陳金鳳+楊東亮+朱青梅+滕亮

[摘要] 目的 為復(fù)方芍紅顆粒的貯存條件及有效期的制訂提供參考。 方法 采用影響因素試驗(yàn)，高溫（60、40℃），高濕[RH（90±5）%、（75±5）%]，光照[照度（4500±500）lx]等條件探測(cè)影響該制劑的因素，加速試驗(yàn)[溫度（40±2）℃、濕度（75±5）%；溫度（30±2）℃，濕度（60±5）%]加速其有效成分的降解，經(jīng)典恒溫試驗(yàn)（在50～80℃4個(gè)不同溫度恒溫水浴鍋條件下，定時(shí)取樣，測(cè)定溶液中芍藥苷的殘余濃度）初步預(yù)測(cè)其有效期。結(jié)果 影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方芍紅顆粒對(duì)光線較為穩(wěn)定，但高溫高濕條件下芍藥苷含量均有明顯下降，提示在貯存過程中應(yīng)注意控制環(huán)境的濕度與溫度，應(yīng)于陰涼干燥處存放，通過經(jīng)典恒溫法預(yù)測(cè)該顆粒劑有效期為1.48年。 結(jié)論 本文建立了可用于控制復(fù)方芍紅顆粒質(zhì)量穩(wěn)定的儲(chǔ)存條件，采用復(fù)合膜密閉包裝且低溫干燥處存放，可以提高該制劑的穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)精密度高、重復(fù)性好、可信度高，所得數(shù)據(jù)可為復(fù)方芍紅顆粒最終的貯存條件及有效期的制訂提供參考。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)方芍紅顆粒；影響因素試驗(yàn)；加速試驗(yàn)；經(jīng)典恒溫試驗(yàn)

[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）02（c）-0151-04

復(fù)方芍紅顆粒是根據(jù)臨床驗(yàn)方研發(fā)而成的中藥新藥，原方主要是由赤芍、紅花、川芎、紅景天四味藥材組成，赤芍，方中君藥，性微寒、微苦，具有清熱涼血，散瘀止痛之功效。用于跌撲損傷，熱入營(yíng)血，吐血衄血，溫毒發(fā)斑，目赤腫痛，肝郁脅痛，臨床用于降血糖、肝保護(hù)、防治老年性癡呆、耐缺氧、擴(kuò)張血管、抗血栓、抗炎等作用[1-2]；紅花，辛、溫。歸心、肝經(jīng)。具有活血通經(jīng)、散瘀止痛之功效，臨床主要用于經(jīng)閉、痛經(jīng)、惡露不行、胸痹心痛、滯腹痛、胸脅刺痛、跌撲損傷、瘡瘍腫痛[3-4]；川穹，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，臨床用于胸痹心痛、胸脅刺痛、跌撲腫痛、頭痛、風(fēng)濕痹痛。味苦、辛，是活血祛瘀、行氣開郁、祛風(fēng)止痛、治療頭痛之首選藥物[5-6]；紅景天，性寒，味苦、澀。能補(bǔ)氣清肺，益智養(yǎng)心，收澀止血，散瘀消腫，臨床用于降低血壓、減慢心率，抗疲勞、抗缺氧、預(yù)防心衰等作用[7-8]；經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，抗冠心病功效良好，因此，該處方主要用于冠心病的治療。冠心病是一種常見的心血管疾病，在心血管疾病中3/4死于冠狀動(dòng)脈疾病，尤其是心肌梗死發(fā)病率明顯增高，且預(yù)后較差[9]。早在20世紀(jì)50年代，其發(fā)病率在西方一些國(guó)家就不斷增高，并成為人類死亡之首。在我國(guó)隨著人民生活水平的不斷提高，人口日益老齡化和預(yù)防保健工作的相對(duì)滯后，冠心病的患病率、發(fā)病率和死亡率也都持續(xù)上升，近年來，發(fā)病率又進(jìn)一步明顯升高，防治任務(wù)十分沉重，應(yīng)該引起人們的關(guān)注。隨著現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，診斷準(zhǔn)確率的提高，多元治療方法的進(jìn)步（藥物治療、介入治療以及手術(shù)治療[10]等），可以更好地改善患者的臨床癥狀，降低病死率，提高生活質(zhì)量。人們普遍希望采用天然無公害植物藥進(jìn)行疾病的防治，從而給中醫(yī)藥防治冠心病提供了良好的契機(jī)。

