尚天翠

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曼陀羅總生物堿抑菌活性的初步研究

尚天翠

（伊犁師范學(xué)院生物與地理科學(xué)學(xué)院，新疆 伊寧 835000）

采用MIC和紙片法考查了曼陀羅提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性能。結(jié)果表明，曼陀羅對4種受試菌株都有抑菌活性；100 ℃時，水提物對大腸桿菌的抑菌效果最好, 最大抑菌圈為14.72 mm; pH值為8時，曼陀羅水提取對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性最好，最大抑菌圈分別為15.46、13.47、12.26和11.22 mm。曼陀羅水提取對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的最小抑菌濃度( MIC) 分別為8、8、4、6 mg/mL。

曼陀羅；生物堿；抑菌活性

曼陀羅()為茄科曼陀羅屬植物，野生藥用植物，現(xiàn)廣泛分布于全國各地。曼陀羅生物堿是曼陀羅的主要藥理活性部分，對胃腸痙攣、哮喘、關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)性偏頭痛、跌打損傷等癥狀具有良好的治療作用[1-5]。關(guān)于曼陀羅生物堿的化學(xué)成分研究已有報道[6-7], 但關(guān)于曼陀羅生物堿抑菌活性方面的研究鮮見報道。因此本實驗通過對曼陀羅生物堿抑菌作用的研究，為曼陀羅在醫(yī)療等方面的藥理研究提供重要的理論依據(jù)和奠定基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 材料

曼陀羅種子在2011年3月采集于伊犁河周邊地區(qū)，經(jīng)100 ℃烘干，粉碎后過60目篩，裝入燒杯中封口，置于低溫條件下保存?zhèn)溆?。金黃色葡萄球菌（）、大腸桿菌()、枯草芽孢桿菌()、酵母菌（）由本院微生物實驗室提供。

1.2 方 法

1.2.1 曼陀羅種子生物堿提取液的制備

將曼陀羅種子干粉稱取5 g，再加入蒸餾水10 mL，在28 ℃浸泡24 h，按照比例配制成0.5、1、2、4、6、8、10 mg/mL處理液置4 ℃冰箱備用。

1.2.2 4種菌液的制備

將活化好的菌種挑起少許，在無菌條件下，接入裝有30 mL液體LB培養(yǎng)基的錐形瓶中，在37 ℃、150 r/min震蕩培養(yǎng)18 h，使各種菌達到對數(shù)生長期，最終使菌懸液中細(xì)菌數(shù)為1×107個/mL、酵母菌數(shù)為1×106個/mL，待用。

1.2.3 曼陀羅種子生物總堿的抑菌作用

抑菌圈的大小采用紙片法測定[8]。先將不同濃度的總生物堿提取物20 μL加入到經(jīng)滅菌的標(biāo)準(zhǔn)濾紙片(直徑為6 mm)表面，自然晾干后再重復(fù)2次，并按“品”字形貼于含菌的平板表面，恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察并測量抑菌圈的大小。不同濃度提取液對4種受試菌株分別測定3次，結(jié)果取其平均值。

1.2.4 曼陀羅種子生物堿的最低抑菌濃度(MIC)的測定[9]

將曼陀羅種子生物總堿液分別稀釋成0.5、1、2、4、6、8、10 mg/mL 7個濃度梯度，按照濾紙片法測定抑菌圈大小，比較各濃度下的抑菌大小，并確定最小抑菌濃度。

1.2.5 pH對曼陀羅種子生物堿提取物抑菌活性的影響

取曼陀羅生物堿水溶液若干份，然后用0.1 mol/mL HCl或NaOH溶液分別調(diào)制pH值為4、5、6、7、8、9、10，按照上述濾紙片法操作，以比較不同的pH對曼陀羅種子生物堿抑菌活性的影響。

1.2.6 溫度對曼陀羅種子生物堿抑菌活性的影響

取曼陀羅生物堿水溶液若干份，分別置于40、60、80、100 ℃的水浴中加熱，以大腸桿菌為代表菌，用濾紙片測定抑菌圈大小，重復(fù)3次，取平均值。

1.2.7 pH對曼陀羅種子生物堿提取物抑菌活性的影響

將曼陀羅種子生物堿溶液分別與枯草芽孢桿菌和大腸桿菌懸液混合，制成固體平板，作用時間設(shè)為 1、3、6、9、12 h時，移取0.2 mL混合菌懸液，以不加曼陀羅種子生物堿溶液的枯草芽孢桿菌和大腸桿菌平板作為對照，在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，計菌落數(shù)，重復(fù)2次，并按下列公式計算抑菌率。

抑菌率,％＝對照皿菌落數(shù)-

實驗皿菌落數(shù)/對照皿菌落數(shù)×100％

2 結(jié)果與分析

2.1 曼陀羅種子生物堿的抑菌作用

表1的結(jié)果表明，曼陀羅種子生物堿提取物對各受試菌的抑菌圈直徑都在10 mm以上，表明曼陀羅種子生物堿提取物對革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌和酵母菌都有抑菌作用。但相對而言，曼陀羅種子生物堿提取物對受試細(xì)菌的抑菌活性明顯要大于酵母，其中對大腸桿菌的抑菌圈最明顯，抑菌圈達到了16.2 mm。因此，曼陀羅種子生物堿提取物對細(xì)菌的抑菌活性比較強。

表1 曼陀羅種子生物堿液對試驗菌的抑菌效果

注：— 表示無抑菌圈。

2.2 曼陀羅種子生物堿的最低抑菌濃度(MIC)的測定

表2 不同曼陀羅種子生物堿溶液濃度對幾種微生物的最低抑制濃度

表2的結(jié)果表明，曼陀羅種子生物堿提取物對對大腸桿菌、枯草桿菌的最低抑菌濃度(MIC)為8 mg/mL，金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)為4 mg/mL，對酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)為6 mg/mL。

