黃為鈞 王世東 趙進喜 傅 強 宮 晴 張 華 吳文靜 申子龍 賈 旭 張雨婷

(1 北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院，北京，100700； 2 湖北省中醫(yī)院，武漢，430061； 3 首都醫(yī)科大學北京中醫(yī)醫(yī)院腎病科，北京，100010； 4 北京中醫(yī)藥大學科研實驗中心，北京，100029)

益氣活血散結(jié)法對糖尿病腎病大鼠腎組織中MCP-1、TGF-β的影響

黃為鈞1王世東1趙進喜1傅 強1宮 晴1張 華1吳文靜2申子龍3賈 旭4張雨婷4

(1 北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院，北京，100700； 2 湖北省中醫(yī)院，武漢，430061； 3 首都醫(yī)科大學北京中醫(yī)醫(yī)院腎病科，北京，100010； 4 北京中醫(yī)藥大學科研實驗中心，北京，100029)

目的：通過動物實驗，基于免疫炎性反應(yīng)因子MCP-1、TGF-β，探索益氣活血散結(jié)法改善腎小球硬化的分子機制。方法：24只GK大鼠，隨機分為模型組、假手術(shù)組、益氣活血散結(jié)組。通過高脂高能量喂養(yǎng)加單腎切除術(shù)復制糖尿病腎病模型。檢測各組大鼠的24 h尿蛋白，觀察大鼠在干預(yù)后腎臟組織的病理改變，同時采用Western blotting以及免疫組化法檢測腎臟組織的MCP-1和TGF-β的表達情況，采用RT-PCR法檢測MCP-1mRNA以及TGF-βmRNA的表達水平。結(jié)果：PASM染色和Masson染色顯示：益氣活血散結(jié)組陽性率明顯低于模型組(P<0.01)。益氣活血散結(jié)組中24 h尿蛋白在藥物干預(yù)后明顯減少(P<0.01)。Western blotting、免疫組化結(jié)果均顯示：益氣活血散結(jié)組MCP-1(P<0.05)、TGF-β(P<0.01)的表達程度明顯低于模型組。同樣，RT-PCR結(jié)果也顯示:MCP-1mRNA(P<0.01)、TGF-βmRNA(P<0.05)水平在益氣活血散結(jié)組明顯低于模型組。結(jié)論：益氣活血散結(jié)法可以有效地減少24 h尿蛋白定量、延緩腎小球纖維化，其機制可能與抑制腎臟組織中MCP-1和TGF-β的表達有關(guān)。

MCP-1；TGF-β；益氣活血散結(jié)法；糖尿病腎病

糖尿病腎病(Diabetes Nephropathy，DN)是糖尿病最為常見的微血管并發(fā)癥之一，也是目前導致終末期腎衰竭的最主要的原因[1]。長期以來，糖尿病腎病的治療手段僅僅局限于降血糖、降血壓、ACEI/ARB類藥物的治療，治療手段較少，即使是僅有的已經(jīng)明確證明具有降蛋白作用的ACEI/ARB類藥物，其效果也一般，而且研究證實其只能使糖尿病腎病患者發(fā)展為終末期腎病的危險率降低28%，而且不能降低死亡率[2-4]?？梢姡F(xiàn)代醫(yī)學對于糖尿腎病的治療，目前沒有十分理想的藥物。相對而言，中醫(yī)學在糖尿病腎病的治療方面有一定的優(yōu)勢。本課題組長期對糖尿病腎病的中醫(yī)藥治療進行研究，提出糖尿病腎病的“微型癥瘕”形成病機理論，并且證實了益氣化瘀散結(jié)法治療糖尿病腎病的有效性[5-11]。

MCP-1和TGF-β在糖尿病腎病的發(fā)展過程中起著重要的作用[12]，其中前者可以在腎臟組織中募集單核-巨噬細胞，后者可以釋放多種炎性反應(yīng)因子以及生長因子，促進細胞外基質(zhì)增生，導致腎小球硬化。釋放的炎性反應(yīng)因子還可以激活p38 MAPK信號通路，產(chǎn)生TGF-β，后者同樣可以導致細胞外基質(zhì)以及系膜細胞增生，導致腎小球硬化[13]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康SPF級GK大鼠24只，11～17周，300 g，雄性，清潔級，購自常州卡文斯實驗動物有限公司[實驗動物許可證號：SCXK(蘇)2011-0003]。所有動物都飼養(yǎng)在北京中醫(yī)藥大學動物實驗室，飼養(yǎng)溫度22 ℃，相對濕度60%，12 h光/暗周期，自由飲水。