本課題組前期已經(jīng)完成了芍紅顆粒劑的制備工藝研究，將該處方藥材經(jīng)適宜溶劑提取濃縮后制備成顆粒劑，使其便于服用，穩(wěn)定性強(qiáng)，易貯存保管。為有效控制芍紅顆粒的質(zhì)量，本課題在中醫(yī)藥學(xué)理論和相關(guān)法規(guī)的指導(dǎo)下，對(duì)復(fù)方芍紅顆粒劑的質(zhì)量控制進(jìn)行系統(tǒng)、深入的研究，制訂出科學(xué)、合理、可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為確保該制劑的臨床安全性和有效性提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行研究與開發(fā)提供依據(jù)。

本課題在完成其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案[11-12]的基礎(chǔ)上，為了確定芍紅顆粒儲(chǔ)存控制條件并初步預(yù)測(cè)出其有效期，對(duì)復(fù)方芍紅顆粒劑進(jìn)行了初步的穩(wěn)定性研究[13-20]，為此保證該藥在生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存、使用的過程中更加安全有效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC20-AB高效液相色譜儀（日本島津，SPD-20A檢測(cè)器）；DK-S26恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；101-E電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；KQ3200超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BS110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；DHG-9070A電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）；色譜柱（Kromasil C18，5 μm，4.6 mm×250 mm）。

1.2 試劑與試藥

甲醇（色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司），水為超純水，復(fù)方芍紅顆粒（批號(hào)20140618、20140620、20140622），新疆醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室研制。

2 方法與結(jié)果

2.1 影響因素試驗(yàn)

2.1.1 高溫試驗(yàn) 稱取三份復(fù)方芍紅顆粒2.0 g（批號(hào)為20140618、20140620、20140622）置稱量瓶中，打開瓶蓋，放在60℃恒溫箱中，放置10 d，于第5天和第10天取樣，制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中芍藥苷含量測(cè)定方法測(cè)定芍藥苷含量。如供試品含量低于90%，則在40℃下同法進(jìn)行試驗(yàn)。如60℃無顯著變化，則不必進(jìn)行40℃試驗(yàn)[21]。在60℃恒溫箱中放置10 d，供試品含量低于90%，含量有顯著變化，因此在40℃下同法進(jìn)行試驗(yàn)，數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，供試品含量高于90%，說明溫度對(duì)供試品有一定影響的。見表1。

2.1.2 高濕試驗(yàn) 稱取三份復(fù)方芍紅顆粒2.0 g（批號(hào)為20140618、20140620、20140622）置稱量瓶中，打開瓶蓋置恒濕密閉容器中，于25℃、RH（90±5）%條件下放置10 d，在第5天和第10天取樣，制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中芍藥苷含量測(cè)定方法測(cè)定芍藥苷含量及吸濕增重。若吸濕增重5%以上，則應(yīng)在25℃、RH（75±5）%下同法進(jìn)行檢驗(yàn)；若吸濕增重在5%以下，且樣品含量測(cè)定不低于90%，則不再進(jìn)行此項(xiàng)檢驗(yàn)。由表中數(shù)據(jù)可見，濕度對(duì)供試品中芍藥苷的含量及吸濕增重影響顯著，（90±5）%濕度條件下，第10天含量下降近一半，吸濕增重達(dá)44%。結(jié)果見表2～3。

2.1.3 光照試驗(yàn) 稱取三份復(fù)方芍紅顆粒2.0 g（批號(hào)為20140618、20140620、20140622）置稱量瓶中，打開瓶蓋置光照箱或其他適宜的光照容器內(nèi)，于照度（4500±500）lx條件下放置10 d，在第5天和第10天取樣，制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中芍藥苷含量測(cè)定方法測(cè)定芍藥苷含量。光照條件在（4500±500）lx下，第10天含量幾乎沒有變化。結(jié)果見表4。

2.2 加速實(shí)驗(yàn)

復(fù)方芍紅顆粒采用市售復(fù)合膜包裝袋，密閉包裝，在溫度（40±2）℃，相對(duì)濕度（75±5）%的條件下放置6個(gè)月[21-22]。在試驗(yàn)期間第1、2、3、6個(gè)月取樣一次，制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中芍藥苷含量測(cè)定方法測(cè)定芍藥苷含量，將結(jié)果與第0個(gè)月比較，如6個(gè)月內(nèi)供試品經(jīng)檢測(cè)不符合復(fù)方芍紅顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，則應(yīng)在中間條件下即在溫度（30±2）℃，相對(duì)濕度（60±5）%的情況下進(jìn)行加速試驗(yàn)，時(shí)間仍為6個(gè)月，供試品在溫度（40±2）℃，相對(duì)濕度（75±5）%的條件下放置6個(gè)月，芍藥苷含量下降了4.58%。在溫度（30±2）℃，相對(duì)濕度（60±5）%的條件下，芍藥苷含量下降了3.05%，在此條件下，供試品6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表5。

