劉柄娜

摘 要：目的：對(duì)丹蓮肝康顆粒中藥材的提取工藝進(jìn)行研究。方法：將干膏得率和丹參酮ⅡA提取率作為指標(biāo)，使用均勻設(shè)計(jì)法來(lái)選擇紫草醇和丹參提取工藝中的乙醇用量、乙醇的體積分?jǐn)?shù)、提取的時(shí)間、浸泡時(shí)間和提取次數(shù)；將丹酚酸B和野黃岑苷的干膏得率和提取率當(dāng)做指標(biāo)，使用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)的方法來(lái)對(duì)整個(gè)工藝中的提取時(shí)間、浸泡時(shí)間、加水量等幾個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化，從而對(duì)于最優(yōu)的提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：最佳的提取工藝是紫草和丹參加入9.6倍的乙醇，乙醇的比例是95%，在經(jīng)過(guò)了3個(gè)小時(shí)的浸泡之后，提取兩次，每一次是20min，在經(jīng)過(guò)了3次的驗(yàn)證試驗(yàn)之后，試驗(yàn)結(jié)果顯示丹參酮ⅡA的提取率平均值是44.73%，而干膏得率的平均值是25.55%。將藥渣和其余的一些藥材也提取3次，在第一次的時(shí)候要加入12倍的水，在第2次和第3次的時(shí)候要加入10倍的水，而且每一次提取的時(shí)間是1h，在這三次驗(yàn)證中，野黃岑苷的平均提取率是71.67%，而丹酚酸B的平均提取率是47.67%，干膏得率的平均值是24.63%。結(jié)論：提取工業(yè)是可行的，為丹蓮肝康顆粒的制備提供了科學(xué)的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：丹蓮肝康顆粒；藥材提取；丹參酮ⅡA；丹酚酸

丹蓮肝康顆粒在經(jīng)過(guò)一系列的臨床試驗(yàn)得到的藥物，這種藥物主要是由丹參、半枝蓮、鱉甲、赤芍和莪術(shù)等成分組成的，有著軟堅(jiān)散結(jié)、活血化瘀和清熱利濕的作用，主要是用來(lái)治療腰腿酸軟、頭暈耳鳴、脅下痞塊、五心煩熱等癥狀，在臨床中在主要是用于肝腎陰虛型上的慢性肝炎和肝硬化。為了選擇最佳的藥材提取工藝，使用均勻設(shè)計(jì)法、正交試驗(yàn)法來(lái)進(jìn)行工藝的優(yōu)化。本文就是對(duì)丹蓮肝康顆粒的實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的研究，為相關(guān)的研究提供借鑒。

1 材料

1.1 儀器

JJ300型電子天平、XS204電子分析天平、1200高效液相色譜儀和DHG型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

1.2 藥品、藥材和試劑

半枝蓮、丹參、鱉甲、紫草、莪術(shù)、野黃岑苷對(duì)照品、丹參酮ⅡA對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品。其中丹參酮ⅡA對(duì)照品是供含量測(cè)定使用的，丹參中含有0.42%的丹參酮ⅡA，野黃岑苷對(duì)照品的純度是92.1%，半枝蓮中含有0.24%的野黃岑苷，丹酚酸B對(duì)照品的純度為92.1%，丹參中含有3.93%的丹酚酸B，甲醇、乙腈是色譜純，使用的水是雙蒸水，其他的試劑是分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 干膏得率的測(cè)定。要精密的吸取丹蓮肝康的濃縮液，濃縮液的含量是20mL，將其放在已經(jīng)干燥到恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，在這一狀態(tài)下進(jìn)行水浴蒸干，并且根據(jù)干燥失重測(cè)定法來(lái)進(jìn)行相應(yīng)的測(cè)定，對(duì)于干膏得率進(jìn)行計(jì)算。

2.1.2 丹參酮ⅡA的測(cè)定。（1）對(duì)照品溶液在配制的過(guò)程中，要精密的進(jìn)行丹參酮ⅡA對(duì)照品的稱取，將其放在棕色的量瓶中，之后就可以向立面加入甲醇進(jìn)行稀釋，將其稀釋成為1ml的溶液中含有40.2μg的丹參酮ⅡA丹參酮ⅡA溶液。（2）供試品溶液在配制的過(guò)程中，要精密的吸取丹蓮肝康的濃縮液，吸取1ml，將溶液放置在50ml的量瓶中，之后就可以向里面加入45ml的甲醇，并且進(jìn)行超聲處理，在超聲處理的過(guò)程中，功率是100w，超聲頻率是50kHz，超聲處理的時(shí)間是15min，將其放冷加入乙醇到相應(yīng)的刻度，進(jìn)行搖勻和過(guò)濾處理。（3）色譜柱使用的是：EclipseXDB-C18，檢測(cè)的波長(zhǎng)是270nm，流速是1ml/min，流動(dòng)相是甲醇-水，比例是80：20，進(jìn)樣量是10μl，柱溫是25ml，y代表的是峰面積，x代表的是質(zhì)量不濃度，從而達(dá)到相應(yīng)的方程如下：y=25.278x+1.76，其中r為0.999，n為5，相關(guān)的結(jié)果表明了丹參酮ⅡA在質(zhì)量濃度為6.4-32μg/ml這一范圍內(nèi)和峰面積是呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系的。精密度試驗(yàn)RSD是0.73%的時(shí)候，根據(jù)這一結(jié)果就可以知道精密度是良好的，而供試品溶液在8h內(nèi)是呈現(xiàn)穩(wěn)定的狀態(tài)的，這時(shí)RSD是0.26%，在平均加樣回收率是98.23%的情況下，RSD是1.55%。根據(jù)色譜專屬性試驗(yàn)的結(jié)果可以得知，丹參的陰性對(duì)照供試品色譜在保留的時(shí)間上是無(wú)色譜峰，也就是說(shuō)明了陰性對(duì)照是無(wú)干擾的。

