葛紹陽，王娜，劉治麟，楊子彪，武永超，桑躍，趙亮

（1.北京資源亞太飼料科技有限公司博士后科研工作站，北京 102600；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京市高等學(xué)校畜產(chǎn)品工程研究中心，北京 100083；3.北京和益源生物技術(shù)有限公司，北京 100089；4.云南皇氏來思爾乳業(yè)有限公司，大理 671000）

雙歧桿菌A6對(duì)健康青年人群腸道菌群的影響

葛紹陽1，王娜2，劉治麟3，楊子彪4，武永超3，桑躍3，趙亮2

（1.北京資源亞太飼料科技有限公司博士后科研工作站，北京 102600；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京市高等學(xué)校畜產(chǎn)品工程研究中心，北京 100083；3.北京和益源生物技術(shù)有限公司，北京 100089；4.云南皇氏來思爾乳業(yè)有限公司，大理 671000）

益生菌的重要功能之一是對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)。動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種A6（Bifidobacteirum animalis subsp． lactis A6）菌株已被證實(shí)具有良好的生理功能，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)該菌株對(duì)青年人群腸道菌群的影響，本研究募集52名18～26歲的健康青年志愿者，將其隨機(jī)等分為兩組，開展人群口服試驗(yàn)：兩組先服用1周安慰劑；組A繼續(xù)服用安慰劑4周，組B服用A6樣品（添加有A6活菌牛奶，活菌濃度約為1010CFU/50mL）4周；停服2周；組A服用A6樣品4周，組B服用安慰劑4周。服用劑量為每天50mL。在每一階段末期采集一次糞便樣品（共5次），以種屬特異性引物定量PCR檢測(cè)其中的腸道菌群數(shù)量。腸道菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果表明，與基線期和對(duì)照期相比，連續(xù)口服A6 4周后，腸道中潛在致病性大腸桿菌的數(shù)量顯著下降（P＜0．01），有益菌乳酸菌、雙歧桿菌的數(shù)量則出現(xiàn)上升（P＜0．01）。試驗(yàn)表明，LC-01樣品對(duì)健康青年人群腸道菌群具有調(diào)節(jié)作用，有利于腸道健康的維持與改善。

雙歧桿菌A6；健康青年人群；腸道菌群

近年來，隨著生活節(jié)奏的加快、生活壓力的加大，亞健康人群比例逐步增大。亞健康及相關(guān)疾病成為當(dāng)今社會(huì)的重大問題。人們對(duì)健康的追求已經(jīng)從疾病的治療轉(zhuǎn)為預(yù)防，保健品及功能性食品的需求也越來越大。其中益生菌類食品及保健品得到了飛速的發(fā)展。乳制品是益生菌良好的載體，含有益生菌的發(fā)酵酸乳和發(fā)酵乳飲料在乳制品中的比重在逐年上升。

