*

（1.西南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，重慶 400716；2.湖南省煙草公司邵陽(yáng)市公司，湖南 邵陽(yáng) 422001）

煙草赤星病室內(nèi)防治藥劑篩選及田間防治效果

陳杰1，李六英1，高敏1，馬冠華1*，陳國(guó)康1，于慶濤2

（1.西南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，重慶 400716；2.湖南省煙草公司邵陽(yáng)市公司，湖南 邵陽(yáng) 422001）

采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法，測(cè)定了10種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑菌效果，采用田間小區(qū)試驗(yàn)對(duì)活性較好的4種殺菌劑進(jìn)行防治效果比較。10種農(nóng)藥室內(nèi)毒力試驗(yàn)結(jié)果顯示，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑抑制菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的效果好；430 g/L戊唑醇懸浮劑抑制孢子萌發(fā)單一效果好；40%腈菌唑可濕性粉劑、40%菌核凈可濕性粉劑和 6%嘧肽霉素水劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制效果都差。4種農(nóng)藥田間試驗(yàn)表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑對(duì)煙草赤星病的防效分別為90.60%、88.21%、87.21%和83.84%，均表現(xiàn)出良好的效果，推薦使用此4種殺菌劑用于生產(chǎn)上煙草赤星病的防控。

煙草赤星?。凰巹┖Y選；防治效果

煙草赤星?。ˋlternaria alternata）是煙草成熟后期重要的葉部真菌病害，嚴(yán)重威脅我國(guó)各地?zé)熑~生產(chǎn)[1-3]。該病潛育期短、流行速度快，在煙株打頂后，病菌從下部葉片開(kāi)始自下而上逐步發(fā)展，環(huán)境適宜時(shí)，短期內(nèi)即可造成大流行，給煙葉生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失[4-5]。

化學(xué)藥劑防治仍是控制煙草赤星病的最主要措施[6-7]，目前國(guó)內(nèi)防治該病的化學(xué)藥劑以菌核凈為主。菌核凈為內(nèi)吸性殺菌劑，長(zhǎng)期大量使用易產(chǎn)生抗藥性，在部分煙區(qū)已表現(xiàn)出防效降低現(xiàn)象[8-9]。其農(nóng)藥殘留較高，可大大影響煙葉品質(zhì)[10]。為有效控制煙草赤星病的發(fā)生及流行，延緩該病菌的抗藥性發(fā)展，篩選高效輪換藥劑愈加迫切。本研究按照化學(xué)分類(lèi)選擇10種不同作用機(jī)理的藥劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，篩選出室內(nèi)毒力活性較好的4種藥劑進(jìn)行田間小區(qū)防治試驗(yàn)，擬找出對(duì)煙草赤星病防控效果較好可用于交替或輪換的藥劑，為煙草安全生產(chǎn)提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試病原菌：煙草赤星病菌YN-1由西南大學(xué)植物生態(tài)病理研究所提供。

供試煙草品種：K326，由玉溪中煙種子生產(chǎn)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

供試培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊膠培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g；瓊膠17～20 g；葡萄糖20 g；水1000 mL。

供試藥劑：50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（美國(guó)富美實(shí)公司）、430 g/L戊唑醇懸浮劑（拜耳作物科學(xué)中國(guó)有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（利民化工股份有限公司）、40%腈菌唑可濕性粉劑（美國(guó)陶氏益農(nóng)公司）、10%多抗霉素可濕性粉劑（日本科研制藥株式會(huì)社）、6%嘧肽霉素水劑（大連奧德植保有限公司）、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑（青島潤(rùn)生農(nóng)化有限公司）、40%菌核凈可濕性粉劑（江西禾益化工股份有限公司）、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑（四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司）和30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑（天津漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 室內(nèi)藥劑篩選 （1）對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法[11-12]。將供試菌株接種于PDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，制備直徑為6 mm的菌餅備用。各藥劑稀釋的濃度梯度依次為50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑：0.5、2.5、5、10、50 μg/mL；430 g/L戊唑醇懸浮劑：4.3、17.2、43、86、340 μg/mL；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑：0.01、0.05、0.1、0.5、5 μg/mL；40%腈菌唑可濕性粉劑：5、10、50、100、500 μg/mL；10%多抗霉素可濕性粉劑：0.5、1、5、25、50 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑：120、300、600、1500、3000 μg/mL；40%菌核凈可濕性粉劑：1、5、10、50、100 μg/mL；32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑：0.026、0.13、1.3、2.6、6.5 μg/mL；30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑：0.05、0.5、2.5、10、25 μg/mL；30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑：0.45、0.9、1.8、4.5、9 μg/mL；在培養(yǎng)皿中加入1 mL配好的藥液和9 mL培養(yǎng)基，混勻，制成不同含藥濃度的PDA，將直徑為6 mm的菌餅接種于含藥PDA培養(yǎng)基上。設(shè)加1 mL無(wú)菌水的PDA培養(yǎng)基為對(duì)照，每處理3次重復(fù)。置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于7 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑[8]，求出毒力回歸方程，并計(jì)算各藥劑對(duì)病菌的有效抑制中濃度（EC50）及相關(guān)系數(shù)（R）。

