宗衛(wèi)峰，汪玉馨，劉 洋，王 瑤，張微峰，陸益紅

(江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 210008)

羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏實(shí)驗(yàn)研究

宗衛(wèi)峰，汪玉馨，劉 洋，王 瑤，張微峰，陸益紅*

(江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 210008)

目的 評(píng)價(jià)羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏安全性。方法 進(jìn)行了主動(dòng)全身過敏反應(yīng)試驗(yàn)、體內(nèi)過敏指標(biāo)測(cè)定與篩查及被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)試驗(yàn)的方法，考察樣品的過敏安全性。結(jié)果 我們對(duì)3個(gè)企業(yè)45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液進(jìn)行了豚鼠全身過敏反應(yīng)和被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn),均未發(fā)生過敏反應(yīng)。通過對(duì)血漿中過敏性指標(biāo)，組胺(HIS)、IgG、IgM和IgE進(jìn)行測(cè)定和比較,發(fā)現(xiàn)IgM和IgE在各組間均無明顯變化；組胺及IgG陽性組與陰性組及樣品組間均有差異。結(jié)論 建議羥乙基淀粉40氯化鈉注射液安全性評(píng)價(jià)應(yīng)包括過敏反應(yīng)，還可在羥乙基淀粉臨床應(yīng)用時(shí)進(jìn)行組胺及IgG這兩項(xiàng)過敏指標(biāo)的監(jiān)測(cè)。

羥乙基淀粉40氯化鈉注射液;過敏反應(yīng);組胺；IgG

羥乙基淀粉為羥乙基化支鏈淀粉的水解產(chǎn)物，其制劑是一種良好的血漿代用品，具有降低血液黏度、改善血流動(dòng)力學(xué)、擴(kuò)充血容量、提高組織供氧、進(jìn)而改變微循環(huán)、抑制炎癥等作用[1]。羥乙基淀粉40氯化鈉注射液作為血容量補(bǔ)充藥，有抑制血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集作用，用于改善微循環(huán)障礙，臨床用于低血容量性休克，如失血性、燒傷性及手術(shù)中休克等；少數(shù)患者使用本品可出現(xiàn)過敏現(xiàn)象，表現(xiàn)為眼瞼水腫、蕁麻疹及哮喘等。為進(jìn)一步弄清羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏反應(yīng)情況，我們進(jìn)行了主動(dòng)全身過敏和被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)研究，以期進(jìn)一步明確羥乙基淀粉40氯化鈉注射液不良反應(yīng)的真正原因，為確保安全用藥提供依據(jù)。同時(shí)，優(yōu)選過敏方法指標(biāo)，為羥乙基淀粉40氯化鈉注射液安全性研究提出合理化建議。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)豚鼠，體重280～310 g，來源于無錫市惠山江南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)[SCXK(蘇)2015-0004]。實(shí)驗(yàn)環(huán)境室溫度20～24 ℃，相對(duì)濕度為45%～60%，實(shí)驗(yàn)于江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[SYXK(蘇)2012-0043]。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 試劑與儀器

41批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液(企業(yè)A、B)、4批高滲氯化鈉羥乙基淀粉40注射液(企業(yè)C)、2批羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液(企業(yè)D)。氯化鈉注射液(江蘇四環(huán)生物制藥有限公司，批號(hào)：15070410，規(guī)格：100 mL:0.9 g)；新生牛血清(浙江天杭生物科技有限公司， 批號(hào)：141011)。

豚鼠組胺ELISA 試劑盒(96T 批號(hào)：BPE40015)；豚鼠IgE ELISA 試劑盒(96T 批號(hào)：BPE40020)；豚鼠IgG ELISA 試劑盒(96T 批號(hào)：BPE40003)；豚鼠IgM 試劑盒(96T 批號(hào)BPE40022)，均購(gòu)自朗頓生物公司。

L-550離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Synergy H1,BIOTEK公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 豚鼠全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)

將豚鼠按體重隨機(jī)分組(每組6只)，分別為：氯化鈉注射液組、10%小牛血清組、羥乙基淀粉40注射液組、羥乙基淀粉130注射液組。取豚鼠6只，隔日給藥一次，給予每只動(dòng)物0.5 mL相應(yīng)的供試藥液,連續(xù)3次，然后分別于末次給藥后的14 d和21 d,給予每只動(dòng)物前肢靜脈注射各組1.0 mL相應(yīng)的供試藥液激發(fā)注射。觀察各組動(dòng)物在激發(fā)注射后15 min內(nèi)是否出現(xiàn)過敏反應(yīng)(有無豎毛、發(fā)抖、干嘔、連續(xù)噴嚏3 聲、連咳3 聲、紫癜、呼吸困難、二便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休克、死亡等過敏反應(yīng)癥狀)。21 d給藥后15 min 取血漿檢測(cè)組胺、總IgE、IgG、IgM 水平[2]。