益生菌最重要的作用是調(diào)節(jié)腸道菌群、改善腸道環(huán)境。腸道菌群能夠影響人體的營養(yǎng)代謝和能量供應(yīng)。腸道菌群主要通過發(fā)酵、甲烷化硫還原和甲烷化進(jìn)行物質(zhì)和能量代謝，具有促進(jìn)食物消化吸收、生成維生素等基本營養(yǎng)作用[1]。2008 年，Li等人的研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化和人體代謝水平的變化形成響應(yīng)，并報(bào)道了腸道菌群中多個(gè)可對(duì)人體多條代謝通路有影響的成員[2]。也有研究表明，腸道菌群是人體代謝過程的直接參與者，是人體正常生命活動(dòng)不可或缺的部分[3]。其次，腸道菌群能維持人體腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。多項(xiàng)研究表明，相對(duì)普通動(dòng)物，無菌動(dòng)物的腸壁血管、膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)、肌肉層結(jié)構(gòu)、消化道酶活性、細(xì)胞因子產(chǎn)量等都出現(xiàn)不同程度的發(fā)育不良或損傷。而同等體重條件下，無菌動(dòng)物需要攝入更多能量才能維持基本生命活動(dòng)，對(duì)各類疾病的抵抗力也更差[4]。同時(shí)，正常腸道菌群的動(dòng)物可以通過競(jìng)爭(zhēng)和分泌細(xì)菌素等方式對(duì)外源致病性微生物的侵入起到屏障作用[5]。第三，腸道菌群對(duì)人體免疫功能很可能具有重要的調(diào)節(jié)作用。腸道黏膜被認(rèn)為是人體最大的免疫系統(tǒng)，腸道也是人體最大的免疫器官，在外源致病物質(zhì)入侵時(shí)，腸道菌群可以誘導(dǎo)黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生，參與多位置、多種功能的免疫相關(guān)基因的激活或者關(guān)閉，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的活化[6]。還有研究發(fā)現(xiàn)，腸道菌群具有正負(fù)向調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的潛能[7]。因此腸道菌群與正常免疫功能的維持和運(yùn)行緊密相關(guān)。近年來的研究顯示，腸道菌群結(jié)構(gòu)還與人類的衰老、肥胖、糖尿病、心血管疾病、腫瘤甚至心理疾病的發(fā)生、發(fā)展和治療有關(guān)[8,9]。雖然現(xiàn)有的研究并未完全了解腸道菌群與宿主之間錯(cuò)綜復(fù)雜的互作方式，但不可否認(rèn)的是，腸道菌群與人體健康狀況是密切相關(guān)的。

本研究通過用高靈敏度、高通量和高特異性的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)連續(xù)攝入雙歧桿菌A6四周后，受試者糞便中多種腸道微生物的數(shù)量變化情況，尋找發(fā)生顯著性變化的細(xì)菌，探究A6對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)效果。

1 材料與方法

1．1 菌株

動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種A6（Bifidobacterium animalis subsp. lactis A6）(CGMCC No.9273) ，由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)功能乳品實(shí)驗(yàn)室提供。

1．2 主要儀器設(shè)備

低溫高速離心機(jī)（Sigma 3K30），德國Satorious公司；紫外可見分光光度計(jì)（UV-2102PC），尤尼柯上海儀器有限公司；PCR儀（PTC-200），美國BIORAD公司；萬分之一電子天平（TP-214），美國丹佛儀器公司。

1．3 主要試劑與耗材

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒，電泳級(jí)SYBR Green I熒光染料（10000×）、DL2000 DNA Marker、RNAse A（10mg/mL），購自北京天根生化公司；SYBR Premix Ex Taq熒光定量PCR試劑、Premix Ex Taq PCR試劑、λDNA溶液（0.31μg/μL），購自大連TaKaRa寶生物工程公司；Tris飽和酚、酚/仿/異丙醇（25∶24∶1）、乙醇（分析純），購自藍(lán)弋公司；其余未注明試劑為國產(chǎn)生化或分析純?cè)噭?/p>

定量PCR專用96孔板，香港帝恩生物科技公司；直徑分別為0.1mm和2～3mm的玻璃珠，世紀(jì)華林公司；50mL帶勺采樣管，上海好迪公司。

1．4 培養(yǎng)基與試劑配制

MRS培養(yǎng)基、PBS、RAN later、TE、50xTAE、Tris-SDS、3mol/L乙酸鈉按試驗(yàn)規(guī)格配制。

1．5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.5.1 志愿者招募和人群試驗(yàn)情況

表1 志愿者招募標(biāo)準(zhǔn)

將招募的60名志愿者（招募標(biāo)準(zhǔn)見表1）以BMI [體重（kg）/身高2（m2）]為標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)分為人數(shù)均等的兩組（組A和組B），并保證年齡、性別比例基本一致。按照?qǐng)D1的設(shè)計(jì)進(jìn)行隨機(jī)、平行、安慰劑對(duì)照的交叉人群試驗(yàn)。第1周為導(dǎo)入期，兩組志愿者均服用安慰劑（無益生菌添加的植物蛋白飲料）；第2周至第5周為試驗(yàn)期I，組A依然服用安慰劑，組B服用A6樣品；第6、7周為洗脫期，兩組志愿者停止服用任何受試樣品；第8周至第11周為試驗(yàn)期II，組A服用A6樣品，組B服用安慰劑。服用劑量均為50mL /次，1次/d。A6活菌制劑存放于-20℃冰箱。A6樣品和安慰劑在每天上午同一時(shí)刻制備，并在4℃冰箱存放。監(jiān)督志愿者服用飲料時(shí)設(shè)立為雙盲，志愿者和服務(wù)人員均無法區(qū)分A6樣品和安慰劑。

