王燕

【中圖分類號(hào)】R574 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）03-0-02

炎癥性腸?。↖BD）是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，病因尚不明確，包括潰瘍性結(jié)腸炎（UC）和克羅恩?。–D）。其中硫唑嘌呤（AZA）為維持治療和誘導(dǎo)緩解炎癥性腸病的藥物，1.5～2.5mg·kg-1·d–1為常用劑量，是一種較常見的免疫制劑，可以實(shí)現(xiàn)減少患者激素的耐藥性和依賴性[1]。由于個(gè)體差異，部分患者服用常規(guī)劑量的AZA后，臨床癥狀并無(wú)緩解，甚至嚴(yán)重者出現(xiàn)毒副反應(yīng)或骨髓移植以及肝臟毒性，因此限制了臨床應(yīng)用。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取確診為炎癥性腸病并擬接受嘌呤類似物治療的患者15例，男性7例，女性8例，其中3例為潰瘍性結(jié)腸炎患者，12例為克羅恩病患者。

潰瘍性結(jié)腸炎的診斷：病程超過半年，伴有反復(fù)黏液膿血便，排除了細(xì)菌性菌痢、慢性血吸蟲病、阿米巴痢疾、腸結(jié)核病等，且病變處明顯可見彌漫性多發(fā)潰瘍。

克羅恩病的診斷：病程超過半年，右下腹或臍周腹痛、腹瀉并伴有肛瘺、腹部腫塊、貧血、肛周病變等全身癥狀，排除腸結(jié)核、阿米巴痢疾等慢性腸道感染、缺血性腸炎、白塞病等，內(nèi)鏡下可見節(jié)段性病變、阿弗他潰瘍等表現(xiàn)。

1.2 方法

1.2.1 6-TGNs濃度測(cè)定法 在酸性條件下，6-TGNs上的磷酸基團(tuán)水解脫落成為6-TG，可作為定量TGNs濃度。

1.2.2 TPMT基因基因檢測(cè)方法 采用基因擴(kuò)增儀、高速離心機(jī)、焦磷酸測(cè)序儀等儀器進(jìn)行人外周血基因組DNA提取。

2.結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞內(nèi)6-TGNs濃度測(cè)定

采用色譜法進(jìn)行相關(guān)測(cè)定，得出結(jié)果，得回歸方程Y=0.0223X-0.0325，紅細(xì)胞中6-TGNs濃度在7.87～787.40pmol范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9997）；RSD在0.46%～7.64%之間（日內(nèi)、日間精密度），高、中、低質(zhì)控液方法回收率在99.10%～102.07%之間，RSD在3.65%～6.71%之間（穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。

2.2 TPMT基因檢測(cè)

TPMT*3野生型為460位G90%，A10%，719位A%，G10%。雜合型突變位460位G，A堿基頻率30%～70%；719位A，G堿基頻率30%～70%，純合子突變?yōu)?60位G10%，A90%；719位A0%，G90%?；驒z測(cè)序列和結(jié)果。

2.3 測(cè)定結(jié)果

15例患者在接受AZA治療前進(jìn)行TPMTA719G和G460A位點(diǎn)的檢測(cè)。長(zhǎng)期服用嘌呤類似物的炎癥性腸病患者（每日劑量50mg、75mg、100mg），分別測(cè)定紅細(xì)胞內(nèi)6-TGNs的濃度，平均值位319.44pmol/（8*108）RBC?；颊叻肁ZA首次檢測(cè)結(jié)果，見表2。

所有患者在服用AZA之前或治療過程中進(jìn)行基因位點(diǎn)的檢測(cè)，G460A位點(diǎn)可見基因型位GG、GA、AA，A719G位點(diǎn)可見基因型為AA、AG、GG，結(jié)果均為野生型，這個(gè)結(jié)果提示患者使用嘌呤類似物時(shí)發(fā)生骨髓毒副作用的風(fēng)險(xiǎn)較低。

3.討論

炎癥性腸病和自身免疫疾病及相關(guān)疾病的治療可以應(yīng)用非特異性的免疫抑制劑，例如6-巰基嘌呤和AZA等嘌呤類藥物。嘌呤類似物為無(wú)活性的前體藥物，需要經(jīng)過體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)變?yōu)?-TGNs后才能發(fā)揮療效。臨床上測(cè)定人紅細(xì)胞中6-TGNs的濃度，大多通過6-TGNs在酸性條件下磷酸基團(tuán)水解后生成6-TG后采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，這種測(cè)定方法專屬性強(qiáng)并且簡(jiǎn)單快捷。

本研究采用的焦磷酸測(cè)序法適用于對(duì)已知的短序列的測(cè)序分析，來證明它適用于基因的多形態(tài)的分析，并且具有林敏度高、精確性好的特點(diǎn)，可以直觀、快速、適時(shí)、低成本、高通量的進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性研究[2]。本研究檢測(cè)了15例患者的紅細(xì)胞6-TGNs濃度，對(duì)于部分患者的血藥濃度進(jìn)行了相應(yīng)的劑量調(diào)整，結(jié)果表明，嘌呤類似物治療炎癥性腸病取得了較好的療效，同時(shí)也可以預(yù)防產(chǎn)生的毒副作用。但本研究檢測(cè)的15例患者的G460A和A719G基因序列，并未發(fā)現(xiàn)TPMT*3C的突變，因此今后需擴(kuò)大病例數(shù)來進(jìn)一步檢測(cè)證實(shí)TPMT基因聯(lián)合6-TGNs濃度檢測(cè)對(duì)于臨床治療炎癥性腸病的指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]奎映仙.糖皮質(zhì)激素及嘌呤類私物在炎癥性腸病治療中的應(yīng)用與評(píng)價(jià)[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)生，2016，32（2），18-20.

[2]萬(wàn)子睿，謝海棠，俞競(jìng)等.焦磷酸測(cè)序分析ABCG2基因多態(tài)性方法的建立[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2012，17（7）：779-784.