趙永前，孫華偉，張敬峰，盧 宇，朱 珺，左建新，張曉曦

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心，江蘇 南京 210014；2.江蘇省漣水縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇 漣水 223400)

縣域范圍內(nèi)豬瘟疫苗免疫效果的監(jiān)測(cè)與研究

趙永前1，孫華偉1，張敬峰1，盧 宇1，朱 珺2，左建新2，張曉曦1

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)中心，江蘇 南京 210014；2.江蘇省漣水縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇 漣水 223400)

以漣水縣范圍內(nèi)的10家規(guī)模豬場(chǎng)開(kāi)展了豬瘟疫苗免疫效果評(píng)價(jià)、免疫持續(xù)期檢測(cè)及免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用效果研究，結(jié)果表明：(1)5個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟疫苗免疫效果均符合農(nóng)業(yè)部規(guī)定的要求，但不同企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟疫苗在免疫效力方面存在一定差異，疫苗二免后21 d抗體陽(yáng)性率為77.5%～100%，抗體離散度為19.7%～47.5%；其中一個(gè)企業(yè)的豬瘟疫苗免疫后4個(gè)月抗體陽(yáng)性率仍達(dá)85%，離散度為38%，符合免疫要求；(2)添加免疫增強(qiáng)劑的疫苗二免后21 d、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月時(shí)的抗體陽(yáng)性率分別為90.8%、94.2%、92.5%、90.0%，比疫苗組分別高5.0、12.5、13.3、15.0個(gè)百分點(diǎn)；離散度分別為28.5%、27.9%、28.4%、28.0%，比疫苗組分別降低6.8、8.5、8.4、9.5個(gè)百分點(diǎn)；免疫增強(qiáng)劑的免疫促進(jìn)作用明顯。

漣水縣域；豬瘟疫苗；免疫效果；監(jiān)測(cè)

豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]。我國(guó)自20世紀(jì)50年代以來(lái)，實(shí)施了豬瘟全面免疫計(jì)劃，有效控制了該病大規(guī)模的爆發(fā)流行[2]，在當(dāng)前和今后很長(zhǎng)一段時(shí)間里，疫苗免疫仍然是我國(guó)豬瘟防控采取的主要策略[3-4]。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)開(kāi)展縣域范圍內(nèi)豬瘟疫苗免疫效果監(jiān)測(cè)的報(bào)道極少，且近年來(lái)養(yǎng)殖者對(duì)政府招標(biāo)采購(gòu)的豬瘟疫苗效果一直存在不同的看法，本研究選取政府招標(biāo)采購(gòu)的5個(gè)不同企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟疫苗在“全國(guó)生豬調(diào)出大縣”漣水縣內(nèi)的10家規(guī)模豬場(chǎng)開(kāi)展免疫效果的監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)及免疫持續(xù)期的檢測(cè)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)室階段取得實(shí)效的免疫增強(qiáng)劑(合成囊素三肽)開(kāi)展了應(yīng)用研究，以期為縣域范圍內(nèi)有效防控豬瘟提供技術(shù)支持。具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器設(shè)備 酶標(biāo)儀型號(hào)為寶特ExL 808，美國(guó)寶特公司生產(chǎn)；離心機(jī)型號(hào)為Centrifuge 5424R，產(chǎn)自德國(guó)；各種規(guī)格移液器，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；微量振蕩器型號(hào)為MH-10，江蘇海門(mén)其林醫(yī)用儀器廠生產(chǎn)；電熱恒溫培養(yǎng)箱型號(hào)為DNP-9162BS-Ⅲ，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑與疫苗 試劑：豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物股份有限公司，由美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)，批號(hào)為99-43220，在使用前所有樣品及試劑盒都要在室溫下恢復(fù)到18～25 ℃，試劑混合均勻；免疫增強(qiáng)劑合成囊素三肽為凍干粉，1000頭份/瓶，由國(guó)家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心提供，批號(hào)：20130902。