采樣前向每名志愿者發(fā)放經(jīng)編號(hào)、稱重、滅菌的50mL采樣管各兩只（A管和B管），A管裝有7mL RNA later。在試驗(yàn)開始前（T0）和每個(gè)試驗(yàn)周期結(jié)束時(shí)（T1、T2、T3和T4）各采集一次志愿者的糞便樣品，每次每人采集兩管，4h內(nèi)交試驗(yàn)室保存。A管存放于4℃并在一周內(nèi)提取DNA，B管存放于-80℃用于其他指標(biāo)的檢測(cè)。共采集5次。

本試驗(yàn)采用臨床上常用的交叉試驗(yàn)（cross-over trial）設(shè)計(jì)，這是結(jié)合了自身比較和組間比較的一種經(jīng)典設(shè)計(jì)思路[10]，該設(shè)計(jì)屬于雙處理、雙序列、雙時(shí)期的2×2交叉試驗(yàn)。導(dǎo)入期的設(shè)置是為了使受試者更好地適應(yīng)試驗(yàn)流程、觀察有無不良反應(yīng)和排除試驗(yàn)前有關(guān)行為的干擾；洗脫期的設(shè)置是為了盡量排除前一階段的“殘留”（residual）影響。與一般的試驗(yàn)組加對(duì)照組的平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)相比，交叉實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚋行У叵龑?shí)驗(yàn)時(shí)期差異和個(gè)體差異對(duì)結(jié)果的影響，可以節(jié)省樣本量，或在樣本容量相同時(shí)增加試驗(yàn)結(jié)果的精度與效能[11]。

圖1 人群實(shí)驗(yàn)流程

1.5.2 腸道菌群檢測(cè)

表2 各PCR組所用引物序列、產(chǎn)物大小和退火溫度

1.5.2.1 糞便樣品DNA的提取

將上交的糞便采集管稱重，用漩渦振蕩器勻漿后，按試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行DNA的提取。

1.5.2.2 特異性引物和定量PCR條件的確立

試驗(yàn)中涉及的腸道微生物組見表2的“PCR組”一欄。根據(jù)參考文獻(xiàn)查找對(duì)應(yīng)組的特異性引物，并結(jié)合普通PCR、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、熒光定量PCR等技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，確立引物序列和定量PCR反應(yīng)條件。

PCR反應(yīng)體系見表3。

表3 熒光定量PCR反應(yīng)體系

反應(yīng)體系為20μL。隨機(jī)選擇多個(gè)已提出的糞便DNA樣品作為模板，分別將9個(gè)PCR組的特異性引物按照表2加樣完畢后，將96孔板置于專用離心機(jī)離心30s混勻并除去氣泡，小心放入Quantica熒光定量PCR儀，按照以下程序進(jìn)行定量PCR反應(yīng)：95℃預(yù)變性5 min；95℃ 15s、退火30s、72℃延伸30s，80℃～85℃5s檢測(cè)SYBR Green及ROX（校正染料）熒光信號(hào)，進(jìn)行40次循環(huán)。

為了檢測(cè)PCR產(chǎn)物特異性，在進(jìn)行定量PCR時(shí)設(shè)置從60℃逐漸升溫至95℃（每個(gè)循環(huán)0.5℃），每次循環(huán)過程末期檢測(cè)SYBR Green信號(hào)，繪制融解曲線。每個(gè)樣品重復(fù)三次。Ct值閾值線統(tǒng)一設(shè)定為第3～8個(gè)循環(huán)熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。將得到的終產(chǎn)物用EB染色，經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳后，用紫外凝膠成像儀對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步檢驗(yàn)。

