方式給等量單純凝膠灌腸，連續(xù)治療7d。

22疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分（Disease Activity Index，DAI）參照Cooper HS等[6-7]的方法，每天定時(shí)監(jiān)測(cè)小鼠體重，觀察小鼠糞便性狀（成形顆粒樣便記為正常；糊狀或不成形不糊肛便記為松散；水樣糊肛便記為稀便），大便隱性或顯性出血情況，進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分。見表1。

23直腸病理形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，取距肛門相同距離（1cm）處同一部位組織（2mm×10mm），4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片（4μm），HE染色，盲法閱片，觀察其組織學(xué)損傷程度及修復(fù)情況。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS190進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分值和體重變化量各組比較用q檢驗(yàn)、組內(nèi)比較用t檢驗(yàn)，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31各組小鼠體重變化情況小鼠直腸潰瘍模型建立初期（前4d），3組小鼠體重變化量不大（P>005）。建模第5天，模型組與治療組小鼠體重下降明顯，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<005）；而模型組與治療組比較，小鼠體重變化量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P>005），見表2、圖1。經(jīng)納米銀凝膠治療后，治療組小鼠體重下降趨勢(shì)減緩，并有上升，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），見表3、圖2。（注：xn-x0表示各組小鼠試驗(yàn)期每天的平均體重與試驗(yàn)前起始平均體重的差值，該計(jì)算方法可有效的表示小鼠在試驗(yàn)期間的體重變化趨勢(shì)。）

32疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分建模7d后，模型組與治療組小鼠直腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分值均增高，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而治療組與模型組小鼠直腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P>005）。治療7d后，模型組小鼠直腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分值與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）；而治療組小鼠直腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分值較治療前明顯減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見表4。

33各組小鼠直腸組織病理形態(tài)學(xué)變化模型組黏膜上皮壞死脫落形成潰瘍?cè)睿M織間隙明顯水腫，腺體結(jié)構(gòu)模糊，伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；治療組黏膜上皮延伸生長(zhǎng)，再生修復(fù)，不同程度的組織水腫和充血減輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少；對(duì)照組黏膜、黏膜下層及肌漿層均完整，無明顯病變。見圖3。

4討論

直腸潰瘍（Rectal ulcers）是指局限于直腸粘膜及粘膜下層的炎癥過程，多位于乙狀結(jié)腸和直腸，也可延伸至降結(jié)腸，甚至整個(gè)結(jié)腸。其臨床癥狀常呈間斷性腹部隱痛、肛門下墜、粘液膿血便等。該病往往反復(fù)發(fā)作長(zhǎng)達(dá)數(shù)月、數(shù)年乃至數(shù)十年，給患者身心造成極大痛苦[8]。臨床上多用水楊酸柳氮磺胺類藥物和腎上腺糖皮質(zhì)激素等來治療直腸潰瘍，有一定療效[9]。但上述藥物不良反應(yīng)較多，且易引發(fā)二重感染和產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性。因此亟待尋找新的更有效的藥物進(jìn)行治療。 銀作為一種優(yōu)良的天然抗菌劑，已經(jīng)有幾個(gè)世紀(jì)的應(yīng)用史，其應(yīng)用形式主要包括銀離子、銀單質(zhì)和銀復(fù)合物。納米銀（Nano Silver）是利用前沿納米技術(shù)將銀納米化，使其具有極大的比表面積，，增強(qiáng)了納米銀與微生物之間的相互作用，與其他形式的銀相比具有更強(qiáng)的抗菌活性。納米銀還可以在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)持續(xù)釋放銀離子，使其抗菌活性更持久[10]。此外納米銀還能促進(jìn)傷口的愈合、細(xì)胞的生長(zhǎng)及受損細(xì)胞的修復(fù)，且對(duì)人體毒副作用極小，不易產(chǎn)生耐藥性[11]。這些特點(diǎn)使納米銀成為臨床創(chuàng)傷治療的研究熱點(diǎn)之一。目前在臨床上已被廣泛應(yīng)用于治療婦科疾病、口腔潰瘍、燒傷等。研究通過建立直腸潰瘍的小鼠模型，觀察納米銀對(duì)其的治療效果。

直腸粘膜慢性炎癥改變和潰瘍形成是直腸潰瘍的主要病理特征，故疾病活動(dòng)指數(shù)、體重變化及直腸組織形態(tài)學(xué)觀察是了解直腸潰瘍治療是否有效的重要指標(biāo)。研究結(jié)果顯示：模型組、治療組小鼠于建模7d后出現(xiàn)稀便、大便隱血實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性及血便，并伴有明顯體重下降，說明小鼠直腸潰瘍的模型建立是成功的。之后治療組用納米銀凝膠連續(xù)治療7d，小鼠體重下降幅度逐漸減緩并有上升趨勢(shì)，大便性狀好轉(zhuǎn)，隱血實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)陰，無血便。與治療前比較，治療組疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分值明顯減小，表明納米銀凝膠對(duì)小鼠直腸潰瘍有一定的治療作用。直腸病理形態(tài)學(xué)顯示：模型組黏膜上皮壞死脫落形成潰瘍?cè)?，組織間隙明顯水腫，腺體結(jié)構(gòu)模糊，伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；而納米銀凝膠治療后，小鼠直腸黏膜上皮延伸生長(zhǎng)修復(fù)，固有層大量肉芽組織及瘢痕組織增生取代壞死組織，不同程度的組織水腫和充血減輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，表面納米銀凝膠對(duì)小鼠直腸潰瘍具有一定的抗?jié)兒托迯?fù)作用。

綜上所述，納米銀凝膠對(duì)小鼠直腸潰瘍具有一定的治療作用，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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