李曉貽，時(shí)燕萍，夏親華

(江蘇省中醫(yī)院，南京210039)

卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫是指子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過(guò)程中，異位的子宮內(nèi)膜進(jìn)入卵巢皮質(zhì)生長(zhǎng)，逐步發(fā)展而導(dǎo)致的囊腫型病變[1]。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病可能與T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫逃逸有關(guān)，被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜異位癥最重要的機(jī)制之一[2]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)在腫瘤、器官移植、自身免疫病和病毒性感染等疾病中發(fā)揮著重要作用，而叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(FOXP3)是調(diào)控Treg細(xì)胞功能的主要轉(zhuǎn)錄因子[3]。B7同源體4(B7-H4)作為B7超家族的新成員，可通過(guò)抑制IL-2及T細(xì)胞增殖來(lái)抑制T細(xì)胞的免疫應(yīng)答[4]，調(diào)節(jié)免疫活性，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。但FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的作用尚不明確。2014年1月～2016年1月，我們檢測(cè)了30例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者囊腫組織FOXP3與B7-H4的表達(dá)，并與二者在卵巢癌組織及卵巢良性腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行比較，探討二者在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院行手術(shù)治療的卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者囊腫組織30例作為囊腫組，患者年齡(35.37±9.55)歲，囊腫直徑>5 cm，r-AFS分期>Ⅲ期，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為卵巢子宮內(nèi)膜異位癥囊腫。選取行手術(shù)治療的卵巢癌患者卵巢癌組織20例作為癌癥組，患者年齡(37.95±12.73)歲，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為卵巢癌，臨床分期Ⅰc～Ⅱ期7例、Ⅲ～Ⅳ期13例。選擇行手術(shù)治療的良性卵巢腫瘤患者腫瘤組織20例作為良性組，患者年齡(37.80±10.65)歲，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為良性卵巢腫瘤。三組患者的年齡具有可比性。

1.2 病變組織FOXP3及B7-H4檢測(cè)方法 采用免疫組化Envision兩步法。將組織標(biāo)本做成蠟塊后進(jìn)行切片，采用二甲苯脫蠟，微波抗原修復(fù)后，加入一抗(1∶100稀釋鼠抗人FOXP3單抗或1∶150稀釋鼠抗人 B7-H4單抗)封閉4 ℃過(guò)夜；加入Envision后進(jìn)行DAB顯色，蘇木素復(fù)染，樹(shù)脂封片。陰性對(duì)照采用PBS作為一抗。FOXP3主要表達(dá)于淋巴細(xì)胞的細(xì)胞核中，B7-H4 主要表達(dá)于上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和細(xì)胞膜中，二者均以出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。首先按陽(yáng)性細(xì)胞面積占全片的比例計(jì)分，≤5%計(jì)0分，>5%～25%計(jì)1分，>25～50%計(jì)2分，>50%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分。其次按著色強(qiáng)度計(jì)分，無(wú)色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分。二者相加為最終得分，以≥3分判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組病變組織FOXP3及B7-H4表達(dá)比較 囊腫組病變組織FOXP3、B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.7%(23/30)、80.0%(24/30)，癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.0%(17/20)、90.0%(18/20)，良性組病變組織FOXP3、B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率分別為0、5.0%(1/20)。囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性組(P均<0.05)，囊腫組與癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

2.2 FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織中表達(dá)的相關(guān)性 卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織中FOXP3、B7-H4表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.915，P<0.05)。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥雖屬良性病變，卻具有近似惡性腫瘤的行為學(xué)特點(diǎn)，如侵襲、種植、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病后，有15%的內(nèi)膜細(xì)胞可在離開(kāi)宮腔后避開(kāi)機(jī)體的免疫監(jiān)視，而在子宮體以外的地方存活，導(dǎo)致各種異位病變的發(fā)生，這一組織學(xué)變化被認(rèn)為與免疫逃逸機(jī)制有關(guān)。如異位子宮內(nèi)膜進(jìn)入卵巢皮質(zhì)生長(zhǎng)，長(zhǎng)期發(fā)展則可導(dǎo)致卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生[1]。但卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病是否與免疫逃逸有關(guān)，尚不明確。

