李有恒++徐洪++曾+訓

[摘要]目的 探討IMP3、Ki-67在胃腸胰神經分泌腫瘤（GEP-NEN）中的表達及與臨床病理特征的關系。方法 收集我院及周邊地區(qū)自2010年1月～2016年10月確診的59例GEP-NEN，運用免疫組織化學方法檢測患者標本中的IMP3、Ki-67表達情況，結合臨床病理特征，應用統(tǒng)計學的方法對結果進行分析。結果 IMP3在GEP-NEN中陽性率為81.36%（48/59），在不同腫瘤直徑、有無淋巴結轉移、不同腫瘤分期與分級中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），在是否有遠處轉移中的表達差異沒無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；Ki-67在GEP-NEN中陽性率為44.68%（26/59），在腫瘤大小、有無淋巴結轉移、有無遠處轉移、病理分級及臨床分期中的表達差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；IMP3、Ki-67表達隨著腫瘤體積越大、淋巴結轉移、病理分級越高、臨床分期越晚陽性率越高。結論 IMP3與Ki-67在GEP-NEN的表達可作為判斷患者預后的參考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。

[關鍵詞]神經內分泌腫瘤；胰島素樣生長因子Ⅱ mRNA結合蛋白3；細胞增殖核抗原

[中圖分類號] R735 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）02（c）-0015-04

Expression of IMP3 and Ki-67 in gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm and its relationship with clinicopathological features

LI You-heng XU Hong▲ ZENG Xun

Department of Pathology，Shekou People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518067，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of IMP3 and Ki-67 in gastrointestinalopancreatic neuroendocrine neoplasm （GEP-NEN） and its relationship with clinicopathological features.Methods 59 patients with GEP-NEN diagnosed from January 2010 to October 2016 in our hospital and other surrounding areas were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of IMP3 and Ki-67 in patients′ specimens.Clinical and pathological features were combined，and the results were statistically analyzed.Results The positive rate of IMP3 in GEP-NEN was 81.36% （48/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，different tumor stages and classifications were statistically significant （P<0.05）.There was no statistical significance in the expression of tumor in terms of whether there was distant metastasis or not （P>0.05）.The positive rate of Ki-67 in GEP-NEN was 44.68% （26/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，whether there was distant metastasis or not，different pathological grades and clinical stages were statistically significant （P<0.01）；the positive rate of the expression of IMP3 and Ki-67 was increased with larger tumor size，lymph node metastasis，higher pathological grades，and more advanced clinical stages.Conclusion The expression of IMP3 and Ki-67 in GEP-NEN may be one of the reference factors for determining patients′ prognosis.IMP3 may play an important role in the development and progression of GEP-NEN.

[Key words]Neuroendocrine neoplasm；Insulin-like growth factor Ⅱ mRNA binding protein 3；Cell proliferating nuclear antigen神經內分泌腫瘤（neuroendocrine neoplasm，NEN）是起源于肽能神經元以及神經內分泌細胞的一組異質性惡性腫瘤，都有轉移潛能[1]。NEN可發(fā)生在人體多處器官和組織，主要發(fā)生在胃腸道和胰腺，胃腸胰神經內分泌腫瘤（gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）占所有NEN的55%～70%，發(fā)病率約為5.25/10萬，在消化道腫瘤中排第2位[2]。近年來，GEP-NEN發(fā)病率明顯升高，與30年前相比增加了將近5倍[3]。胰島素樣生長因子Ⅱ mRNA結合蛋白3（insulin-like growth factorⅡ mRNA binding protein 3，IMP3）是一種新識別的腫瘤胚胎蛋白，是影響腫瘤增殖及侵襲轉移的重要因素之一[4]；惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細胞增殖密切相關；細胞增殖核抗原（cell proliferating nuclear antigen）（Ki-67）是細胞增殖的良好標志。目前，IMP3在GEP-NEN中的表達關系少有研究，國內未見報導，本研究回顧性分析59例GEP-NEN患者的臨床病理資料，通過免疫組織化學方法檢測IPM3、Ki-67水平，了解其與GEP-NEN臨床病理特征的關系。

