鄧?yán)?+宋丹++方正春

摘要：目的 分析研究實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）對(duì)解脲支原體、沙眼衣原體的檢測(cè)結(jié)果，以了解本地區(qū)在不同性別及年齡段的感染情況。方法 選取1000例疑似非淋菌性尿道炎患者，均采取FQ-PCR進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析不同男女性別及年齡段的陽(yáng)性檢出率。結(jié)果 UU和Ct的檢出率為44.50%，其中在女性患者中的檢出率（55.31%）要明顯高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的檢出率（37.61%）顯著高于男性（18.25%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性別間檢出率無(wú)明顯差異（P>0.05）。18～40歲患者的陽(yáng)性率（81.35%）顯著高于年齡大于40歲患者（18.65%），差異顯著（P<0.05）。結(jié)論 FQ-PCR對(duì)UU、Ct的檢出率較高，本地區(qū)以女性患者及18～40歲年齡段的檢出率較高，應(yīng)加大對(duì)上述人群的監(jiān)管力度。

關(guān)鍵詞：FQ-PCR；解脲支原體；沙眼衣原體

A Retrospective Study of FQ-PCR in Danjiangkou Area of Ureaplasma Urealyticum and Chlamydia Trachomatis in Five Years

DENG Li1，SONG Dan1，F(xiàn)ANG Zheng-chun2

（1.Department of Clinical Laboratory，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China；2.Department of Anesthesiology，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China）

Abstract：Objective Analysis of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR）of Ureaplasma urealyticum and Chlamydia trachomatis detection results， in order to understand the region in different gender and age of infection. Methods A total of 1000 cases of suspected patients with nongonococcal urethritis， FQ-PCR detection. Statistical analysis of different gender and age of the positive rate. Results The detection rate of UU and Ct was 44.50%， among which the detection rate （55.31%） in female patients was significantly higher than that in males（35.58%）（P<0.05）.The detection rate of UU（37.61%）in female patients was significantly higher than that in male （18.25%）， and the difference was statistically significant（P<0.05），while there was no significant difference between UU+Ct and Ct （P>0.05）. The positive rate （81.35%） of 18-40 years old patients was significantly higher than that in patients older than 40 years （18.65%）， and the difference was significant （P<0.05）. Conclusion The detection rate of UU in FQ-PCR and Ct is higher， the detection rate of female patients in the local area and the age of 18～40 years old is higher， and the supervision of these people should be increased.

Key words：FQ-PCR；Ureaplasma urealyticum；Chlamydia trachomatis

在臨床中，非淋菌性尿道炎（nongonococcalurethritis，NGU）屬于常見(jiàn)性傳播疾病[1-2]。該病在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家、地區(qū)的發(fā)病率居首位，且自2001年以來(lái)我國(guó)報(bào)道NGU發(fā)病率已經(jīng)超過(guò)淋病，在全國(guó)監(jiān)測(cè)8種性傳播疾病中居首位。NGU及并發(fā)癥，如睪丸炎、前列腺炎、盆腔炎、不孕不育等對(duì)人類(lèi)的健康構(gòu)成極大的危害。因此需要對(duì)該癥進(jìn)行及時(shí)診斷，以免耽誤治療[3-5]。而據(jù)統(tǒng)計(jì)在NGU中40%～70%的病例由解脲支原體（UU）和沙眼衣原體（Ct）引起。以前由于檢測(cè)手段的限制，對(duì)UU和Ct檢出率較低，無(wú)法及時(shí)治療。近年來(lái)隨著醫(yī)學(xué)的不斷進(jìn)步，檢測(cè)手段也隨之進(jìn)步，尤其是FQ-PCR技術(shù)的應(yīng)用使得UU和Ct檢出率不斷增高，已成為臨床檢測(cè)UU和Ct的首先方法。為了解本地區(qū)5年來(lái)NGU的發(fā)病特點(diǎn)，本次研究選取FQ-PCR檢測(cè)方法對(duì)我院在2009年1月～2014年12月收治的疑似NGU進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院在2009年1月～2014年12月收治疑似NGU患者1000例，病程為1 w～1年，男性主要表現(xiàn)為尿道口出現(xiàn)紅腫，分泌物較多，且尿頻；女性主要表現(xiàn)為陰道分泌增物多、瘙癢，且少數(shù)伴尿頻及下腹痛等。1000例患者中，男548例、女452例，年齡18～56歲，平均（38.89±3.45）歲。

1.2方法 標(biāo)本采集：對(duì)于女性患者采取陰道窺器進(jìn)行擴(kuò)張陰道，選取無(wú)菌棉拭子將宮頸口過(guò)多分泌物涂去，用無(wú)菌拭子插入至宮頸管內(nèi)的1 cm處，將其停留15 s左右并旋轉(zhuǎn)3～5周，采集宮頸的分泌物，然后把棉拭子插入至試管中（盛有1ml無(wú)菌的生理鹽水）并將其洗下。對(duì)于男性患者將棉拭子插入至尿道口約2～4 cm，轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)次拭子后立即將其放在試管中（盛有1 ml無(wú)菌的生理鹽水）。將棉拭子進(jìn)行充分的洗滌，貼著壁將棉拭子中水分?jǐn)D出，待混勻后，轉(zhuǎn)入至離心管內(nèi)以12000 r/min的速度離心10 min，棄上清，重復(fù)一次。加入50μl核酸提取液，在100℃下干浴10 min，再以12000 r/min的速度離心5 min，取上清液2 μl進(jìn)行PCR反應(yīng)。應(yīng)用PCR檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)UU、Ct，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進(jìn)行處理，計(jì)量數(shù)據(jù)用平均值±方差（x±s）表示，t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1男女患者病原體檢出率比較 病原體檢出率為44.50%，女性患者的檢出率（55.31%）要明顯高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的檢出率（37.61%）顯著高于男性（18.25%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性別間檢出率無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2不同年齡層次病原體檢出率比較 18～40歲患者的陽(yáng)性率（81.35%）顯著高于年齡大于40歲患者（18.65%），差異顯著（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