1.1.2 器材 血糖儀(ACCU-CHEK? Performa，羅氏卓越型)；尿蛋白定量試劑盒(貨號c035-2，規(guī)格100T/96樣，生產(chǎn)批號：20150928，南京建成生物工程研究所)；紫外-可見分光光度計(美國Beckman(貝克曼)公司，型號:DU 800)；Anymicro DSSTM圖像采集系統(tǒng)(江蘇瑯珈科技有限公司)；Synergy 4型酶標儀(美國BioTek公司)；轉(zhuǎn)移電泳槽(Mini Trans-Blot Transfer Cell，BIO-RAD公司)；垂直板電泳槽(Mini-PROTEAN3 cell，BIO-RAD公司)；DYY-10型電泳儀(北京市六一儀器廠)；TS-1型脫色搖床(海門麒麟醫(yī)用儀器廠)；Bio-Rad Image LabTM XRS+凝膠圖像分析管理系統(tǒng)(BIO-RAD公司)；TRIzol(美國Invitrogen15596-026)；RT reagent Kit(大連寶生物公司)；SYBR PremixEX Taq(大連寶生物公司)；PCR引物(大連寶生物公司)；Real time PCR master Mix(SYBRGreen)(日本TOYOBO)；熒光定量PCR循環(huán)儀(美國ABI Step one plus)。

1.1.3 藥物和試劑 高熱量高脂飼料成分:豬油10%，膽固醇2%，膽酸鹽0.25%，蔗糖5%，基礎(chǔ)飼料82.75%?；A(chǔ)飼料：熱量比例，糖水化合物65%，脂肪10.3%，蛋白質(zhì)24.2%。由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。戊巴比妥鈉(Sigma-P3761，北京智杰方遠科技有限公司)；實驗用中藥顆粒劑購自北京康仁堂藥業(yè)有限公司；MCP-1抗體(ab25124,批號lotGR151246-1)以及兔抗TGF-β多克隆抗體(ab66043，批號lotGR134709-5)購自Abcam公司。Dako REALTM EnVisiontm Detection SystemPeroxidase/DAB+，Rabbit/Mouse(丹麥DAK0公司)。BCA蛋白定量試劑盒、RIPA裂解液(強)、PMSF均購自碧云天生物技術(shù)公司，組織蛋白質(zhì)制備試劑、5×蛋白上樣緩沖液、1.5M Tris·HCl緩沖液、1.0M Tris·HCl緩沖液、30%丙烯酰胺、AP、TEMED、10×封閉-洗滌緩沖液、10×電泳緩沖液均購自普利萊基因技術(shù)有限公司，彩色蛋白Marker、ECL發(fā)光液購自Thermo公司，反轉(zhuǎn)錄提取試劑盒、takara試劑盒均購自大連寶生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠分組及模型復制 所有大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，高脂高熱量飼料喂養(yǎng)8周。然后對所有大鼠進行OGTT測試(空腹12 h后，灌服2 g/kg體重的葡萄糖溶液)，檢測口服葡萄糖后0 h、0.5 h、1 h、2 h尾尖血血糖。以血糖(2 hPG=11.1 mmol/L)為隨機分層因素進行分層隨機分組，隨機分為中模型組、假手術(shù)組、益氣活血散結(jié)組。分組完成后，模型組、益氣活血散結(jié)組行單側(cè)腎切除手術(shù)，假手術(shù)組只切開皮膚、肌肉，不切除腎臟。手術(shù)在3%戊巴比妥鈉(1.6 mL/kg腹腔注射)麻醉下進行。手術(shù)后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉注射液(40單位/只)，預(yù)防傷口感染。此后整個實驗過程均給予高脂高熱量飲食。

