李昌秀,楊達(dá)榮,徐紅梅,楊 柳,劉俊玲，吳時軍,羅治彬

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

·經(jīng)驗交流· doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.030

P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盤絨毛水腫性病變中的表達(dá)及其意義*

李昌秀1,楊達(dá)榮1,徐紅梅1,楊 柳1,劉俊玲1，吳時軍1,羅治彬2

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

[摘要] 目的 研究P57、P53、Her-2及Ki-67在流產(chǎn)絨毛水腫(HA)、部分性葡萄胎(PHM)及完全性葡萄胎(CHM)中的表達(dá)，探討其在水泡狀胎塊發(fā)生、發(fā)展中的作用，為葡萄胎的早期診斷及鑒別診斷提供理論依據(jù)。方法 采用免疫組織化學(xué)(EnVision法)分別檢測P57、P53、Her-2及Ki-67在30例正常絨毛(NP)、30例HA、30例PHM及30例CHM中的表達(dá)。結(jié)果 P57在NP組、HA組、PHM組中的陽性表達(dá)率分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(dá)(P<0.01)；P53在PHM組(53.33%)中表達(dá)明顯高于在NP 組(16.66%)和HA組(20.00%)中的表達(dá)，而明顯低于在CHM組(80.00%)中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Her-2在CHM組中的表達(dá)為36.66%，明顯高于在NP組(10.00)和HA組(13.33%)中的表達(dá)(P<0.05),但是Her-2在PHM組(23.33%)與CHM組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；PHM組和CHM組的Ki-67增殖指數(shù)分別為(48.03±18.77)%和(87.79±10.50)%，均高于HA組[(33.43±17.17)%]及NP組[(34.46±16.15)%]，P<0.01，而CHM組的Ki-67顯著高于PHM組(P<0.01)。結(jié)論 P57缺失而P53及Ki-67高表達(dá)可診斷為CHM；P57陽性而P53及Ki-67增殖指數(shù)均缺失或弱表達(dá)可診斷為HA。其他情況下均需要進(jìn)一步做分子基因分型檢測；Her-2的表達(dá)對HA、PHM及CHM的鑒別意義不大。

水泡狀胎塊；流產(chǎn)水腫絨毛；P53；P57；Ki-67；Her-2

胎盤絨毛水腫性病變是一組以外觀呈透亮水泡狀的胎盤絨毛病變，臨床工作中常見包括完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole,CHM)、部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole,PHM) 及流產(chǎn)絨毛水腫 (hydropic abortuses,HA)。肉眼標(biāo)本、組織形態(tài)學(xué)及臨床表現(xiàn)的不同常用于胎盤絨毛水腫性病變的診斷及鑒別，但是在病變早期，常常因肉眼標(biāo)本、鏡下組織及臨床特征不典型而難以分型，甚至與HA鑒別困難。近年來有文獻(xiàn)報道了P57、P53和Ki-67在水泡狀胎塊分型與HA鑒別中的價值，但報道結(jié)果并不完全一致[1-3]。而且Her-2在不同類型的絨毛水腫性病變中的表達(dá)及意義研究甚少。本研究通過免疫組織化學(xué)方法觀察P57、P53、Her-2和Ki-67在不同的絨毛水腫性病變中的表達(dá)情況，探討聯(lián)合4個指標(biāo)對絨毛水腫性病變鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010-2015年合川區(qū)人民醫(yī)院病理科經(jīng)病理高級醫(yī)師診斷為HA、CHM和PHM的患者各30例作為研究對象。選取正常的絨毛組織(NP)30例作對照。所有存檔病例均經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋。

1.2 方法 P57、P53、Her-2及Ki-67單克隆抗體、EnVision試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液均購自福建邁新生物工程有限公司。所有組織經(jīng)4 μm連續(xù)石蠟切片，嚴(yán)格按照EnVision檢測試劑盒說明書的步驟操作。