1資料與方法

1.1 一般資料

收集廣東廣州、深圳及東莞等5家醫(yī)院自2010年1月～2016年10月確診的59例胃腸胰神經內分泌腫瘤，男性41例，女性18例，男女比例2.28∶1。年齡19～77歲，平均47.9歲。發(fā)生在前腸19例，中腸14例，后腸8例，胰腺18例。腫瘤直徑0.4～7 cm，其中直徑≥2 cm共34例，<2 cm共25例。發(fā)生淋巴結轉移14例。發(fā)生遠處轉移8例，其中4例肝轉移，2例肺轉移，皮膚及骨轉移各1例。按2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》的分級標準[5]，1級（G1）27例，2級（G2）14例，3級（G3）18例；G1、G2是NEN，屬于高分化腫瘤，G3是神經內分泌癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），屬于低分化腫瘤。參照美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committe on Cancer，AJCC） 2010年第7版TNM分期標準[6]，Ⅰ期23例，Ⅱ期8例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

所有標本均用4%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，以4 μm厚度切片，分別做HE和免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）染色。鼠抗人IMP3單克隆抗體（工作濃度1∶100）購自武漢博士德公司；鼠抗人Ki-67單克隆抗體購自福州邁新生物有限公司，通過羅氏全自動免疫組化染色儀（BENCHMARK GX）完成免疫組化染色，參照該儀器操作流程：①4 μm厚石蠟切片置于65℃烤片機中烤60 min，貼上標簽置于機器切片盤上；②依次放上DAB試劑盒、蘇木精、返藍液和一抗等試劑瓶，運行儀器；③機器自動完成消化、抗體孵育和復染；④用含有溫和清潔劑的蒸餾水沖洗、乙醇脫水、二甲苯透明，最后中性樹脂膠封固；⑤用已知陽性組作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判讀

采用雙盲法，所有病例均由兩位高年資病理醫(yī)師閱片。IPM3陽性定位于細胞質，光鏡下呈黃褐色（圖1），以>10%的腫瘤細胞胞質著色定為陽性，按著色強度分弱陽性、中陽性及強陽性，相應顯示為淺黃色、棕黃色及棕褐色。Ki-67陽性定位于細胞核，光鏡下呈黃褐顆粒狀（圖2），以>5%的腫瘤細胞核著色定為陽性，以陽性腫瘤細胞數占比≥50%定為高增殖活性。

1.4 統(tǒng)計學方法

所有數據采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件處理，各組計數資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

IMP3陽性率為81.36%（48/59），強陽性5例，中陽性27例，弱陽性16例；IMP3在腫瘤大小、淋巴結轉移、病理分級及臨床分期中的表達差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而在腫瘤是否有轉移的表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Ki-67陽性率為44.68%（26/59），高增殖活性12例；Ki-67在腫瘤大小、淋巴結轉移、遠處轉移、病理分級及臨床分期的表達差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（表1）。

3 討論

GEP-NEN是罕見的異質性腫瘤，可表現(xiàn)為相對惰性、低度惡性到高度惡性[7]，有研究顯示，GEP-NEN發(fā)病率男性高于女性[3]，本研究與此相符。近年發(fā)病率明顯升高，與醫(yī)療診斷技術的進步有關，但實際發(fā)病率也是升高的[8]。