（2）對(duì)病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測(cè)定。用無(wú)菌水調(diào)節(jié)孢子濃度（10×20倍下每視野20～30個(gè)），配成孢子懸浮液。配制各待測(cè)藥劑濃度梯度同上。用移液槍吸取50 μL孢子懸浮液于凹玻片內(nèi)，再分別加入50 μL各濃度梯度的藥液，配成含系列藥劑質(zhì)量濃度的孢子懸浮液。設(shè)不加藥液處理為對(duì)照，每處理 3次重復(fù)。將凹玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)保濕培養(yǎng)，24 h后鏡檢孢子萌發(fā)情況，每處理隨機(jī)觀(guān)察3個(gè)視野，共100個(gè)孢子。計(jì)算孢子萌發(fā)率及藥劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率，求出毒力回歸方程，計(jì)算出各藥劑對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制中濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(R)[12]。

1.2.2 田間藥效試驗(yàn) （1）試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)地為重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)，土壤肥力基本一致。設(shè)置4個(gè)處理，即A：10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（有效成分用量為150 g/hm2）；B：32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑（有效成分用量為487.5 g/hm2）；C：30%苯醚·丙環(huán)唑懸浮劑（有效成分用量為450 g/hm2）；D：30%肟菌·戊唑醇懸浮劑（有效成分用量為 225 g/hm2）。施用等量清水（CK）作對(duì)照，每個(gè)處理3次重復(fù)，共15個(gè)小區(qū)，采用隨機(jī)區(qū)組排列，試驗(yàn)田四周設(shè)保護(hù)行。按照各藥劑要求的濃度，分別于2015年7月13日、7月19日和7月31日施藥，共施藥3次，第1次施藥時(shí)未發(fā)生赤星病。

（2）數(shù)據(jù)調(diào)查方法：在第3次用藥后20 d，每個(gè)小區(qū)采用5點(diǎn)法取樣，每點(diǎn)調(diào)查5株，以葉片為單位全株調(diào)查。

病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，全葉無(wú)病；1級(jí)，病斑面積占葉片面積的1%以下；3級(jí)，病斑面積占葉片面積的2%～5%；5級(jí)，病斑面積占葉片面積的6%～10%；7級(jí)，病斑面積占葉片面積的11%～20%；9級(jí)，病斑面積占葉片面積的21%以上。參照文獻(xiàn)[12]計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

2 結(jié) 果

2.1 殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

10種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌絲的生長(zhǎng)都有一定的抑制作用（表1）。不同藥劑的抑制效果有著明顯差異，其中，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑對(duì)煙草赤星病菌菌絲的抑制效果較好，EC50分別是0.1448、0.9947、1.6058、2.2864、4.4691和5.0088 μg/mL；而40%菌核凈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑和 40%腈菌唑可濕性粉劑的抑制效果較差，EC50分別為26.1781、27.5984和34.4867 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑對(duì)菌絲的抑制效果最差，EC50為480.8993 μg/mL。

2.2 殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果

10種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌的孢子萌發(fā)都有一定的抑制作用，但各藥劑的抑制效果明顯不同（表 2）。其中，32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑對(duì)赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果較好，EC50分別為0.3390、0.5840、0.8613、1.0134、1.2183、4.3815和4.4517 μg/mL；40%腈菌唑可濕性粉劑和 40%菌核凈可濕性粉劑的抑制效果較差，EC50分別為15.4551和16.2605 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑的抑制效果最差，EC50為 205.4619 μg/mL。

表1 10種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果Table 1 The activities against mycelial growth of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

表2 10種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果Table 2 The activities against spore germination of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

2.3 殺菌劑對(duì)煙草赤星病田間小區(qū)防治效果

4種化學(xué)藥劑對(duì)煙草赤星病都有較好的防治效果（表3）。10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑和30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑防效分別是90.60%、88.21%和87.21%，3種藥劑對(duì)煙草赤星病的防治效果無(wú)顯著差異。其中10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑的防效顯著好于32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑，但32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑與 30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑之間防效無(wú)顯著差異。

表3 4種殺菌劑對(duì)煙草赤星病的田間小區(qū)防治試驗(yàn)Table 3 The field experiment effect of Tobacco Brown Spot control of four fungicides

3 討 論

煙草赤星病主要為害成熟期煙葉，發(fā)生嚴(yán)重時(shí)對(duì)產(chǎn)量影響極大，生產(chǎn)上長(zhǎng)期使用菌核凈已使得部分地區(qū)病菌抗藥性發(fā)展較快[13]，導(dǎo)致防治效果不理想。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)赤星病菌的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)測(cè)定表明，40%菌核凈可濕性粉劑對(duì)病菌的EC50值遠(yuǎn)高于10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑等4種藥劑，表明菌核凈防治效果變差的根本原因是對(duì)病菌的抑制作用減弱，這與李梅云等[8]的研究結(jié)果一致。