疫苗：選取當(dāng)?shù)卣袠?biāo)采購(gòu)的5個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟疫苗，分別標(biāo)記為A、B、C、D、E疫苗。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將選取的10家規(guī)模豬場(chǎng)隨機(jī)分為5組，每組2個(gè)豬場(chǎng)，分別免疫A、B、C、D、E共5種疫苗中的一種豬瘟疫苗，按豬場(chǎng)原有豬瘟免疫程序進(jìn)行免疫。上述5組仔豬在豬瘟疫苗二免后21 d、2個(gè)月時(shí)分別采血進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)豬瘟抗體水平較好的試驗(yàn)組在豬瘟疫苗二免后3個(gè)月和4個(gè)月時(shí)分別采血進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)。同時(shí)隨機(jī)挑選B、D、E 3個(gè)疫苗組進(jìn)行免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)，設(shè)對(duì)照組(接種疫苗)和免疫增強(qiáng)劑組(同時(shí)接種疫苗和免疫增強(qiáng)劑)，分別在疫苗二免后21 d、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月時(shí)采血，并檢測(cè)豬瘟抗體。上述試驗(yàn)每次采血時(shí)，每組隨機(jī)選取20頭試驗(yàn)豬采血。

1.2.2 免疫增強(qiáng)劑使用方法 將稀釋液先注入免疫增強(qiáng)劑中，融化后再按照相應(yīng)比例注入豬瘟疫苗中稀釋疫苗，正常使用。

1.2.3 免疫增強(qiáng)劑安全試驗(yàn) 接種添加免疫增強(qiáng)劑疫苗的豬群，在免疫接種后連續(xù)觀察10 d，記錄豬的健康狀況，包括精神、運(yùn)動(dòng)、采食等。

1.2.4 血樣采集 對(duì)上述試驗(yàn)豬只分別進(jìn)行前腔靜脈采血3～5 mL/頭，靜置自然凝集析出血清，分離血清注入離心管內(nèi)，-20 ℃冷凍待檢。

1.2.5 檢測(cè)方法 利用阻斷ELISA原理，嚴(yán)格按照IDEXX公司生產(chǎn)的豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作，對(duì)采集的血清進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.6 結(jié)果判定 樣本的計(jì)算：阻斷率/%=(陰性對(duì)照平均OD450-樣品OD450)/陰性對(duì)照平均OD450×100%；陰性對(duì)照的平均OD450>0.50，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率>50%，檢測(cè)結(jié)果才有效。如果被檢樣本的阻斷率≥40%，則該樣本可判為陽(yáng)性(有抗CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率≤30%，則該樣本可判為陰性(無(wú)抗CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率在30%～40%之間，則該樣本可判為可疑。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬瘟疫苗二免后21 d抗體檢測(cè)結(jié)果

A、B、C、D、E疫苗免疫的仔豬在二免后21 d的豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果表明：5家企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟活疫苗在疫苗二免后21 d時(shí)，豬瘟抗體陽(yáng)性率均超過(guò)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫抗體合格率(70%)，但不同疫苗之間存在一定差異；從抗體陽(yáng)性率及離散度方面比較，A疫苗免疫后產(chǎn)生的豬瘟抗體水平最好(表1)。

表1 5種豬瘟疫苗二免后21 d抗體情況 %

2.2 豬瘟疫苗二免后2個(gè)月抗體檢測(cè)情況

A、B、C、D、E疫苗二免后2個(gè)月豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果表明：5家企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟活疫苗在疫苗二免2個(gè)月時(shí)，豬瘟抗體陽(yáng)性率均超過(guò)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫抗體合格率(70%)，對(duì)比免疫后21 d時(shí)的豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，5家企業(yè)的豬瘟疫苗二免后2個(gè)月比二免后21 d的豬瘟抗體阻斷率平均值有一定程度的上升，但抗體離散度也略有增大(表2)。

表2 5種豬瘟疫苗免疫后2個(gè)月抗體情況 %

2.3 豬瘟疫苗抗體持續(xù)期檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)試驗(yàn)方案，選擇疫苗免疫后21 d、2個(gè)月時(shí)豬瘟抗體陽(yáng)性率高、離散度小的A疫苗進(jìn)行豬瘟抗體持續(xù)期的跟蹤監(jiān)測(cè)，即在豬瘟疫苗二免后3個(gè)月和4個(gè)月時(shí)分別進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。

由上述檢測(cè)結(jié)果可知：A疫苗二免后4個(gè)月時(shí)豬瘟抗體陽(yáng)性率仍高達(dá)85.0%，豬瘟抗體阻斷率平均值也高達(dá)63.4%，但從免疫后21 d、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月的抗體檢測(cè)情況看，抗體陽(yáng)性率逐漸下降、離散度逐漸增大，差異顯著(P<0.05)，抗體阻斷率平均值有所下降，差異不顯著(P<0.05)。