1907年，Oberndorfer發(fā)現(xiàn)胃腸道有一種類似癌的良性腫瘤，并命名為類癌[9]，這是人們對胃腸胰神經內分泌腫瘤的早期認識，后來證實這類腫瘤都是惡性的。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其來源于消化道彌散神經內分泌系統(tǒng)，部分腫瘤能攝取胺前體及脫羥基（amine precursor uptake and decarboxylation， APUD），所以又叫APUD瘤[10]。由于組織形態(tài)多樣，生物學行為復雜，長期以來，這類腫瘤的命名及分類較為紊亂，直到2000年世界衛(wèi)生組織（WHO）才統(tǒng)一命名為神經內分泌腫瘤[11]，2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》第4版對胃腸胰神經內分泌腫瘤制訂了分級、分期標準，同年得到中國胃腸胰神經內分泌腫瘤病理學診斷共識的一致推薦[12]。GEP-NEN分級、分期被證實是影響患者生存率的獨立危險因素[13]，有報道稱GEP-NENⅠ、Ⅱ期患者5年總生存率達100%，Ⅲ期為91%，Ⅳ期為73%[14]。

IMP3是胰島素樣生長因子ⅡmRNA結合蛋白家族成員之一，在胚胎組織及人體多種惡性腫瘤中高表達，在瘤旁組織、良性腫瘤及成人正常組織中不表達或低表達，被認為是腫瘤胚胎蛋白[15]，大量研究表明，IMP3與消化道鱗癌、腺癌、膽管癌、乳腺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤的侵襲和進展關系密切，被認為是影響腫瘤患者預后的一個關鍵因素[4]?；A研究揭示IMP3通過結合信使RNA，促進目標RNA的翻譯，上調胰島素樣生長因子Ⅱ水平，從而引起細胞增殖并抑制細胞凋亡，是促進腫瘤增殖的重要因素[16]。同時IMP3可以通過上調兩性霉素誘導基因、白細胞活化黏附因子和基質金屬蛋白酶1等的表達，促進腫瘤細胞偽足形成，提高腫瘤細胞的黏附作用，從而增加腫瘤侵襲性[17]。本研究結果顯示，IMP3在GEP-NEN中表達陽性率較高，且明顯高于瘤旁正常組織，表明IMP3表達的上調可能在GEP-NEN的發(fā)生中起重要作用。同時IMP3在不同腫瘤直徑、有無淋巴結轉移、不同腫瘤分期與分級中的表達差異有統(tǒng)計學意義，并且均成正相關，表明IMP3可能在GEP-NEN的惡性進展中也起到重要作用；本實驗IMP3在是否有遠處轉移中的表達差異無統(tǒng)計學意義，與部分研究不太一致[18]，但發(fā)生遠處轉移組陽性率為100.00%（8/8），高于無遠處轉移組的78.41%（40/51），考慮可能與實驗樣本的局限性如病例的選擇性偏移等有關，還有待進一步研究。以上結果顯示IMP3在GEP-NEN總體陽性率較高，與影響GEP-NEN患者預后的多個主要危險因素呈正相關。

Ki-67是一種與細胞增殖相關的核蛋白，只存在于細胞核內，本身的存在并不依賴于DNA和組蛋白，只表達于細胞周期的G1、S、G2及M期[19]，能較準確的反映細胞的增殖狀態(tài)[20]，2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》第4版把Ki-67納入GEP-NEN的增殖活性分級指標之一。有報導稱Ki-67可以評估GEP-NEN轉移潛能以及預測患者的生存期[21]。本研究顯示Ki-67在腫瘤直徑<2 cm、無淋巴結轉移、無遠處轉移、分期較早、級別較低的腫瘤中表達陽性率較低，相反則陽性率均較高，組間差異有統(tǒng)計學意義，同時KI-67高增殖集中在高級別及分期晚的病例，表明Ki-67能較直觀地顯示腫瘤惡性程度，印證了Ki-67高表達，則腫瘤浸潤和轉移的能力越強，臨床分期越晚[19]。

綜上所述，IMP3、Ki-67在GEP-NEN的表達均隨著腫瘤惡性程度的增加而上調，可作為判斷患者預后的參考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，隨著對IMP3作用機制的更深入研究，可能為臨床治療GEP-NEN帶來新的手段。

[參考文獻]

[1]Modlin IM，Champaneria MC，Bornnschein J，et al.Evolution of the diffuse neuroendocrine system-clear cells and cloudy origins[J].Neuroendocrinology，2006，84（2）：69-82.

