胡 蕾，申 婷

(金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 金華 321017)

雜交蘭的組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)

胡 蕾，申 婷

(金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 金華 321017)

以雜交蘭的莖尖為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，探討雜交蘭的原球莖的誘導(dǎo)、增殖、分化、生根培養(yǎng)，以及練苗移栽等一系列技術(shù)措施。結(jié)果表明，原球莖誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為Hyponex No.1(花寶1號)+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球莖增殖的適宜培養(yǎng)基為花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球莖分化的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；生根培養(yǎng)基以1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA1.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1為佳，移栽基質(zhì)選用泥炭土∶珍珠巖3∶1成活率高。

雜交蘭； 組織培養(yǎng)； 原球莖

雜交蘭是國蘭與大花蕙蘭的雜交品種，既有國蘭的幽香與雅致，又有大花蕙蘭的花大、色艷，且體積較小，生育期只有2年，深受消費者喜愛，市場前景廣闊。但雜交蘭種子在自然條件下繁殖困難，而傳統(tǒng)的分株繁殖的繁殖系數(shù)低，難以滿足市場需要，故通過組織培養(yǎng)的方法來達(dá)到快繁的目的。本文對雜交蘭的組培與快繁進(jìn)行研究，為雜交蘭的規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

取雜交蘭品種黃金小神童的莖尖為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體預(yù)處理

從親本植株上選取長勢好、葉片尚未展開的新生側(cè)芽，取中上部6～13 cm長的側(cè)芽，切下新芽，除去肉質(zhì)根與葉，削去芽尖。流水沖洗30 min后，用1%中性洗滌劑浸泡5 min，再在流水下沖洗30 min后，用吸水紙吸干水分，置超凈工作臺上。無菌條件下對外植體進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。浸入75%酒精中30 s→無菌水沖洗2次→84消毒液浸泡15 min→無菌水沖洗2次→截取3～6 cm莖尖→84消毒液浸泡8 min→無菌水沖洗5～6次→無菌濾紙吸干水分→切取2～3 mm的莖尖，分別接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基上，置于室溫(25±1)℃、光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx的培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 基本培養(yǎng)基

雜交蘭組培主要以MS、1/2MS、Hyponex No.1(花寶1號)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加活性炭0.3%，蔗糖3%，瓊脂0.8%，香蕉泥2%，土豆泥1%，pH值5.5～5.8。不同培養(yǎng)階段附加不同種類和濃度的植物激素，然后配置分裝，在121 ℃條件下滅菌30 min。

1.2.3 雜交蘭原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基

采用4種雜交蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)基：(1)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(2)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(3)花寶1號+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(4)花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1。接種后每10 d換1次培養(yǎng)基，接種20 d左右發(fā)現(xiàn)有大量的原球莖產(chǎn)生。30 d后統(tǒng)計原球莖數(shù)目，以及原球莖的生長狀況。

1.2.4 雜交蘭原球莖增殖培養(yǎng)基

采用9種雜交蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)基對雜交蘭原球莖增殖培養(yǎng)：(5)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(6)1/2MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(7)1/2MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(8)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(9)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(10)MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(11)花寶1號+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(12)花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(13)花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1。將初代培養(yǎng)的原球莖接種到新的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，半個月繼代1次，連續(xù)繼代3次，統(tǒng)計增殖數(shù)。

1.2.5 雜交蘭原球莖分化培養(yǎng)基

采用9種雜交蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)基對原球莖分化進(jìn)行研究：(14)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(15)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(16)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(17)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(18)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(19)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(20)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(21)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(22)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1。

1.2.6 叢生芽生根培養(yǎng)基

采用4種雜交蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)基對叢生芽生根進(jìn)行研究：(23)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(24)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(25)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1；(26)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1。將分化培養(yǎng)基中的小芽接種到4種生根培養(yǎng)基中，1個月后統(tǒng)計生根率與生長狀態(tài)。

1.3 煉苗移栽

當(dāng)小苗長到5 cm左右時，打開瓶蓋，練苗3 d，取出小苗，洗凈根部的培養(yǎng)基后，將根部浸入0.2%多菌靈液3 min，然后取出晾干后定植于苔鮮、泥炭土∶珍珠巖3∶1的育苗盤中，放置陰涼通風(fēng)處，于溫度25 ℃、濕度80%左右溫室中培養(yǎng)。苔鮮提前用0.2%多菌靈液消毒。

2 結(jié)果與分析

2.1 原球莖誘導(dǎo)

從表1可以看出，外植體在4號培養(yǎng)基分化的原球莖最多，誘導(dǎo)率可達(dá)120.0%，而且在生長過程中基本無失綠和死亡現(xiàn)象。1號培養(yǎng)基最差，誘導(dǎo)率只有43.3%。因此，4號培養(yǎng)基有利于莖尖的誘導(dǎo)。

表1 不同培養(yǎng)基對雜交蘭原球莖誘導(dǎo)的影響

2.2 原球莖增殖

不同的培養(yǎng)基在相同的時間內(nèi)，雜交蘭原球莖都有增殖，但增殖倍數(shù)不同。從表2中可以看出，13號是雜交蘭原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基。

表2 不同培養(yǎng)基對雜交蘭原球莖分化的影響

2.3 原球莖分化

將雜交蘭原球莖接種到分化培養(yǎng)基中，可見原球莖增大變綠，15 d后各培養(yǎng)基均有叢生芽出現(xiàn)，以后小芽逐漸伸長，數(shù)量逐漸增多。培養(yǎng)30 d后，分別統(tǒng)計不定芽數(shù)量。從表3可以看出，原球莖在22號培養(yǎng)基中分化效果最佳。

表3 不同培養(yǎng)基對雜交蘭原球莖增殖的影響

2.4 叢生芽生根

從表4可以看出，再生苗在4種培養(yǎng)基中生根均達(dá)到89%以上，但通過不同培養(yǎng)基比較，發(fā)現(xiàn)26號培養(yǎng)基最佳，生根快而且苗長勢好。

表4 不同培養(yǎng)基對叢生芽生根的影響

2.5 煉苗移栽

緩苗后(2周左右)用花寶系列肥結(jié)合澆水進(jìn)行葉面施肥，在泥炭土∶珍珠巖3∶1的基質(zhì)上1個月成活率可達(dá)90%以上，且長勢良好。

3 小結(jié)與討論

雜交蘭莖尖在培養(yǎng)基花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1上可誘導(dǎo)出原球莖，誘導(dǎo)率可達(dá)120%；原球莖增殖培養(yǎng)基為花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1時增殖倍數(shù)最高，可增殖4.3倍；原球莖分化培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1時可分化形成大量的叢生芽；促進(jìn)苗生長生根的最佳培養(yǎng)基是1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1，生根率達(dá)到100%；小苗在泥炭土∶珍珠巖3∶1的基質(zhì)上生長良好，成活率達(dá)90%以上。

通過對雜交蘭組織培養(yǎng)技術(shù)的研究，發(fā)現(xiàn)適量的加入少量活性炭和多次轉(zhuǎn)接可解決外植體的褐變問題。另外，原球莖切塊細(xì)小、接種稀疏不利于原球莖的生長，切塊大而密集的繁殖快，且長勢好。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

2016-09-14

胡 蕾，高級實驗師，從事農(nóng)學(xué)工作，E-mail：550663034@qq.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170223

S682.31

B

0528-9017(2017)02-0259-02

文獻(xiàn)著錄格式：胡蕾，申婷. 雜交蘭的組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(2)：259-260，264.