2.1.3 丹酚酸B的含量測(cè)定。（1）對(duì)照品溶液在配制的過(guò)程中，要精密的稱取對(duì)照品適量，向里面加入甲醇，從而制成1ml中就含有282.5μg丹酚酸B的對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的配置。供試品溶液在配置的過(guò)程中，要精密的量取5mL的丹蓮肝康的濃縮液，將其放在50mL的量瓶中，之后加入甲醇40ml，進(jìn)行超聲處理30min之后取出，放冷加入甲醇到相應(yīng)的刻度，搖勻過(guò)濾。（3）色譜柱：EclipseXDB-C18，流動(dòng)相：[甲醇-乙腈（3∶1，V/V）]-1%甲酸水溶液（38∶62，V/V），流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，得回歸方程：y=12.26x-142.64（r=0.99995，n=5），結(jié)果表明，丹酚酸B在22.6～282.50μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面呈良好的線性關(guān)系。丹酚酸B精密度試驗(yàn)RSD為1.61%，表明精密度良好；供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為1.86；平均加樣回收率為97.59%，RSD為1.35%。色譜專屬性試驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參陰性對(duì)照供試品色譜在丹酚酸B對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間上無(wú)色譜峰，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選醇提取工藝研究

2.2.1 因素水平。根據(jù)丹參和紫草中所含有效成分的理化性質(zhì)，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)（X1，%）、乙醇用量（X2，倍）、浸泡時(shí)間（X3，h）、提取時(shí)間（X4，min）、提取次數(shù)（X5）作為考察因素，以丹參酮ⅡA提取率（丹參酮ⅡA提取率%=提取液中丹參酮ⅡA總量/藥材中丹參酮ⅡA總量×100%）（Y1，權(quán)重系數(shù)0.7）與干膏得率（Y2，權(quán)重系數(shù)0.3）為考察指標(biāo)，采用均勻設(shè)計(jì)表來(lái)安排試驗(yàn)。

2.2.2 結(jié)果分析。采用DPSv6.55版數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行逐步回歸，經(jīng)F檢驗(yàn)具有顯著意義（P<0.05），表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從回歸方程可以求得最佳參數(shù)為：取處方量的丹參和紫草，加9.6倍量95%的乙醇，浸泡3h，提取2次，每次提取20min。

2.3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法優(yōu)選水提工藝研究

選取提取次數(shù)（A）、提取時(shí)間（B，min）、加水量（C，倍）作為考察因素，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，以丹酚酸B提取率[丹酚酸B提取率（%）=提取液中丹酚酸B總量/藥材中丹酚酸B總量×100%]（Y3，權(quán)重系數(shù)0.4）、野黃芩苷提取率[野黃芩苷提取率%=提取液中野黃芩苷總量/藥材中野黃芩苷總量×100%]（Y4，權(quán)重系數(shù)0.4）和干膏得率（Y5，權(quán)重系數(shù)0.2）為考察指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，篩選最佳工藝。

結(jié)果：方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)和提取時(shí)間均對(duì)提取結(jié)果有顯著影響（P<0.05），而加水倍量對(duì)結(jié)果無(wú)顯著影響。

3 討論

均勻設(shè)計(jì)可以將試驗(yàn)有關(guān)因素的各水平數(shù)均勻分散在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，尤其適合中藥處方篩選、提取工藝優(yōu)化等經(jīng)常涉及多因素、多水平的試驗(yàn)，以丹酚酸B和野黃芩苷的提取率及干膏得率為考察指標(biāo)，采用多指標(biāo)歸一化加權(quán)法，綜合評(píng)價(jià)優(yōu)選丹蓮肝康顆粒的水提取工藝。綜上所述，本研究中醇提工藝驗(yàn)證結(jié)果與優(yōu)選結(jié)果基本吻合，表明優(yōu)選的工藝合理、工藝條件穩(wěn)定可行。

參考文獻(xiàn)

[1]許夢(mèng)寒，農(nóng)毅清，蔣林.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選保健食品藍(lán)參降脂咀嚼片醇提工藝[J].中國(guó)藥師，2014，17（3）：366.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：71、附錄51.

[3]趙向陽(yáng)，沈靜，劉峰，等.RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方半支蓮膠囊中野黃芩苷含量[J].安徽醫(yī)藥，2005，9（5）：348.