[2]Dierdorf SF.Carcinoid tumor and carcinoid syndrome[J].Curr Opin Anaesthesiol，2003，16（3）：343-347.

[3]Yao JC，Hassan M，Phan A，et al.One hundred years after “carcinoid”：epidemiology of and prognostic factors for neuroendocrine tumors in 35，825 cases in the United States[J].J Clin Oncol，2008，26（18）：3063-3072.

[4]張冉，敖啟林.IMP3在人類腫瘤細胞中的表達及研究現(xiàn)狀[J].濟寧醫(yī)學院學報，2012，35（4）：297-300.

[5]Bosman FT，Carneiro F，Hruban RH，et al.World Health Organization classification of tumours of the digestive system[M].Lyon：IARC Press，2010：1-155.

[6]Edge SB，Byrd DR，Compton CC，et al.AJCC cancer staging manual[M].7th ed. New York：Springer，2010.

[7]孫麗梅，邱雪杉，王恩華.消化系統(tǒng)神經內分泌腫瘤臨床病理特征和免疫組織化膿觀察[J].中華病理學雜志，2012， 41（10）：696-697.

[8]朱雄增.胃腸胰神經內分泌腫瘤新分類的臨床意義[J].中華胃腸外科雜志，2013，16（1）：12-14.

[9]Oberndorfer S.Karzinoide tumoren des dunndarms[J].Frankfurt Z Pathol，1907，1：426-432.

[10]萬德森.低位直腸類癌的外科治療[J].中國實用外科雜志，2005，25（3）：143-144.

[11]應紅艷，叢雪晶，趙林，等.胃腸胰神經內分泌腫瘤分類和分期進展[J].癌癥進展，2011，9（5）：507-513.

[12]中國胃腸胰神經內分泌腫瘤病理專家組.中國胃腸胰神經內分泌腫瘤病理學診斷共識[J].中華病理學雜志，2011， 40（4）：257-261.

[13]梁文全，高云鶴，李佶陽，等.104例胃神經內分泌腫瘤的臨床病理特征及預后分析[J].中華胃腸外科雜志，2016， 19（4）：427-431.

[14]]李增山.胃腸胰神經內分泌腫瘤分類及病理學進展[J].浙江大學學報（醫(yī)學版），2016，45（1）：12-14.

[15]Li C，Rock KL，Woda BA，et al.IMP3 is a novel biomarker for adenocarcinoma in situ of the uterine cervix：an immunohistochemical study in comparison with pl6INK4a expression[J].Modern Pathol，2007，20（2）：242-247.

[16]劉紀昀，易韋，于燕妮，等.IMP3及其研究進展[J].貴州醫(yī)藥，2013，37（3）：277-278.

[17]Vikesaa J，Hansen TV，Jonson L，et al.RNA-binding IMPs promote cell adhesion and invadopodia formation[J].EMBO J，2006，25（7）：1456-1468.

[18]嚴東旺，李大衛(wèi)，周崇治，等.胰島素樣生長因子Ⅱ mRNA結合蛋白-3在結腸癌中的表達及臨床意義[J].中華實驗外科雜志，2010，27（8）：1046-1048.

[19]周越，仇金榮，丁曉蓉，等.胃腸胰神經內分泌腫瘤中Ki-67的表達及其預后的相關性研究[J].臨床腫瘤學雜志，2013，18（6）：506-509.

[20]Sasaki K，Murakami T，Kawasaki M，et al.The cell cycle associated change of the Ki-67 reactive nuclear antigen expression[J].J Cell Physiol，1987，133（3）：579-584.

[21]Hotta K，Shimoda T，Nakanishi Y，et al.Usefulness of Ki-67 for predicting the metastatic potential of rectal carcinoids[J].Pathol Int，2006，56（10）：591-596.

（收稿日期：2016-12-06 本文編輯：許俊琴）