FOXP3作為除CD4、CD25分子外的T細(xì)胞特征性標(biāo)志物，可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能[5]。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXP3可以抑制T細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄，可以通過(guò)直接抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)和T細(xì)胞核因子(NFAT)的活性，或通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合NFAT的DNA結(jié)合位點(diǎn)，從而抑制T細(xì)胞的細(xì)胞因子表達(dá)[6]。FOXP3在腫瘤細(xì)胞中可起到T細(xì)胞的作用，是腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的機(jī)制之一[7]。研究表明，F(xiàn)OXP3可通過(guò)影響調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抑制功能，發(fā)揮免疫抑制的作用[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性組，考慮其原因可能為子宮內(nèi)膜異位囊腫與卵巢癌在轉(zhuǎn)移行為學(xué)上相似、與FOXP3免疫逃逸有關(guān)所致。

B7-H4是通過(guò)生物信息學(xué)新發(fā)現(xiàn)的屬于B7家族的一種協(xié)同刺激因子[9]。B7-H4 mRNA在人體的腎、肝等器官中廣泛存在[10]，作為細(xì)胞弱化因子，可通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)T細(xì)胞來(lái)讓腫瘤細(xì)胞避免被攻擊，為腫瘤生長(zhǎng)提供條件。B7-H4與一個(gè)未知的T細(xì)胞受體結(jié)合，進(jìn)而抑制腫瘤特異性T細(xì)胞的活化和增殖，從而幫助腫瘤細(xì)胞逃過(guò)機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視及殺傷。Shi等[11]研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤上皮細(xì)胞過(guò)表達(dá)B7H4蛋白不僅具有免疫抑制的作用，還能促使上皮細(xì)胞突變，導(dǎo)致腫瘤形成。雖然 B7H4 mRNA分布廣泛，然而正常組織中B7-H4蛋白的轉(zhuǎn)錄或翻譯過(guò)程受到嚴(yán)格調(diào)控，因此其表達(dá)的蛋白在正常組織中表達(dá)較少[12]。研究表明， B7-H4蛋白移植入小鼠體內(nèi)后，可使小鼠的腫瘤細(xì)胞增殖，并抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，表明其具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。相關(guān)研究表明，阻斷 B7-H4 表達(dá)可增強(qiáng)癌組織內(nèi)免疫細(xì)胞的殺傷力[13]。另外，B7-H4抗體也可通過(guò)抑制IL-10/Treg依賴性來(lái)抑制小鼠或人體T細(xì)胞反應(yīng)，從而達(dá)到治療自身免疫性疾病的目的，也說(shuō)明B7-H4有削弱機(jī)體免疫反應(yīng)的作用[14]。研究表明，B7-H4可通過(guò)促進(jìn)上皮惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤形成及抑制腫瘤細(xì)胞凋亡等作用促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。但B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的作用尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，囊腫組及癌癥組病變組織B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性組，表明卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及卵巢癌組織中B7-H4均明顯高于卵巢良性腫瘤組織，考慮B7-H4也可能通過(guò)免疫逃逸使子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞逃過(guò)機(jī)體免疫從而種植轉(zhuǎn)移。

大量研究證實(shí)，在卵巢癌組織中，巨噬細(xì)胞及卵巢癌細(xì)胞均表達(dá)B7-H4。巨噬細(xì)胞表面的B7-H4可將FOXP3+、CD25+、CD4+T細(xì)胞的抑制信號(hào)傳遞給外來(lái)抗原，此外巨噬細(xì)胞分泌的趨化因子22也可以讓T細(xì)胞定向轉(zhuǎn)移至腫瘤微環(huán)境中。因此，F(xiàn)OXP3及B7-H4在免疫逃逸機(jī)制中具有協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示，OXP3和B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和卵巢癌中均為高表達(dá)，且二者表達(dá)呈正相關(guān)。因此，F(xiàn)OXP3和B7-H4可能成為診斷子宮內(nèi)膜異位囊腫的新靶點(diǎn)。