2.3經(jīng)典恒溫試驗(yàn)[23]

精密稱取樣品顆粒1.0 g，置具塞安瓿瓶中，密封，在50～80℃ 4個(gè)不同溫度恒溫水浴鍋條件下，間隔一定的時(shí)間取樣，測(cè)定溶液中芍藥苷的殘余濃度。按照上述方法重復(fù)一次，以芍藥苷剩余濃度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖。見表6，圖1。通過芍藥苷在不同溫度下降解得到的擬合曲線方程可知其反應(yīng)速率常數(shù)K，并根據(jù)阿倫尼烏斯方程LnK=LA-Ea/RT，可以計(jì)算其活化能，結(jié)果表明，芍藥苷在水溶液中的降解反應(yīng)速率隨溫度的升高而加快，該反應(yīng)呈現(xiàn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)規(guī)律。

根據(jù)不同溫度下芍藥苷反應(yīng)速度常數(shù)-溫度表（表7），以各指標(biāo)濃度對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間回歸，求出不同濃度段反應(yīng)速率常數(shù)K。根據(jù)Arrhenius指數(shù)定律K=e-E/RT，以LnK對(duì)1/T作圖（圖2），Arrhenius 方程LnK= -（11321/T）+26.386，r=-0.9848，求出室溫時(shí)的速度常數(shù)K298=8.125×10-6，根據(jù)半衰期公式t1/2=0. 693/K，有效期公式t0.9=0.1054/K，可以預(yù)算出復(fù)方芍紅顆粒的有效期。即室溫（25℃）有效期為t0.9=0.1054/K=1.48年。

3 討論

新藥制劑的穩(wěn)定性研究是關(guān)系到其能否投產(chǎn)上市的重要因素，考察新藥及其制劑在不同環(huán)境因素影響下，經(jīng)一定時(shí)間后檢測(cè)有效成分的含量是否改變，找出影響其穩(wěn)定性的因素，采取相應(yīng)的措施，以阻止或延緩其變化，是使療效好、毒副作用小的藥品被推廣應(yīng)用的必不可少的條件[24]。

3.1 影響因素實(shí)驗(yàn)

樣品暴露在空氣中，接受強(qiáng)光照射、高溫、高濕環(huán)境的考驗(yàn)，考察各項(xiàng)指標(biāo)的變化，可研究該藥品的固有性質(zhì)及各指標(biāo)的影響因素，為貯臧、處方和加工工藝提供資料。復(fù)方芍紅顆粒的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，濕度是影響本品穩(wěn)定性的主要因素，其次是溫度，高溫有一定的影響，光照幾乎沒有影響，為了該制劑的穩(wěn)定性，本品的包裝材料應(yīng)該密閉保存，存儲(chǔ)條件應(yīng)該低溫干燥。

3.2 加速實(shí)驗(yàn)

加速實(shí)驗(yàn)是在未取得室溫留樣穩(wěn)定性結(jié)果之前，考察藥品在臨床研究或試生產(chǎn)期間的穩(wěn)定性，確保藥品質(zhì)量。在極端條件下，通過加速藥物化學(xué)或物理變化，探討藥物的穩(wěn)定性，為藥物的評(píng)審﹑包裝﹑運(yùn)輸及貯藏條件提供參考依據(jù)[25-26]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明6個(gè)月后與第0個(gè)月比較，其有效成分芍藥苷含量在6個(gè)月內(nèi)較穩(wěn)定，符合復(fù)方芍紅顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。

3.3 經(jīng)典恒溫實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)通過不同溫度，不同時(shí)間取樣對(duì)芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，通過對(duì)每個(gè)溫度下進(jìn)行回歸，得出K值，以LnK對(duì)溫度的倒數(shù)1/T作圖，得方程LnK=-（11321/T）+26.386 R=-0.9848，將T=298代入方程，得K298=8.125×10-6，室溫（25℃）預(yù)測(cè)出有效期為t0.9=0.1054/K=1.48年。

通過復(fù)方芍紅顆粒的穩(wěn)定性研究，確定溫度與濕度為該制劑不穩(wěn)定因素，因此包裝材料應(yīng)密閉，且干燥貯存。加速試驗(yàn)結(jié)果顯示6個(gè)月內(nèi)該制劑較為穩(wěn)定。經(jīng)典恒溫法預(yù)測(cè)出復(fù)方芍紅顆粒的有效期為1.48年，約18個(gè)月，該數(shù)據(jù)為復(fù)方芍紅顆粒的有效期的制訂提供參考。

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（收稿日期：2016-05-20 本文編輯：王 麗）