1.3 結(jié)果的判定 參照許良中等[3]的資料，綜合考慮切片中陽性細(xì)胞占所觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比和陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度兩項指標(biāo)，半定量判斷結(jié)果。P57、P53的觀察，先在低倍鏡下選取最強(qiáng)著色區(qū)，然后選10個高倍鏡視野(×400)，分別記數(shù)100個細(xì)胞，其顏色深淺評分：細(xì)胞核上無棕黃色顆粒為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。染色細(xì)胞所占百分比打分：無陽性細(xì)胞為0分、1%～10%為1分、11%～50%為2分、≥51%為3分。兩項乘積得分大于或等于3分定為陽性。Her-2陽性判斷方法：根據(jù)細(xì)胞膜有無顯色或強(qiáng)弱。0：完全未著色或小于10%細(xì)胞膜著色；(+)：≥10%呈微弱、不完整細(xì)胞膜著色；(++)：>10%呈弱-中度完整細(xì)胞膜著色；(+++)：>10%呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜著色?！?”為陰性，(+～+++)為陽性[4]。Ki-67只計數(shù)絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞，Ki-67增殖指數(shù)=Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)/計數(shù)細(xì)胞總數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 P57在各組中的表達(dá) P57呈細(xì)胞核陽性表達(dá)，表達(dá)部位為滋養(yǎng)細(xì)胞、絨毛間質(zhì)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞，見圖1、2。P57在NP、HA和PHM組分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(dá)(χ2=52.26、52.26、48.65，P<0.01)。P57在PHM組中的表達(dá)低于HA組和NP組中的表達(dá)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.00、0.00，P>0.05)，見表1。

2.2 P53在各組中的表達(dá) P53陽性定位于細(xì)胞核，見圖3、4。P53在CHM組中表達(dá)為80.00%，明顯高于NP組(16.66%)、HA組(20.00%)和PHM組(53.33%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.09、21.40、4.80，P<0.05)。PHM組明顯高于HA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.71，P<0.01)。而HA組和NP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.11，P>0.05)。見表1。

圖1 P57在PHM組織中的表達(dá)(SP×400)

圖2 P57在CHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖3 P53在PHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖4 P53在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

2.3 Her-2在各組中的表達(dá) Her-2陽性定位于絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞膜，為棕黃色或淺黃色顆粒，見圖5、6。Her-2在CHM組中的表達(dá)為36.66%，明顯高于NP組(10.00)和HA組(13.33%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.96、4.35,P<0.05)。而PHM組(23.33%)與CHM、HA組及NP組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.26、1.00、1.92，P>0.05)，見表1。

圖5 Her-2在PHM中的表達(dá)(SP×200)

圖6 Her-2在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

圖7 Ki-67在PHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖8 Ki-67在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

2.4 Ki-67在各組中的表達(dá) Ki-67陽性定位于細(xì)胞核，見圖7、8。在PHM組和CHM組Ki-67增殖指數(shù)分別與HA組及NP組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.32、3.34、14.38、15.16，P<0.01)，而CHM組也明顯高于PHM組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.81，P<0.01)，見表2。

表1 P57、P53及Her-2在各組標(biāo)本組織中的表達(dá)

表2 Ki-67在各組標(biāo)本組織中的表達(dá)

3 討 論

HA、PHM、CHM三者有不同的妊娠結(jié)局和預(yù)后，準(zhǔn)確的診斷直接影響患者的治療方案選擇和預(yù)后判斷。而三者外觀均是呈葡萄狀的水泡樣組織，特別是病變早期，在組織學(xué)上，滋養(yǎng)細(xì)胞增生及HA均不夠典型時，如果單純從形態(tài)學(xué)診斷就容易造成誤診或漏診，而影響患者的治療和預(yù)后。所以，尋找一種簡單而可靠的診斷指標(biāo)，對于胎盤絨毛水腫性病變的鑒別診斷和分型都非常重要。

P57定位于染色體11p15.5，是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子和腫瘤抑制基因，抑制細(xì)胞增殖和腫瘤形成。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對有關(guān)P57基因在水泡狀胎塊中表達(dá)及鑒別診斷意義的研究越來越多，發(fā)現(xiàn)P57基因又是親源印跡基因，系母源性等位基因表達(dá)，這對鑒別PHM和CHM起到非常重要的作用，并提出P57可以用于形態(tài)學(xué)上難以客觀區(qū)別的CHM和PHM的鑒別[5]。由于CHM是雄性二倍體，PHM是雌雄異型三倍體，流產(chǎn)水腫是雙親二倍體，所以,P57表達(dá)缺失的CHM容易從P57陽性的PHM和HA中別鑒別出來。陳云新等[6]的研究顯示，P57陽性率在PHM為100%，CHM不表達(dá)。而本研究發(fā)現(xiàn)，P57在CHM組中的陽性率為3.33%，PHM組為93.33%，HA組為96.66%，CHM組30例患者中有1例P57陽性，這與McConnell等[7]的研究一致。McConnell等[7]同時用P57免疫組織化學(xué)和分子基因型檢測技術(shù)分析水泡狀胎塊標(biāo)本時，發(fā)現(xiàn)1例形態(tài)典型的CHM彌漫表達(dá)P57。而且通過短串聯(lián)重復(fù)序列的分子基因型檢測和單個核苷酸多態(tài)性陣列的全基因組拷貝數(shù)分析證實了該例的確是雄性二倍體，卻保留有母系6號和11號染色體的拷貝。正是由于母系6號和11號染色體的存在，所以異常表達(dá)P57。本研究的P57陽性病例可能是保留著母系6號和11號染色體的CHM，也有可能是P57假陽性的CHM，需進(jìn)一步做分子基因型檢測以明確診斷。