2.3 溫度對曼陀羅種子生物堿抑菌的影響

表3 不同的溫度對曼陀羅種子生物堿抑菌活性的影響（大腸桿菌）

由表3可以看出，隨著溫度的升高，曼陀羅種子生物堿對大腸桿菌的抑菌作用也在增大，在100℃的條件下，抑菌圈直徑達到最大值，抑制圈大小為14.72 mm，說明溫度對曼陀羅種子生物堿具有一定的影響。

2.4 pH對曼陀羅種子生物堿提取物抑菌活性的影響

由表3可以看出，在不同的pH條件下，曼陀羅種子生物堿提取物對四種菌都有不同程度的抑菌作用。當(dāng)pH=6~10時，對大腸桿菌的抑菌效果較好；當(dāng)當(dāng)pH=5~10時，對枯草芽孢桿菌的抑菌效果較好；當(dāng)pH=7~10時，對金黃色葡萄球菌的抑菌效果較好；當(dāng)pH=8~10時，對酵母菌的抑菌效果較好，當(dāng)pH=8時，對四種菌的抑菌效果都達到最大，說明，pH=8是曼陀羅種子生物堿提取物抑菌的最佳pH值。

表4 不同的pH對曼陀羅種子生物堿提取物抑菌活性的影響

2.5 曼陀羅種子生物總堿液對致病菌作用時間與抑菌率的關(guān)系

由圖1、圖2可知，曼陀羅種子生物堿提取液的濃度和作用時間呈正比關(guān)系，即濃度越大，作用時間越長，抑菌效果越好，曼陀羅種子生物堿提取液對兩種菌作用時間與抑菌率的影響不是很明顯。

圖1 枯草芽孢桿菌

圖2 大腸桿菌

3 結(jié) 論

曼陀羅種子生物堿是一種具有抑制活性的物質(zhì)，抑菌實驗結(jié)果表明：曼陀羅種子生物堿對細(xì)菌有較強的抑制作用，MIC值分別為：金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)為4 mg/mL，大腸桿菌、枯草芽胞桿菌的最低抑菌濃度(MIC)為8 mg/mL，酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)為6 mg/mL。

曼陀羅種子生物堿的抑菌作用在不同的pH值范圍內(nèi)均較穩(wěn)定，在弱堿性條件下（pH=8左右）能更好的發(fā)揮其抑菌作用；溫度越高，曼陀羅種子的抑菌效果越顯著；曼陀羅種子生物堿提取液的濃度和作用時間呈正比關(guān)系，即濃度越大，作用時間越長，抑菌效果越好。

[1] 張宏利, 揚學(xué)軍, 劉文國, 等. 受陀羅化學(xué)成分與生物活性研究現(xiàn)狀及展望[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報, 2004, 19 (2): 98.

[2] 徐美勤, 孫正明. 東莨菪堿和氯丙嗪聯(lián)合戒毒的療效分析[J]. 臨床精神醫(yī)學(xué)雜志, 2001, 11 (5): 261-262.

[3] 周志田, 王剛. 曼陀羅燙洗治療跟骨骨刺足跟痛[J]. 中國民間療法, 2003, 11 (1): 22.

[4] 柴軍, 汪佳萍, 梁潔. HPLC測定復(fù)方曼陀羅藥水中的硫酸阿托品[J]. 華西藥學(xué)雜志, 2009, 24 (3): 310-311.

[5] 張紅星, 祁青. 洋金花的鎮(zhèn)痛作用及臨床應(yīng)用研究[J]. 湖北中醫(yī)雜志, 2010, 32 (2): 29-31

[6] 姚士巖, 王海泉. 曼陀羅有效成分的分析[J]. 遼寧大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 1995, 21 (1): 99-102.

[7] 江恒, 林開中. 民間毒性草藥曼陀羅種子中托烷類生物堿的含量測定[J]. 藥物分析雜志, 1998, 18 (增) : 147-148.

[8] 白羨欽，代光輝, 陳佳, 等. 合歡皮提取物對黑曲霉抑菌活性的研究[J]. 食品工業(yè)科技，2014, 35 (12): 133 -136.

[9] 唐裕芳, 張妙玲, 陶能國, 等. 蒼術(shù)揮發(fā)油的提取及其抑菌活性研究[J].西北植物學(xué)報, 2008, 28 (3): 0588-0594.

Study on the Antibacterial Activity of Total AlkaloidsFromSeeds

SHANG Tian-cui

（School of Biology and Geography Science, Yili Normal University, Xinjiang Yining 835000, China）

The bacteriostasis performance of datura extracts to Eschrichia coli,Bacillus subtilis,Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae was investigated by MIC and scrip method. The results showed that datura extracts had bacteriostasis activity to four kinds of test strains. The bacteriostasis effect of datura H2O extracts on Eschrichia coli was best at37℃, the max bacteriostasis ringwas 14.72mm. The max antibacterial ring of H2O extracts to Eschrichia coli, Bacillus subtilis,Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae at pH for 8 were 15.46, 13.47,12.26 and 11.22, respectively. MIC value for Eschrichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae were8，8，4，6mg /mL,respectively.

; alkaloid; antibacterial activities

Q 946.887

A

1004-0935（2017）09-0852-03

伊犁師范學(xué)院/自治區(qū)教育廳普通高等學(xué)校重點實驗室項目，項目號：2013YSHXYB09。

2017-05-12

尚天翠（1979-），女，高級實驗師，碩士，甘肅白銀市人，2007年畢業(yè)于甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)專業(yè)，研究方向：從事植物與微生物資源開發(fā)利用。