圖1 A疫苗二免后不同時(shí)間豬瘟抗體陽(yáng)性率比較

圖2 A疫苗二免后不同時(shí)間豬瘟抗體

2.4 免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組的檢測(cè)結(jié)果

免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4和圖5。由上述檢測(cè)結(jié)果可知：免疫增強(qiáng)劑組無(wú)論在豬瘟抗體陽(yáng)性率、阻斷率平均值和離散度方面均優(yōu)于對(duì)照組，其中豬瘟抗體陽(yáng)性率和離散度2個(gè)指標(biāo)的差異顯著(P<0.05)。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫增強(qiáng)劑組豬瘟抗體水平異常偏低的樣本個(gè)數(shù)明顯少于對(duì)照組。合成囊素三肽不僅可以顯著加快抗體的產(chǎn)生，還能夠起到抗體緩釋的作用，使豬的高水平抗體維持更長(zhǎng)的時(shí)間，這與合成囊素三肽在實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果完全一致[5]。

圖3 免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組豬瘟抗體陽(yáng)性率比較

2.5 合成囊素三肽的安全性

試驗(yàn)期內(nèi)注射添加免疫增強(qiáng)劑疫苗的豬只均健康存活，精神、運(yùn)動(dòng)、采食等一切正常，無(wú)發(fā)熱、死亡等不良現(xiàn)象，說(shuō)明合成囊素三肽安全無(wú)毒。

3 討論

本研究選擇一個(gè)縣域范圍內(nèi)的10家規(guī)模豬場(chǎng)為試驗(yàn)對(duì)象開(kāi)展了相關(guān)研究，具有參與試驗(yàn)的豬場(chǎng)多、采集樣本量大且廣、工作難度大等特點(diǎn)，查詢相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，此類試驗(yàn)多在一個(gè)豬場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行，而在縣域范圍內(nèi)多家規(guī)模豬場(chǎng)開(kāi)展類似試驗(yàn)的報(bào)道極少，因此，本研究的試驗(yàn)結(jié)果可為江蘇省乃至全國(guó)縣域范圍內(nèi)豬瘟的監(jiān)測(cè)與研究提供真實(shí)可信的數(shù)據(jù)參考。

圖4 免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組豬瘟抗體阻斷率平均值比較

圖5 免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組豬瘟抗體阻離散度比較

本研究結(jié)果表明，政府招標(biāo)采購(gòu)的豬瘟疫苗完全可以達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫抗體合格率(70%)的要求。豬場(chǎng)按照合理的免疫程序進(jìn)行2次免疫后，豬瘟抗體可持續(xù)至育肥豬出欄(疫苗二免后4個(gè)月，豬只已超過(guò)180日齡，體重超過(guò)100 kg，達(dá)到或超過(guò)豬只正常的出欄日齡)。但在疫苗運(yùn)輸和使用過(guò)程中，需做好冷鏈措施，以保證疫苗的質(zhì)量。

通過(guò)試驗(yàn)研究，無(wú)論是接種何種豬瘟疫苗均可對(duì)仔豬起到較好的保護(hù)作用，但不同企業(yè)生產(chǎn)的豬瘟疫苗在免疫效力方面存在一定的差異，這可能與不同企業(yè)出廠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、運(yùn)輸途中溫度控制等因素有關(guān)，這與劉金鑫等[6]報(bào)道的不同豬瘟疫苗之間差異不顯著，但總體上使用4種疫苗免疫15 d后都能使仔豬獲得良好保護(hù)力，及曹世禎等[7]報(bào)道的不同廠家生產(chǎn)的豬瘟疫苗免疫效果有所不同的結(jié)果一致。

免疫增強(qiáng)劑試驗(yàn)表明，合成囊素三肽可以使豬只高水平抗體維持更長(zhǎng)時(shí)間，具有顯著的免疫增強(qiáng)、提高抗體水平整齊度的作用。因此，合成囊素三肽具有巨大的臨床應(yīng)用價(jià)值，建議盡快熟化并在臨床上大面積推廣應(yīng)用，對(duì)有效防控豬瘟的發(fā)生將發(fā)揮重要的作用。