P53基因是抑癌基因，具有調(diào)控細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞衰老和凋亡的作用。突變型P53在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)，而且與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。而Ki-67是細(xì)胞增殖的一個重要生物學(xué)指標(biāo),其陽性表達(dá)率常作為評價腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的重要指標(biāo)。近年來，P53和Ki-67也常常用于鑒別胎盤絨毛水腫性病變中[8-9]。李軍紅等[10]研究發(fā)現(xiàn)P53的表達(dá)及Ki-67在葡萄胎(HM)組中的表達(dá)高于HA組，對鑒別PHM和HA有重要價值。本研究采用免疫組織化學(xué)也發(fā)現(xiàn)突變型P53在CHM組(80.00%)和PHM組(53.33%)中的表達(dá)均高于HA組(20.00%)和NP組(16.66%)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這提示CHM和PHM中P53蛋白的高表達(dá)與抑癌基因P53的突變有關(guān)， P53蛋白的檢測有助于水泡狀胎塊與HA的鑒別。同時，筆者也發(fā)現(xiàn)PHM組(48.03±18.77)%和CHM組(87.79±10.50)%的Ki-67增殖指數(shù)也都高于HA組(33.43±17.17)%及NP組(34.46±16.15)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。該結(jié)果與Khooei等[11]研究結(jié)果一致。但是Khooei等[11]進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)，雖然Ki-67在HM和HA中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但是Ki-67仍不能單獨(dú)用于鑒別HM與HA，因為Ki-67在各組的表達(dá)陽性程度上存在著相當(dāng)大的重疊。所以，筆者認(rèn)為聯(lián)合P53和Ki-67增殖指數(shù)可較為準(zhǔn)確地反映HM和HA的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞增殖活性，可作為評估病變是HM還是HA的重要參考指標(biāo)。

Her-2定位于17q12,是表皮生長因子受體家族的成員之一，在很多惡性腫瘤組織中表達(dá)并用作監(jiān)測預(yù)后的標(biāo)記物。Fulop等[12]對16例PHM、25例CHM和11例HA進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),Her-2表達(dá)于CHM的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞，且明顯強(qiáng)于PHM和HA，這對HM的分型診斷及惡變預(yù)后起到非常重要的作用。同樣，Yazaki-Sun等[13]對已經(jīng)發(fā)展為胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的35例HM和自然愈合的32例HM行Her-2和P53的檢測，發(fā)現(xiàn)兩者在惡變的HM中強(qiáng)表達(dá)，提示Her-2和P53對HM惡變及預(yù)后判斷起著非常重要的作用。但Menczer等[14]用免疫組織化學(xué)染色對23例CHM和10例PHM進(jìn)行Her-2檢測，發(fā)現(xiàn)6例陽性(CHM和PHM各3例)，而且Her-2在后來進(jìn)展為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的HM中的表達(dá)強(qiáng)于未進(jìn)展為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的HM中的表達(dá)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而本研究結(jié)果顯示，Her-2在CHM組中的表達(dá)高于NP和HA組(P<0.05),這可能提示滋養(yǎng)細(xì)胞有增生。但Her-2在CHM組和PHM組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),這對診斷CHM組和PHM組無明顯鑒別作用。

HM和HA的早期診斷及鑒別診斷對臨床的治療及疾病的預(yù)后都非常重要。聯(lián)合檢測P57、P53及Ki-67增殖指數(shù)有助于HM的分型和HA的鑒別診斷。P57缺失而P53及Ki-67高表達(dá)可診斷為CHM。而P57陽性而P53及Ki-67均缺失或弱表達(dá)可診斷為HA。當(dāng)P57陽性而P53及Ki-67高表達(dá)時可能為PHM，但還需進(jìn)一步做分子基因型檢測，以排除母系6號和11號染色體陽性的CHM的可能。Her-2陽性對CHM和PHM的鑒別意義不大，但Her-2聯(lián)合P53和Ki-67的表達(dá)情況可以作為預(yù)測HM惡變的參考指標(biāo)。Her-2陽性可能提示HM的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞有增生，但其如何參與HM的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞增生，如何導(dǎo)致HM惡變的機(jī)制和意義還需收集大量妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的病例進(jìn)一步研究。

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重慶市衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)學(xué)科研計劃項目(20143054)。 作者簡介：李昌秀(1979-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)病理學(xué)研究。△

，E-mail:luozhibincq@126.com。

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