王慧

【摘要】目的：研究雷公藤紅素口服給藥的長期毒性情況，確定其安全劑量。方法：分別通過設(shè)立高、中、低劑量組、空白對照組等組別，研究口服給藥3個月后對大鼠的毒性情況，結(jié)合給藥后大鼠的一般狀況、體重、攝食量、血液學(xué)檢查、尸解結(jié)果和組織病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判定，判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)，確定大鼠無毒性反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量或安全劑量范圍。結(jié)果：對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，3個給藥劑量在實(shí)驗(yàn)期及恢復(fù)期間均不影響大鼠體重、攝食量、臟器系數(shù)、血常規(guī)指標(biāo)、血清生化學(xué)指標(biāo)，對高劑量組進(jìn)行組織病理學(xué)檢查也尚未發(fā)現(xiàn)異常的組織病理學(xué)病變。結(jié)論：給予大鼠灌胃雷公藤紅素3個月，未觀察到與受試物本身相關(guān)的毒性反應(yīng)，在劑量470ug/kg下未見有害作用，此劑量可作為安全劑量。

【關(guān)鍵詞】雷公藤紅素；長期毒性；毒性研究

【中圖分類號】R2855【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）06-0039-07

雷公藤紅素（Celastrol，又名南蛇藤素）主要來源于中藥雷公藤的根皮，具有抗炎、抗氧化等活性。近年來發(fā)現(xiàn)雷公藤具有很好的抗腫瘤作用，并且市場需求逐年上升，盡管雷公藤紅素具有顯著的藥理活性[1]，但其毒性也不容忽視[2]，是其臨床應(yīng)用的最大問題。因此，研究對其毒性情況進(jìn)行全面而深入的認(rèn)識，在保持或提高其藥理活性的同時應(yīng)該盡可能降低其毒性。

1儀器與材料

11[JP2]實(shí)驗(yàn)動物SPF級SD大鼠，體重80～100g，雌雄各半。由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2014-0011）提供。使用屏障級動物房（使用許可證號：SYXK（瓊）2014-0025）飼養(yǎng)。A級大、小鼠維持飼料喂養(yǎng)，由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2014-0011）提供。飲水經(jīng)消毒后由動物自由飲用，符合SPF級動物飲水要求。[JP]

12材料雷公藤紅素（海南省藥物研究所自提，純度901%）；羧甲基纖維素鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)批號：20140406）；血液化驗(yàn)分析系統(tǒng)分析試劑（稀釋液、溶血劑和清洗劑）由EXIGO公司提供；血生化檢測試劑由日本和光，朗道公司提供。

13儀器[JP3]DT5-2離心機(jī)（時代北利）；AUW220D電子天平（島津）；YP30K電子天平（上海良平）；TP1020脫水機(jī)（萊卡）；EG1150H石蠟包埋機(jī)（萊卡）；RM2245輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（萊卡）；HI1210攤片機(jī)（萊卡）；立式顯微鏡（索尼）；血生化測定儀（Echo plus）；動物血細(xì)胞分析儀（Exigo）。[JP]

2方法

21試驗(yàn)方法[3]將80只SD大鼠隨機(jī)分為供試品高、中、低劑量組及空白對照組，每組20只，雌雄各半，給藥組給予雷公藤470μg/kg、94μg/kg、和47μg/kg，空白對照組給予05%羧甲基纖維素鈉溶液，各組均按大鼠10 mL/kg體重灌胃給藥，每天1次，連續(xù)灌胃給藥12周，停止給藥2周作為恢復(fù)期觀察，給藥期（12周）和恢復(fù)期（2周）各組大鼠于第1次給藥前及給藥后至恢復(fù)期結(jié)束每周末稱體重1次，并觀察動物的一般狀況及計算每周動物攝食量。給藥期和恢復(fù)期，各組分別取大鼠14、6只處死，雌雄各半，麻醉后采血，測定血常規(guī)、和血清生化學(xué)指標(biāo)，大鼠重要臟器稱重后計算臟器系數(shù)，病變器官進(jìn)行主要臟器的組織病理學(xué)檢查。結(jié)合大鼠的狀況、組織病理學(xué)檢查結(jié)果及檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合判定，判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)，確定大鼠無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量或安全劑量范圍。

22統(tǒng)計方法采用SPSS190軟件單因素方差分析[4]進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以（x[TX-*3]±SD）表示，采用t檢驗(yàn)，P<005表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

37剖檢觀察結(jié)果及病理組織學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)期及恢復(fù)期發(fā)現(xiàn)，供試品本身并不引起大鼠組織器官形狀、體積大小、色澤、位置、硬度、外膜等的異常改變。取部分高劑量組及對照組動物剖檢，未發(fā)現(xiàn)與供試品本身相關(guān)的病理學(xué)檢查，因此不進(jìn)行中、低劑量組檢查。

4討論

雷公藤紅素長期毒性劑量組的劑量設(shè)置，是根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期研究中得到LD50 469mg/kg決定，大鼠3個月長期毒性試驗(yàn)中高、中、低3個劑量可分別采用1/10、1/50、1/100左右的LD50，符合長期毒性試驗(yàn)設(shè)計原則[5]。

經(jīng)3個月給藥及恢復(fù)期研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤紅素（470μg/kg、94μg/kg和47μg/kg）未引起大鼠一般狀況異常、組織器官異常及組織病理學(xué)病變，雖然大鼠體重、攝食量及個別臟器系數(shù)、血常規(guī)指標(biāo)及血清生化指標(biāo)在給藥期或恢復(fù)期出現(xiàn)部分?jǐn)?shù)據(jù)的差異性，但從整體研究周期數(shù)據(jù)來看，均未體現(xiàn)任何規(guī)律性，也不存在任何劑量相關(guān)性及性別相關(guān)性，認(rèn)為此指標(biāo)的的差異性不存在實(shí)際意義，應(yīng)并無毒理學(xué)意義。

綜上所述，在本實(shí)驗(yàn)室條件下，大鼠經(jīng)口灌胃給予雷公藤紅素3個月，未觀察到與受試物本身相關(guān)的毒性反應(yīng)，在劑量470μg/kg以下未見有害作用，在此劑量以下使用，可作為安全劑量。

參考文獻(xiàn)

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[2]袁菱，陳彥，周蕾，等. 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體降低雷公藤紅素毒性的實(shí)驗(yàn)研究[C].//首屆全國方劑組成原理高峰論壇. 2012.

[3]高曉東，李雪萍，徐春茂，等. 扶正逐毒丸制劑大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國臨床藥理學(xué)雜志， 2015（7）：563-565.

[4]張曉冬，宗英，陸國才，等. 藥物長期毒性試驗(yàn)血液和生化指標(biāo)的統(tǒng)計處理[J].中國新藥雜志，2010，19（4）：270-272.

[5]國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則（2005[BF]）[[BFQ]M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：217-226.

（收稿日期：2017-01-13編輯：梁志慶）