梁亮

摘要：試驗(yàn)隨機(jī)選取24頭30日齡（體重范圍為7.5～9.0 kg）健康仔豬，16頭健康后備母豬。24頭小豬隨機(jī)分成兩組，每組12頭；16頭母豬隨機(jī)分成兩組，每組8頭；各分為試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組。其中仔豬和母豬的試驗(yàn)1組接種豬瘟疫苗A，試驗(yàn)2組接種豬瘟疫苗B。疫苗在0 d進(jìn)行首免，30 d進(jìn)行二免。每頭接種2 mL。仔豬試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組在首免后第15、30、60天各采血，分離血清，檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率。母豬試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組在首免后第30、60天分別采血，分離血清，檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率。結(jié)果表明，不管仔豬還是母豬，接種的兩種豬瘟疫苗A和B的免疫效果差異不顯著（P>0.05），且從總體上來(lái)看，兩種豬瘟疫苗免疫60 d后都能使仔豬和后備母豬獲得良好的保護(hù)力。

關(guān)鍵詞：豬瘟疫苗；抗體阻斷率；免疫效果

中圖分類號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2017）01-0011-02

豬瘟（HC）俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（HCV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性的病毒性傳染病，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病。其特征是發(fā)病急，高熱稽留，小血管壁變性，全身泛發(fā)性小點(diǎn)狀出血及脾梗死。該病在自然條件下只感染豬，不同年齡、性別、品種的豬和野豬都易感，一年四季均可發(fā)生。

由于豬瘟病毒的高致病力和高致死率，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。豬感染高致病力毒株后在潛伏期就可以造成傳染，經(jīng)歷急性豬瘟或亞急性豬瘟的豬在出現(xiàn)癥狀前大量排毒，但耐過(guò)后的豬只體內(nèi)有明顯的豬瘟抗體，且不再排毒。感染溫和性毒株的豬呈慢性感染，在病死前會(huì)長(zhǎng)期或間歇性地排毒。懷孕母豬可以通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒導(dǎo)致流產(chǎn)、木乃伊胎或產(chǎn)出弱胎、畸形胎等。先天性感染低毒力病毒的結(jié)果是產(chǎn)出持續(xù)性感染的仔豬，仔豬出現(xiàn)免疫耐受，不表現(xiàn)任何癥狀而向外排毒。

在預(yù)防過(guò)程中，疫苗的效價(jià)高低是免疫成敗的關(guān)鍵。低效價(jià)的疫苗免疫后豬體產(chǎn)生的抗體不足以抵抗野毒的侵襲，接種豬雖不發(fā)病，但終生帶毒、排毒，這給凈化豬群造成極大障礙。因此許多豬場(chǎng)在實(shí)際防疫工作中都采用加大免疫劑量來(lái)解決這一不足，但疫苗種類的選擇也與豬瘟免疫效果密切相關(guān)[1-6]。本試驗(yàn)采用兩種豬瘟疫苗分別對(duì)仔豬和母豬進(jìn)行免疫，并使用豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒來(lái)檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體對(duì)病毒的阻斷率，通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果分析哪種疫苗免疫效果更佳，以便為今后豬瘟疫苗的選擇提供參考。

豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒是用來(lái)檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的檢測(cè)試劑盒。該試劑盒是用豬瘟病毒抗原包被的微量反應(yīng)板，利用阻斷ELISA原理來(lái)檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體。如果被檢樣品中存在豬瘟病毒抗體，它們就會(huì)阻斷辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的結(jié)合可以通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶與底物的顯色程度進(jìn)行判定，即用酶標(biāo)儀在單波長(zhǎng)450 nm或雙波長(zhǎng)650 nm測(cè)定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被檢樣品中含有豬瘟病毒抗體（陽(yáng)性結(jié)果）時(shí)，顯色就會(huì)變淺，當(dāng)被檢樣品中不含有抗豬瘟病毒抗體（陰性結(jié)果）時(shí)，顯色就會(huì)變深。樣本的阻斷率可以通過(guò)450 nm波長(zhǎng)樣本吸光度與陰性對(duì)照吸光度的比值來(lái)確定。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

福州長(zhǎng)樂(lè)羅豐豬場(chǎng)隨機(jī)選取24頭30日齡（體重范圍為7.5～9.0 kg）的健康仔豬及16頭健康后備母豬。

1.2 血清采集

仔豬用前腔靜脈采血法、母豬用耳靜脈采血方法，析出血清，在4 ℃下保存。

1.3 主要試劑

豬瘟病毒抗原包被的ELISA反應(yīng)板、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的抗豬瘟病毒的酶標(biāo)抗體、樣品稀釋液（洗滌液10X、TMB底物、終止液）。

1.4 器材

微量移液器，10～1 000 μL的精密或多道微量移液器，一次性移液器吸頭，量筒（500 mL，配制洗滌液用），96孔酶標(biāo)儀，純化水（去離子水或雙蒸水），滴加和吸去洗滌液的設(shè)備，可以盛裝液體和消毒液的容器，濕盒或密封反應(yīng)板用的封條，渦旋混合裝置，離心管或微量試管。

1.5 試驗(yàn)方法

仔豬和后備母豬的試驗(yàn)1組均接種豬瘟疫苗A，試驗(yàn)2組均接種豬瘟疫苗B。疫苗在0 d進(jìn)行首免，30 d進(jìn)行二免。每頭接種2 mL。仔豬試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組在首免后第15、30、60天分別采血，分離血清，檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率。母豬試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組在首免后第30、60天采血，分離血清，檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率。檢測(cè)用的豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒的使用和操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件作統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