不同種類(lèi)的殺菌劑對(duì)病原菌的作用機(jī)制各有特點(diǎn)，因此，篩選更多種類(lèi)的有效藥劑是必要的。本研究按化學(xué)分類(lèi)選擇了常見(jiàn)的殺菌劑作為代表，將各種殺菌劑在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行比較分析，便于篩選效果好的殺菌劑。其中，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑?yàn)槿蝾?lèi)內(nèi)吸性殺菌劑，咪鮮胺錳鹽為咪唑類(lèi)殺菌劑，作用機(jī)理都為影響甾醇類(lèi)生物合成，使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞，導(dǎo)致病原菌死亡。本研究中430 g/L戊唑醇懸浮劑對(duì)抑制煙草赤星病孢子萌發(fā)單一效果好，抑制菌絲生長(zhǎng)效果比其他幾種三唑類(lèi)殺菌劑差，盡管三唑類(lèi)的殺菌劑具有相似的作用機(jī)制，但不同的三唑類(lèi)殺菌劑在抵抗相同的病原菌方面也會(huì)表現(xiàn)出不同的抗菌活性和機(jī)制，從而防治效果間也會(huì)存在差異。趙華等[14]研究表明，戊唑醇對(duì)鏈格孢分生孢子萌發(fā)的抑制效果好，對(duì)菌絲生長(zhǎng)和分生孢子盤(pán)形成的抑制作用差。多抗霉素為多氧嘧啶核苷類(lèi)，作用機(jī)理為抑制細(xì)胞壁幾丁質(zhì)的合成；嘧菌酯為甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，其作用機(jī)理是抑制線(xiàn)粒體呼吸作用；肟菌酯為甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，作用機(jī)理為通過(guò)阻止病菌細(xì)胞ATP的合成，從而抑制其線(xiàn)粒體呼吸來(lái)達(dá)到抑菌的效果。本研究結(jié)果表明，三唑類(lèi)苯醚甲環(huán)唑分別與三唑類(lèi)丙環(huán)唑，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)嘧菌酯復(fù)配，對(duì)病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)抑制效果好。而菌核凈的作用機(jī)制可能是干擾膜上脂質(zhì)的合成[15]，與以上幾種藥劑的抑菌機(jī)理有著差異。生產(chǎn)上可以選擇多種防治效果好的殺菌劑輪換使用，從而減輕抗藥性，提高產(chǎn)量。

4 結(jié) 論

10種農(nóng)藥室內(nèi)毒力試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑對(duì)赤星病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均有好的抑制效果；田間試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑4種農(nóng)藥對(duì)煙草赤星病有較好的防治效果，可在生產(chǎn)上輪換或交替使用來(lái)防治煙草赤星病，提高煙草種植的經(jīng)濟(jì)效益。

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Indoor Screening and Field Trial of Fungicides against Tobacco Brown Spot

CHEN Jie1, LI Liuying1, GAO Min1, MA Guanhua1*, CHEN Guokang1, YU Qingtao2
(1. College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400716, China; 2. Shaoyang City Branch of Hunan Provincial Tobacco Corporation, Shaoyang, Hunan 422001, China)

The aims of this investigation were to screen for effective fungicides to control tobacco brown spot. The indoor toxicities of ten fungicides againstA. alternatawere tested by the method of colonial growth-rate and spore germination. The field trial was conducted with four selected fungicides. The results of the indoor experiment showed that the fungicides with strong activities against both mycelia growth and spore germination ofA. alternatawere difenoconazole 10% WG , polyoxin 10% WP, prochloraz-manganese chloride complex 50% WP, difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE. In addition, tebuconazole 430 g/L SC had strong activities against spore germination but not mycelia growth ofA. alternate. The fungicides with weak inhibitory activities were myclobutanil 40% WP, dimetachlone 40% WP and cytosinpeptidemycin 6% AS. The results of the field experiment indicated that the control effect of difenoconazole 10% WG, trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE were 90.60%, 88.21%, 87.21% and 83.84%, respectively. These four fungicides could be used in control of tobacco brown spot.

Alternaria alternata; screening fungicides; control effect

S435.72

1007-5119（2017）01-0073-05

10.13496/j.issn.1007-5119.2017.01.013

重慶市煙草專(zhuān)賣(mài)局（公司）項(xiàng)目“重慶煙草有害生物綜合治理專(zhuān)項(xiàng)”（NY20140401070002）

陳 杰（1993-），女，碩士研究生，主要從事植物病原學(xué)研究。E-mail：21616122@zju.edu.cn。*通信作者，E-mail：nikemgh@swu.edu.cn

2016-06-02

2016-11-03