1.2.2 干預(yù)藥物及干預(yù)措施 所有大鼠在術(shù)后恢復飼養(yǎng)1周后，開始進行藥物干預(yù)(8周)。益氣活血散結(jié)組給予益氣活血散結(jié)顆粒(黃芪、鬼箭羽)。模型組、假手術(shù)組則給予純凈水。以灌胃的方式進行給藥。結(jié)合前期預(yù)實驗結(jié)果，根據(jù)人和動物體重進行換算，實驗大鼠劑量選用人體臨床等效劑量的10倍。

1.2.3 取材及檢測指標 在術(shù)后8周的藥物干預(yù)期間，每隔2～3周進行1次大鼠24 h尿液的收集，并且及時使用考馬斯亮藍法進行24 h尿蛋白的檢測。藥物干預(yù)結(jié)束后，在3%戊巴比妥鈉(1.6 mL/kg腹腔注射)麻醉下摘取剩余腎臟。腎臟縱切后，一半放入凍存管并放入-80 ℃冰箱暫時保存，用于western blotting以及PCR；另一半浸泡于4%多聚甲醛中固定，用于病理染色以及免疫組化。采用Western blotting以及免疫組化法以檢測腎臟組織中MCP-1以及TGF-β的表達情況和分布情況，采用Quantitative Real-time PCR以檢測腎臟組織中MCP-1mRNA和TGF-βmRNA的表達情況。

1.3 統(tǒng)計學方法 本實驗采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計：計量資料以均數(shù)±標準差(X±S)表示。符合正態(tài)分布者，使用單因素方差分析(One-wayANOVA)；不符合正態(tài)分布者，采用非參數(shù)檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，以P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 動物一般狀況及存活情況 益氣活血組在麻醉時死亡1只，考慮為麻藥誤入血管所致。單腎切除術(shù)后，假手術(shù)組和益氣活血組各死亡1只，考慮為術(shù)后出血過量致死。

2.2 病理染色 HE染色在鏡下100倍、200倍觀察大鼠腎臟結(jié)構(gòu)。假手術(shù)組可見到：腎小球肥大或萎縮(以前者為主)，肥大的腎小球內(nèi)毛細血管迂曲擴張，毛細血管瘤形成；萎縮表現(xiàn)為系膜細胞及系膜基質(zhì)均增生，毛細血管壓迫閉塞，球囊間隙輕度變窄；局部腎小管上皮細胞變性，呈空泡樣變，管腔內(nèi)未見管型；間質(zhì)少量炎細胞浸潤及少量纖維組織增生。模型組可見到：腎小球肥大或萎縮(以前者為主)，肥大的腎小球內(nèi)毛細血管迂曲擴張，毛細血管瘤形成；萎縮表現(xiàn)為系膜細胞及系膜基質(zhì)均增生，毛細血管壓迫閉塞，球囊間隙變窄；腎小管上皮細胞變性，呈空泡樣變及顆粒樣變(以前者為主)，腎小管可見代償性擴張，管腔內(nèi)見管型；間質(zhì)少量炎細胞浸潤及少量纖維組織增生。益氣活血散結(jié)組可見到：腎小球體積形態(tài)正常，腎小球毛細血管擴張，系膜細胞增生不明顯，系膜基質(zhì)區(qū)輕度增寬；腎小管上皮細胞完整，腎小管排列輕度紊亂，擴張明顯，小灶腎小管上皮細胞空泡變性，管腔內(nèi)未見管型，間質(zhì)未見炎性反應(yīng)細胞浸潤。見圖1。

PASM染色和Masson染色在鏡下200倍觀察大鼠腎臟染色結(jié)果：益氣活血散結(jié)組的系膜增生以及基底膜增厚程度要輕于模型組。見圖2。PASM染色及Masson染色的陽性率結(jié)果顯示：益氣活血散結(jié)組陽性率明顯低于模型組(P<0.01，表1)。

表1 PASM染色和Masson染色陽性率

注：**與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。

圖1 HE染色

注：a空白組；b假手術(shù)組；c益氣活血散結(jié)組。

圖2 Masson染色和PASM染色

注：a空白組；b假手術(shù)組；c益氣活血散結(jié)組。

2.3 24 h尿蛋白定量 藥物干預(yù)后，各組的尿蛋白量呈現(xiàn)下降的趨勢，分析第8周與第0周尿蛋白差值的結(jié)果顯示：益氣活血散結(jié)組的24 h尿蛋白在藥物干預(yù)后明顯減少，而且與模型組對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，表2)。