試驗(yàn)中不同豬場(chǎng)抗體產(chǎn)生水平存在一定的差異，這與不同規(guī)模豬場(chǎng)的日常管理、疫苗免疫程序及采取的生物安全防控措施等因素有一定的相關(guān)性。針對(duì)我國(guó)豬瘟的流行特點(diǎn)與現(xiàn)狀及養(yǎng)豬業(yè)規(guī)模化的特點(diǎn)，在堅(jiān)持免疫接種豬瘟弱毒疫苗的基礎(chǔ)上，更應(yīng)重視免疫效果的監(jiān)測(cè)，建議豬場(chǎng)在疫苗免疫后的不同階段可隨機(jī)采樣檢測(cè)，對(duì)達(dá)不到免疫效果的豬群應(yīng)適時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免或加強(qiáng)免疫，以保證豬群時(shí)刻處于疫苗抗體保護(hù)之下。

[1] 斯勞特.豬病學(xué)[M].趙德明，譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000.

[2] 王琴，涂長(zhǎng)春.豬瘟[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2015.

[3] 孟帆，王娟萍，姚敬明，等.免疫增強(qiáng)劑對(duì)豬瘟疫苗細(xì)胞免疫的影響[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43(7)：881-884.

[4] 鄧顯文 謝芝勛 謝志勤,等.RT-LAMP可視化檢測(cè)豬瘟病毒及特異性鑒別豬瘟兔化弱毒疫苗[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,46(2):338-343.

[5] 丁麗軍，潘陳苗，趙永前，等.合成囊素三肽對(duì)豬瘟疫苗免疫效果的影響[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2014，39(5)：18-20.

[6] 劉金鑫，銀森森，陳磊，等.不同豬瘟疫苗對(duì)仔豬的免疫效果[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，20(7)：5-8.

[7] 張素麗，袁文菊，郭廣濤，等.不同廠家豬瘟疫苗免疫效果對(duì)比研究[J].養(yǎng)豬，2013(5)：100-101.

(責(zé)任編輯：曾小軍)

Monitoring and Research on Immune Effect of Swine Fever Vaccines within County-level Scope

ZHAO Yong-qian1, SUN Hua-wei1, ZHANG Jing-feng1, LU Yu1,ZHU Jun2, ZUO Jian-xin2, ZHANG Xiao-xi1

(1. Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Veterinary Biological Product Engineering and Technology, Ministry of Agriculture / Center of Animal Epidemic Disease Diagnosis and Testing, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. Station of Animal Husbandry and Veterinary of Lianshui County in Jiangsu Province, Lianshui 223400, China)

The immune effect evaluation of swine fever vaccines and their immune persistent period detection were carried out in 10 large-scale pig farms in Lianshui county. The results indicated that: (1) The immune effects of swine fever vaccines produced by 5 different enterprises were different, but all accorded with the demands of Agricultural Ministry; on the 21st day after the second injection of various vaccines, the antibody positive rate was 77.5%～100%, and the antibody discrete degree was 19.7%～47.5%; four months after inoculating with the swine fever vaccine produced by a enterprise, the antibody positive rate was still as high as 85%, and the antibody discrete degree was 38%, which conformed to the immune requirements. (2) Twenty-one days, two months, three months, and four months after the second injection of the vaccine supplemented with immunopotentiator, the antibody positive rate was 90.8%, 94.2%, 92.5% and 90.0% respectively, which was separately 5.0, 12.5, 13.3 and 15.0 percent higher than that in the normal vaccine injection group; the antibody discrete degree was 28.5%, 27.9%, 28.4% and 28.0% respectively, which was separately 6.8, 8.5, 8.4 and 9.5 percent lower than that in the normal vaccine injection group, suggesting that the immunopotentiator had an obvious immunologic enhancement.

Scope of Lianshui county; Swine fever vaccine; Immune effect; Monitoring

2016-10-18

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[CX(13)3075]。

趙永前(1973─)，男，江蘇東臺(tái)人，副研究員，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，主要從事畜禽疫病的臨床診斷及重大疾病流行規(guī)律、診 斷、監(jiān)測(cè)和控制技術(shù)研究。

S852.5.2

A

1001-8581(2017)03-0120-04