1.5.2.3 標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的獲得及拷貝數(shù)濃度的確定

使用確認(rèn)的特異性引物對(duì)糞便樣品DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，將產(chǎn)物上樣進(jìn)行2%的瓊脂糖凝膠電泳，用無菌手術(shù)刀將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下，放入干凈的2mL離心管中，用潔凈的移液器吸頭小心地將凝膠搗碎，用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒進(jìn)行膠回收，即可獲得對(duì)應(yīng)PCR組的標(biāo)準(zhǔn)DNA模板。

獲得標(biāo)準(zhǔn)DNA模板后，使用SYBR Green I熒光染料，以λDNA為標(biāo)準(zhǔn)品，于熒光儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的濃度，再根據(jù)其大小（堿基數(shù)），計(jì)算對(duì)應(yīng)的拷貝數(shù)。

SYBR Green I工作液的配置：10mL TE緩沖液中加入2μL 10000× SYBR Green I熒光染料，室溫避光保存，24h內(nèi)使用完畢。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定：將Green模塊（激發(fā)波長(zhǎng)495-525nm）安裝在Modulus 9200熒光儀中。將λDNA溶液以TE緩沖液進(jìn)行梯度稀釋，分別制成3.875ng/mL、7.75ng/mL、15.5ng/mL、31ng/mL、77.5ng/mL、155ng/mL、310 ng/mL和775ng/mL的稀釋度標(biāo)品，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行。依次取50μL不同稀釋度的標(biāo)品于熒光比色皿中，加入50μL SYBR Green I工作液，移液器混勻，立即測(cè)定熒光值。用TE緩沖液代替標(biāo)品液作為空白。測(cè)定結(jié)束后，以λDNA終濃度為橫坐標(biāo)，熒光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)DNA模板拷貝數(shù)的測(cè)定：將各標(biāo)準(zhǔn)PCR組的標(biāo)準(zhǔn)DNA模板用TE緩沖液稀釋至合適濃度，測(cè)定其熒光值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算DNA的質(zhì)量濃度。根據(jù)1μg 1000 bp 雙鏈DNA = 1.52 pmol = 9.1 × 1011拷貝數(shù)[18]以及標(biāo)準(zhǔn)DNA大小，計(jì)算出每個(gè)PCR組的標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的拷貝數(shù)濃度，即對(duì)應(yīng)菌的相對(duì)數(shù)量。

1.5.2.4 糞便樣品中腸道菌群數(shù)量的測(cè)定和分析

分別以不同的特異性引物，將志愿者的糞便DNA樣品和標(biāo)準(zhǔn)DNA模板，用熒光定量PCR儀同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。以標(biāo)準(zhǔn)DNA模版拷貝數(shù)濃度的log值和Ct值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性方程，同時(shí)計(jì)算擴(kuò)增效率。根據(jù)糞便DNA樣品的Ct值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得出對(duì)應(yīng)菌的拷貝數(shù)濃度。

1.5.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Office Excel 2007軟件計(jì)算每克糞便樣品中各細(xì)菌組和總菌的拷貝數(shù)，同時(shí)計(jì)算不同志愿者組的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。利用SPSS17.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Kolmogorov-Smirnow test對(duì)每組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，用重復(fù)測(cè)量方差分析法比較安慰劑和LC-01干預(yù)對(duì)受試者腸道菌群的影響，用t檢驗(yàn)比較志愿者組內(nèi)腸道菌群的變化，顯著性水平定為P＜0.05。

2 結(jié)果

2．1 志愿者招募和人群試驗(yàn)情況

于2015年3月在中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院招募志愿者共60名。 采樣人群的分組情況見表4。

表4 采樣人群分組情況

試驗(yàn)過程中先后有8名志愿者退出試驗(yàn)， 最終A組25人，B組27人。

2．2 特異性引物和定量PCR條件的確立

用9組特異性引物對(duì)糞便樣品DNA進(jìn)行定量PCR反應(yīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，定量PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖2。

圖2 9組特異性引物的PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

如圖2所示，9種引物對(duì)糞便DNA樣品PCR產(chǎn)物的電泳條帶單一、清晰；參照D2000 DNA Marker條帶，產(chǎn)物的分子量大小也和表2中所列相符，說明引物對(duì)腸道菌群相應(yīng)種屬基因組的擴(kuò)增堿基區(qū)段具有特異性，PCR條件滿足擴(kuò)增要求。