由表1和表2可知，無(wú)論是仔豬還是后備母豬，試驗(yàn)1組（豬瘟疫苗A）的免疫效果均略高于試驗(yàn)2組（豬瘟疫苗B）。注射豬瘟疫苗A的仔豬的被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從43.0%上升至72.8%，而后備母豬被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從74.8%上升至76.5%；注射豬瘟疫苗B的仔豬的被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從46.7%上升至76.1%，而后備母豬被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從78.4%上升至81.3%。統(tǒng)計(jì)分析表明，不管仔豬還是母豬，接種的兩種豬瘟疫苗A和B的免疫效果差異不顯著（P>0.05），且從總體上來(lái)看兩種豬瘟疫苗免疫60 d后都能使仔豬和母豬獲得良好的保護(hù)力。

3 小結(jié)與討論

在本試驗(yàn)中，注射豬瘟疫苗A的仔豬的被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從43.0%上升至72.8%，而后備母豬被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從74.8%上升至76.5%；注射豬瘟疫苗B的仔豬的被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從46.7%上升至76.1%，而后備母豬被檢樣本豬瘟抗體阻斷率從78.4%上升至81.3%，表明疫苗A或B對(duì)母豬的免疫效果的提高并不顯著，分析其原因可能有以下幾點(diǎn)。

（1）疫苗的質(zhì)量方面。在實(shí)際應(yīng)用中，疫苗從藥廠冷庫(kù)發(fā)出直至注射到豬體內(nèi)，要經(jīng)過(guò)一個(gè)運(yùn)輸轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。由于中間環(huán)節(jié)多、情況復(fù)雜、溫度變化無(wú)常、疫苗時(shí)融時(shí)凍，其質(zhì)量無(wú)法保障。

要提高實(shí)際應(yīng)用中疫苗的質(zhì)量，必須加強(qiáng)運(yùn)輸系統(tǒng)的冷藏設(shè)施建設(shè)，從藥廠到縣級(jí)站用冷藏車運(yùn)輸；從縣級(jí)到基層保證配備冷藏保溫箱，加強(qiáng)對(duì)生物藥品的管理，沒(méi)有冷藏設(shè)施的一律不準(zhǔn)經(jīng)營(yíng)疫苗，避免疫苗出廠后時(shí)凍時(shí)融的狀況出現(xiàn)。同時(shí)在縣級(jí)動(dòng)物防檢機(jī)構(gòu)內(nèi)要設(shè)立疫（菌）苗檢測(cè)室，定期檢測(cè)或?qū)γ颗呙邕M(jìn)行效價(jià)測(cè)定，以確定免疫注射的劑量。

（2）母豬的體質(zhì)方面。后備母豬的免疫機(jī)制較仔豬更加完善和健全，對(duì)抗不同程度的豬瘟病毒的抵抗力更強(qiáng)。試驗(yàn)所用的豬瘟疫苗A和B有可能對(duì)弱體質(zhì)的仔豬有較強(qiáng)的免疫效果。

（3）操作規(guī)程的規(guī)范問(wèn)題。在實(shí)際注射操作中，要特別注意部位、針頭、劑量和消毒等四個(gè)問(wèn)題。①注射部位。在防疫注射中，防疫人員一般僅注意豬體部位，但更重要的是解剖部位，要把疫苗注射到肌間。因此要把握好注射角度和深度，針頭應(yīng)與豬體成60°為宜，深度應(yīng)根據(jù)豬體大小和肥瘦程度而定，要以達(dá)到肌肉深部為佳。②針頭的問(wèn)題。不僅要重視一豬一針，也要重視針頭長(zhǎng)度和粗細(xì)，要因豬而異。③注射劑量。一般在注射器上固定，注射時(shí)劑量一定要足。④消毒。注射部位消毒宜用2.0%～3.0%的碘酊，4.0%以上碘酊容易使疫苗失去活性。針頭要做到一豬一針一消毒[7-9]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 蔣冬福，施萬(wàn)球，韋家槐，等.兔脾淋組織液對(duì)豬瘟疫苗的免疫增強(qiáng)試驗(yàn)[J]中國(guó)獸醫(yī)雜志，2001，37（7）：10-11.

[2] 呂仁洪，滕 遠(yuǎn).豬瘟免疫效果不佳的原因探討[J]養(yǎng)豬業(yè)，2005（3）：37-38.

[3] 王 琴，寧宜寶.豬瘟免疫失敗主要原因的解析[J]中國(guó)獸醫(yī)雜志，2005（6）：61-62.

[4] 王紅寧，劉世貴，吳 琦.規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟仿制中應(yīng)注意的問(wèn)題[J]中國(guó)獸醫(yī)雜志，1999，25（12）：20-21.

[5] 韓雪清，劉湘濤，趙啟祖.豬瘟病毒及其豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2000，21（2）：1-7.

[6] 李連任.當(dāng)前我國(guó)豬瘟免疫失敗的原因及對(duì)策[J].當(dāng)代畜牧，2005（2）：14-16.

[7] 汪令波.提高豬瘟疫苗免疫效果的措施[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2006（8）：14.

[8] 范玉芳.甘肅省酒泉市規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫抗體檢測(cè)及效果分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2007，24（8）：38.

[9] 韓紅秀，寧 國(guó)，張志宏.淺談豬瘟免疫失敗的原因與對(duì)策[J].豬與禽，2007，27（4）：68.