2.4 Western blotting 各組均在分子量為25 kDa(MCP-1)，13 kDa(TGF-β)處可見蛋白條帶。對其灰度值進行分析，結(jié)果顯示：益氣活血散結(jié)組MCP-1(P<0.05，表3)、TGF-β(P<0.01，表3)的表達程度明顯低于模型組。

表2 藥物干預(yù)前后24 h尿蛋白定量差值

注：**與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。

表3 WB檢測MCP-1和TGF-β在腎臟組織中的表達情況

注：*與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05，**與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。

圖3 Western blotting蛋白條帶

2.5 免疫組化 結(jié)果顯示，腎臟組織中MCP-1主要表達于腎小球系膜上皮細胞胞質(zhì)，TGFβ表達于腎小球和腎小管上皮細胞胞質(zhì)。進一步分析灰度值，結(jié)果顯示：MCP-1(P<0.05，表4)及TGF-β(P<0.01，表4)在益氣活血散結(jié)組的表達水平顯著低于模型組。

表4 免疫組化檢測腎臟組織中MCP-1、TGF-β的表達水平

注：*與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05，**與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。

表5 PCR檢測MCP-1mRNA和TGF-βmRNA的表達水平

注：*與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05，**與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。

2.6 RT-PCR 本實驗采用實時定量PCR對MCP-1mRNA以及TGF-βmRNA的表達水平進行檢測，結(jié)果采用2-△△CT法進行數(shù)據(jù)的相對定量分析，并且以假手術(shù)組為對照組。結(jié)果顯示：MCP-1mRNA(P<0.01，表5)、TGF-βmRNA(P<0.05，表5)水平在益氣活血散結(jié)組明顯低于模型組。

圖4 免疫組化結(jié)果

注：a MCP-1，b TGF-β；1模型組，2假手術(shù)組，3益氣活血散結(jié)組。

3 討論

糖尿病腎臟病“微型癥瘕”學說是呂仁和教授在整理古代文獻的基礎(chǔ)上，參照現(xiàn)代醫(yī)學相關(guān)認識，結(jié)合臨床實踐經(jīng)驗提出來的。認為糖尿病腎臟病屬于中醫(yī)“消癉”的范疇，為消渴病日久，體質(zhì)因素加以情志、飲食失調(diào)等，內(nèi)熱傷陰耗氣，氣陰兩傷，或陰損及陽，久病致虛基礎(chǔ)上，久病入絡(luò)，氣虛血瘀，痰郁熱瘀互相膠結(jié)，則可在腎之絡(luò)脈形成微型癥瘕，使腎體受損，腎用失司。腎主藏精，腎氣不固，精微外泄，則可見尿蛋白，或見夜尿頻多等。腎主水，腎氣不化，或陰損及陽，陽不化氣，水濕氣化不利，水液滯留，溢于肌膚，故可見水腫脹滿。病情繼續(xù)發(fā)展，腎體勞損，腎元虛衰，氣血俱傷，氣化不行，濁毒內(nèi)留，則諸癥峰起。終成腎元衰敗，五臟俱病，升降失常，三焦阻滯，水濕濁毒泛濫，一身氣機升降出入俱廢，轉(zhuǎn)為關(guān)格危證[7]。在治療方面，強調(diào)益氣活血散結(jié)法應(yīng)貫穿糖尿病腎病治療的始終[14]。在“十五”“十一五”期間，呂仁和教授團隊基于“微型癥瘕”學說，開展了多個隨機、單盲、平行對照和多中心臨床研究，研究結(jié)果均顯示，基于“微型癥瘕”學說形成的中藥辨證論治方案在有效率、24 h尿蛋白定量、尿微量白蛋白排泄率、血肌酐等方面具有優(yōu)于或非劣于西藥ARB類藥物的療效，甚至在終點事件方面(Ⅲ期DKD患者進入Ⅳ期，或者Ⅳ期DKD患者血肌酐平翻倍或需要透析治療)明顯優(yōu)于西藥厄貝沙坦組[5-6,9-11]。可見，益氣活血散結(jié)法治療糖尿病腎病的療效明確，但是其分子生物學機制仍不清楚，為此，我們開展了此項研究。