2．3 標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的獲得及拷貝數(shù)濃度的確定

SYBR Green I熒光法繪制梯度稀釋的標(biāo)品λDNA的熒光值，以λDNA濃度為橫坐標(biāo)，扣除0濃度的校準(zhǔn)熒光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示。

圖3 λDNA標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999，說明在標(biāo)準(zhǔn)液濃度范圍內(nèi)，DNA濃度和熒光值線性關(guān)系良好。

2．4 標(biāo)準(zhǔn)DNA模板定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以Ct值為縱坐標(biāo)，拷貝數(shù)濃度為橫坐標(biāo)，繪制各組標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的定量PCR反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算擴(kuò)增效率。相關(guān)情況見表5。

表5 定量PCR擴(kuò)增效率及標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)

本研究中，9個(gè)PCR組的擴(kuò)增效率在87.0%～98.9%之間，Rinttila等在對(duì)腸道菌群的研究中同樣報(bào)道過，不同PCR組引物可能會(huì)出現(xiàn)擴(kuò)增效率差異較大的情況，如其研究的菌群中Atopobium組的擴(kuò)增效率僅有78%，但并不影響定量分析[18]。本研究中，所使用各個(gè)特異性引物均在文獻(xiàn)被大量引用或有明確的特異性研究報(bào)道，且在正式定量之前，已經(jīng)在普通PCR反應(yīng)中進(jìn)行了條件優(yōu)化及特異性檢驗(yàn)，定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均在0.995以上，完全滿足對(duì)腸道菌群的定量需求。

表6 兩組受試人群糞便中菌群變化情況

采用配對(duì)t檢驗(yàn)，分別比較試驗(yàn)期I前后（T1期與T2期）、洗脫期前后（T2期和T3期）和試驗(yàn)期II前后（T3期和T4期），同一組內(nèi)受試者糞便中各細(xì)菌組的拷貝數(shù)濃度的均值。結(jié)果見表6。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，組A和組B的受試者在服用安慰劑前后（組A的T1期與T2期，組B的T3期與T4期）糞便中各細(xì)菌組的數(shù)量均未出現(xiàn)顯著性的變化（P＞0.05），而在服用A6樣品前后（組A的T3期與T4期，組B的T1期與T2期），糞便中的大腸桿菌、乳酸菌和羅斯氏腸道菌三個(gè)細(xì)菌組的數(shù)量均出現(xiàn)了顯著性的差異，說明服用A6樣品對(duì)腸道中上述三個(gè)細(xì)菌組數(shù)量的影響顯著；組A和組B的受試者糞便中雙歧桿菌的數(shù)量變化趨勢(shì)一致，組A由8.08 lgc/g升高到8.67 lgc/g，有顯著性差異；組B則由7.94 lgc/g 升高到8.13 lgc/g，說明服用A6提升腸道中雙歧桿菌的數(shù)量。

3 討論

本研究顯示，相比基線期，服用A6樣品四周后，受試者糞便中Lactobacillus和Bifid obacterium的數(shù)量顯著上升，Escherichia coli的數(shù)量則顯著下降，已有研究表明，腸道內(nèi)的Lactobacillus和Bifidobacterium對(duì)維持良好的腸道環(huán)境起著關(guān)鍵作用，而大腸桿菌等潛在致病菌比例的提高則會(huì)給宿主健康帶來潛在危害。本研究結(jié)果說明連續(xù)口服A6四周可以調(diào)節(jié)人體腸道菌群，這種調(diào)節(jié)作用對(duì)人體健康有利。