NGU是一類(lèi)經(jīng)過(guò)性傳播泌尿生殖系統(tǒng)的炎癥，近年來(lái)，據(jù)報(bào)道在西方國(guó)家和我國(guó)部分省市發(fā)病率均已經(jīng)超過(guò)傳統(tǒng)淋病和梅毒，居于各類(lèi)性傳播疾病的首位，NGU發(fā)病比較緩慢并且無(wú)明顯臨床癥狀，往往因隱匿性的感染而延誤了治療，因此易導(dǎo)致嚴(yán)重并發(fā)癥[6-7]。

UU是常見(jiàn)的且被公認(rèn)的生殖泌尿道感染致病病原體，其大小介于病毒和細(xì)菌之間，無(wú)細(xì)胞壁，呈現(xiàn)多形性，且可在無(wú)活動(dòng)的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行繁殖。Ct寄生于真核細(xì)胞內(nèi)，具有獨(dú)特的發(fā)育周期，早期Ct感染無(wú)特殊的臨床表現(xiàn)而容易漏誤診[8-9]。CT和UU均寄生于泌尿生殖道，能夠通過(guò)性進(jìn)行傳播，同時(shí)也可以通過(guò)孕婦血液及生殖道等途徑傳播給胎兒和新生兒，可引前列腺炎、不孕癥、早產(chǎn)等多種疾病[10]。

因此早期的診斷和治療及其重要，但是以前由于受到檢驗(yàn)技術(shù)限制，未引起人們重視。細(xì)胞培養(yǎng)法雖然一直作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，特異性和敏感性均較高，但對(duì)條件和技術(shù)要求高，且復(fù)雜費(fèi)時(shí)，很難在臨床實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展。直接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)CT抗原，該法快速、簡(jiǎn)便、特異性好，費(fèi)用低，重復(fù)性好，但敏感性不佳。PCR被廣泛應(yīng)用在核酸的分析中，PCR法直接檢測(cè)病原體基因是最直接的感染證據(jù)，并且簡(jiǎn)單快速，可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)得到明確的結(jié)果。PCR法的高敏感性，可以把目的基因片段在短短的數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至數(shù)萬(wàn)倍以上，但是普通的PCR技術(shù)具有擴(kuò)增產(chǎn)物容易污染、無(wú)法定量以及致癌物危害等缺點(diǎn)，近年來(lái)經(jīng)過(guò)研究出現(xiàn)了新的檢測(cè)方法FQ-PCR，采用熒光技術(shù)及閉管檢測(cè)，避免了交叉污染，且對(duì)UU、Ct的檢測(cè)有高度特異性及敏感性，完全克服上述缺點(diǎn)。目前實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)成熟，因此不易造成漏診，這對(duì)患者感染的極早期或潛伏期或無(wú)癥狀帶菌者的診斷有相當(dāng)重要的意義，是值得推薦的檢驗(yàn)方法[11-12]。

本次研究顯示病原體的檢出陽(yáng)性率為44.50%，檢出率較高，與報(bào)道相似。而女性的檢出率為53.10%，顯著高于男性（35.58%），差異顯著。其中Ct、UU+Ct的陽(yáng)性檢出率在不同性別之間無(wú)顯著性差異，而UU在女性的檢出率（37.61%）要顯著高于男性檢出率（18.25%），差異顯著，這可能和男女泌尿生殖道不同密切相關(guān)，相對(duì)而言女性的泌尿生殖道更適于UU的生長(zhǎng)而男性生殖道在進(jìn)行排尿時(shí)有一定的沖洗作用，從而排掉了部分的病原體。

據(jù)報(bào)道從該病的年齡構(gòu)成分布結(jié)果顯示約80%的感染者年齡小于40歲。一方面與性接觸史或者配偶感染史有關(guān)系；一方面與該年齡段處于生育活動(dòng)高峰年齡有關(guān)；一方面與此年齡段的女性性行為比較活躍，喜歡穿緊身衣褲或者在非經(jīng)期使用護(hù)墊引起會(huì)陰部潮濕而導(dǎo)致病原菌繁殖等一系列生活習(xí)慣相關(guān)；另一方面與該年齡段的男性工作、社交頻繁、生活壓力較大、吸煙喝酒等一系列不良社會(huì)行為密切有關(guān)。本次研究顯示18～40歲的感染率為81.35%，略高于文獻(xiàn)報(bào)道，這說(shuō)明本地區(qū)要對(duì)青壯年尤其是青年人加強(qiáng)性相關(guān)道德教育以及性傳播疾病的相關(guān)科普知識(shí)，并對(duì)高危人群加強(qiáng)監(jiān)測(cè)力度。

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編輯/安樺