研究表明，免疫炎性反應(yīng)機制在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用[13]，其中MCP-1以及TGF-β與糖尿病腎病腎臟纖維化有著密切的關(guān)系。糖尿病時高血糖刺激腎系膜細胞表達MCP-1增多，MCP-1可直接激活系膜細胞產(chǎn)生肌纖維蛋白，使腎小球纖維化；此外還可募集血循環(huán)中的單核巨噬細胞，被活化的巨噬細胞可以釋放活性氧、各種炎性因子(IL-1，TNF-α等)和促纖維化生長因子(PDGF，TGF-β等)，導致腎小球?qū)嵸|(zhì)細胞受損以及壞死，上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，細胞外基質(zhì)的增多，最終導致腎小球硬化的發(fā)生[15]?？梢?，MCP-1和TGF-β在糖尿病腎病發(fā)展過程中的起著重要作用，甚至有學者認為將MCP-1、TGF-β等作為生物標記評估糖尿病腎病的發(fā)展[16]。

本研究結(jié)果顯示，益氣活血散結(jié)組在降低24 h尿蛋白定量以及減輕腎小球纖維化，延緩腎小球硬化方面明顯要比模型組效果好(見圖1，圖2，表1，表2)。這與我們臨床觀察以及以往的隨機對照研究結(jié)果是相符的，再次證明了益氣活血散結(jié)法治療糖尿病腎病的有效性。而在機制研究方面，不管是western blotting、免疫組化，還是RT-qPCT，結(jié)果都一致顯示，對比模型組，益氣活血而散結(jié)組可以很明顯地抑制MCP-1以及TGF-β的表達(見表3，表4，表5)。此外，在HE染色病理切片中也可以看見益氣活血散結(jié)組的炎性反應(yīng)細胞浸潤要比模型組以及假手術(shù)組輕(見圖1)?？梢姡兴幰鏆饣钛⒔Y(jié)法可以有效地抑制糖尿病腎病大鼠腎臟組織中MCP-1和TGF-β的表達。

綜上，我們得出結(jié)論，益氣活血散結(jié)法可以有效地減少24 h尿蛋白定量、延緩腎小球纖維化，其機制可能與抑制腎臟組織中MCP-1和TGF-β的表達有關(guān)。

[1]KDOQI.KDOQI clinical practice guidelines and clinical practice recommendations for diabetes and chronic kidney disease[J].American journal of kidney diseases:the official journal of the National Kidney Foundation，2007，49(2 Suppl 2):S12-154.

[2]Brenner BM，Cooper ME，de Zeeuw D，et al.Effectsof losartan on renal and cardiovascular outcomes in patients with type 2 diabetes and nephropathy[J].The new England journal of medicine，2001,345:861-869.

[3]Enrique Z Fisman，Alexander Tenenbaum，Michael Motro.Losartan and diabetic nephropathy:commentaries on the RENAALstudy[J].Cardiovascular Diabetology，2002:1.

[4]Keane WF，Brenner BM，de Zeeuw D，et al.The risk of developing end-stage renal disease in patients with type 2 diabetes and nephropathy:the RENAAL study[J].Kidney International，2003，63(4):1499-1507.

[5]李景,趙進喜,王世東,等.中醫(yī)藥綜合治療方案全程干預(yù)對糖尿病腎病終點事件的影響[J].中醫(yī)雜志，2012，53(7):568-571，580.

[6]趙進喜.糖尿病腎病規(guī)范化中醫(yī)診療方案及其研究[J].藥品評價，2012，9(28):31-35，40.

[7]呂仁和,趙進喜.糖尿病及其并發(fā)癥中西醫(yī)診治學[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

[8]王世東,黃允瑜,李靖,等.中醫(yī)防治方案對糖尿病腎病腎功能不全代償期腎功能和血脂代謝的影響[J].北京中醫(yī)，2007，26(4):211-214.

[9]宋美鈴,楊敏,牟新,等.中醫(yī)辨證治療糖尿病腎病腎功能不全的腎功能指標療效和證候療效評價[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2006，29(6):429-432.