腸道菌群的平衡與變化是十分復(fù)雜的，其與益生菌和人體環(huán)境之間的互作關(guān)系尚未探明。短鏈脂肪酸和氨都是腸道菌群中的特征代謝物質(zhì)，是通過腸道菌群的代謝過程產(chǎn)生的，腸道菌群的改變對(duì)短鏈脂肪酸和胺的影響可能是腸道菌群對(duì)腸道環(huán)境改變的原因。腸道內(nèi)的短鏈脂肪酸主要來自腸道菌群對(duì)碳水化合物的發(fā)酵降解，而氨既屬于某些菌群成員對(duì)內(nèi)源性蛋白質(zhì)和尿素的降解產(chǎn)物，也可以作為氮源被大部分腸道菌群利用。腸道內(nèi)短鏈脂肪酸濃度升高引起的酸度上升，可以促進(jìn)以氨為氮源的腸道菌群對(duì)氨的利用，從而引起氨濃度降低腸道內(nèi)的Bifidobacterium 和Lactobacillus以碳水化合物作為主要的發(fā)酵底物，代謝產(chǎn)物為多種短鏈脂肪酸，主要是乳酸。腸道內(nèi)的Escherichia coli以蛋白質(zhì)類物質(zhì)作為主要的發(fā)酵底物，是人體內(nèi)的氨產(chǎn)生菌之一；而Bifidobacterium的代謝主要以氨作為氮源，可以減少腸道中的氨。本研究顯示，服用A6樣品四周后，受試者糞便中Bifidobacterium的數(shù)量有一定程度的提高，Escherichia coli的數(shù)量和氨的濃度則出現(xiàn)了顯著下降。此結(jié)果說明，腸道中Bifidobacterium 數(shù)量的上升和Escherichia coli數(shù)量的下降，可能降低腸道中氨的濃度。本研究發(fā)現(xiàn)引用A6能改變腸道菌群組成，腸道菌群對(duì)腸道環(huán)境的影響有待進(jìn)一步研究。

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Efects of Bifdobacteirum Animalis Subsp Lactis A6 on Intestinal Flora in Healthy Young Adults

GE Shao-yang1, WANG Na2, LIU Zhi-lin3, YANG Zi-biao4, WU Yong-chao3, SANG Yue3, ZHAO Liang2
(1.Postdoctoral Working Station, Beijing Resources Asia-Pacifc Feed Technology Co. Ltd. , Beijing 102600; 2.College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing Higher Institution Engineering Research Center of Animal Product, Beijing 100083;3 Beijing Heyiyuan Biotechnology Co. Ltd., Beijing 100089;4. Yunnan Huangshi Lesson Dairy Co. Ltd., Dali 671000)

One of the key beneficial functions of probiotics is to modulate the human intestinal microflora. Bifidobacteirum animalis subsp. lactis A6 has good physiological function activity. To evaluate the effect of the bacterium on young human intestinal microfora, a human administration trial was carried out. Totally 52 healthy adult (18～26 years old) volunteers were randomized equally to two groups. After a 1-week placebo-runin period, one group consumed vegetable protein drink supplemented with 1010colony forming units of A6 each day for the 4-week treatment period, then consumed placebo in the next treatment period, separated by a 2-week washout. The other group followed the reverse order. Group-specifc real-time PCR was used in analyses of fecal samples collected at the end of every period, to determine intestinal bacterial composition. Compared to baseline and placebo period, a signifcant inhibition in potentially pathogenic fecal Escherichia coli (P＜0.001) and increase in benefcial Lactobacillus, Bifidobacterium and Roseburia intestinalis (P=0.006; 0.098; 0.010, respectively) were observed after consumption of A6. The results indicated a modulation efect of A6 on intestinal microfora of young adults, suggesting a benefcial efect on bowel health.

Bifdobacterium animalis subsp. lactis A6; Healthy young people; Intestinal fora

TS252.1

A

1004-4264（2017）01-0052-07

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.01.014

第二屆“牛人”攝影大賽作品 《美麗園區(qū)》——謝井林 首農(nóng)畜牧

2016-12-10

云南省科技計(jì)劃生物重大專項(xiàng)（奶業(yè)專項(xiàng)）（2014ZA001）；北京市教育委員會(huì)中央在京高校重大成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目“益生菌生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)科技成果轉(zhuǎn)化”項(xiàng)目。

葛紹陽（1986-），男，漢族，博士后。

趙亮（1983-），男，漢族，副教授，研究方向?yàn)橐嫔茖W(xué)。