[10]張麗芬,趙進喜,呂仁和,等.糖尿病腎病腎功能不全防治優(yōu)化方案的有效性和安全性研究[J].中醫(yī)雜志，2006，47(10):755-758.

[11]張麗芬,呂仁和,趙進喜,等.中醫(yī)辨證治療方案對糖尿病腎病腎功能不全患者生存質(zhì)量的影響——多中心臨床研究[J].中醫(yī)雜志，2008，49(2):119-122.

[12]Shaker OG1，Sadik NA.Transforming growth factor beta 1 and monocyte chemoattractant protein-1 as prognostic markers of diabetic nephropathy [J].Human and experimental toxicology，2013,32(10):1089-1096.

[13]Lim AK,Tesch GH.Inflammation in Diabetic Nephropathy[J].Mediators of Inammation，2012,2012:1-12.

[14]丁英鈞，肖永華，傅強，等.糖尿病腎病“微型癥瘕”病理假說解析[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24(1)：27-30.

[15]Tesch GH.MCP-1/CCL2:a new diagnostic marker and therapeutic target for progressive renal injury in diabetic nephropathy [J].American journal of physiology，2008，294(4):F697-701.

[16]El Mesallamy HO，Ahmed HH，Bassyouni AA，et al.Clinical significance of inflammatory and fibrogenic cytokines in diabetic nephropathy [J].Clinial biochemistry，2012,45(9):646-650.

(2016-12-20收稿 責任編輯：洪志強)

Effects of Qi-tonifying Blood-activating and Mass-dissipating Method on Expressions of MCP-1 AndTGF-β in Renal Tissue of Rats with Diabetic Nephropathy

Huang Weijun1，Wang Shidong1，Zhao Jinxi1，F(xiàn)u Qiang1，Gong Qing1，Zhang Hua1，Wu Wenjing2，Shen Zilong3, Jia Xu6，Zhang Yuting6

(1SectionⅡofEndocrinology&NephropathyDepartmentofDongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100700,China; 2NephropathyDepartmentofHubeiProvincialHospitalofTCM，Hubei430061,China;3NephropathyDepartmentofBeijingHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoCapitalMedicalUniversity，Beijing100010,China; 6ResearchandExperimentCenter，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029,China)

Objective:To study the mechanism of Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating method in treating diabetic nephropathy based on MCP-1 and TGF-β through animal experiment.Methods:A total of 24 GK rats were randomly divided into model group，sham-operated group and Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating group.Each group had 8 rats.The DN model was established by feeding with high-fat diet and unilateral nephrectomy.24-hour urine protein was detected and the renal pathological changes were observed.Expressions of MCP-1 and TGF-β in the renal tissue were detected by Western blotting and immunohistochemistry，while RT-PCR was used to detect the expression of MCP-1mRNA and TGF-β mRNA.Results:Results of PASM staining and Masson staining show that the positive rate of Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating group was significantly lower than that of model group(P<0.01).The 24-hour urinary protein in Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating group decreased significantly after drug intervention(P<0.01).Results of Western blotting and immunohistochemistry showed that expression levels of MCP-1(P<0.05) and TGF-β(P<0.01) were lower in Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating group than those in model group.Results of RT-qPCR showed that expression levels of MCP-1 mRNA(P<0.01) and TGF-β mRNA(P<0.05) in Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating group were significantly lower than those in model group.Conclusion:The treatment of diabetic nephropathy with Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating method can decrease the proteinuria and delay the glomerular fibrosis.The molecular mechanism may be related to the inhibition of MCP-1 and TGF-β.

MCP-1; TGF-β; Qi-tonifying blood-activating and mass-dissipating method; diabetic nephropathy

國家自然科學基金項目(編號：81473664)

黃為鈞(1990.07—)，男，在讀博士研究生，研究方向：中醫(yī)藥防治糖尿病及其并發(fā)癥，E-mail：huangweijun2015@126.com

趙進喜(1965.03—)，男，博士，教授/主任醫(yī)師，北京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院中醫(yī)內(nèi)科學教研室主任，研究方向：中醫(yī)藥防治糖尿病及其并發(fā)癥，郵編：100700，電話：84013293，E-mail：zhaojinximd@126.com

R259

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.01.004