1.3.2 被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)[3]

1.3.2.1 劑量組別

設(shè)陰性、陽性對(duì)照組、受試藥組。陰性對(duì)照組用氯化鈉注射液，陽性對(duì)照組用新生牛血清10倍稀釋液。

1.3.2.2 每組動(dòng)物數(shù)

普通級(jí)豚鼠，雌雄各半。致敏每組 6只，激發(fā)每組 6只 , 均為雌雄各半。

1.3.2.3 致敏方法及抗血清的制備

取上述豚鼠，隨機(jī)分組，每組6只，雌雄各半，分別為受試藥組、小牛血清組和氯化鈉注射液組，按無菌操作方法，隔日腹腔注射上述三種藥品致敏，0.5 mL/只，共計(jì)注射3次，然后于最后一次致敏注射后第10日，股動(dòng)脈采血，分離血清, 將各組6只豚鼠的血清分別混合, -20℃保存，2周內(nèi)備用。

1.3.2.4 PCA反應(yīng)的激發(fā)

取上述各組抗血清用生理鹽水稀釋成1∶2、1∶8、1∶32。然后取上述豚鼠，隨機(jī)分組，每組6只，雌雄各半,在豚鼠兩側(cè)背部預(yù)先剪毛,再取受試物組、新生牛血清組和氯化鈉注射液組的稀釋抗血清，于剪毛處皮內(nèi)注射各0.1 mL。經(jīng)48 h后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的1%依文思蘭染料溶液，1 mL/只。30 min后麻醉處死各組動(dòng)物，剪取背部皮膚，測(cè)量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于5 mm者判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理組間差異，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，用雙側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算,P< 0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 豚鼠全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)

取3個(gè)企業(yè)45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液原液，致敏并激發(fā)豚鼠，結(jié)果均未發(fā)生豚鼠主動(dòng)全身過敏反應(yīng)。 羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液(企業(yè)D)1412042批號(hào)的其中一只豚鼠出現(xiàn)連續(xù)咳嗽現(xiàn)象，小牛血清組攻擊3 min后即出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，咳嗽，抽搐，倒伏等強(qiáng)陽性反應(yīng)。

通過對(duì)血漿中過敏性指標(biāo)組胺(HIS)、IgG、IgM和IgE進(jìn)行測(cè)定和比較發(fā)現(xiàn)IgM和IgE在各組間均無明顯變化，而組胺及IgG在小牛血清陽性組內(nèi)有比較明顯的升高，見圖1、2及表1。用雙側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算發(fā)現(xiàn)，陽性組與陰性組及樣品組間均有差異，陽性結(jié)果成立。組胺及IgG在羥乙基淀粉40各組間無顯著差異，與陰性對(duì)照組無顯著區(qū)別。

2.2 豚鼠被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)

我們對(duì)3個(gè)企業(yè)45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液,取原液，致敏并攻擊豚鼠，考察豚鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)，結(jié)果均未發(fā)生豚鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)。

圖1 各組間IgG均值比較Fig.1 Comparison on average of IgG in each group.

圖2 各組間HIS均值比較Fig.2 Comparison on average of HIS in each group.

組別批號(hào)激發(fā)后出現(xiàn)國(guó)過敏反應(yīng)及組胺和IgG的含量(第21天激發(fā))癥狀發(fā)生數(shù)(只)主要癥狀組胺(ng/mL)IgG(mg/mL)結(jié)果判斷陰性陰性0922±21．6286±123-2A1504230501003±12．1388±109-等滲40(企業(yè)A)2A150527050750±27．9269±267-2A1506140501030±15．9781±098-14112832030963±15．7289±096-等滲40(企業(yè)B)15072432010895±15．6185±133-15070432030804±15．9472±224-14123001020897±23．7588±180-高滲40(企業(yè)C)15060301010979±28．4271±144-14101701010959±11．3688±409-等滲130(企業(yè)D)141204211156±6．5291±128-15031610980±15．5180±113-陽性陽性31342±4．95??116±091??+

注：與陰性相比較，**P< 0.05。

Note.Compared with the negative control ,**P< 0.05.

3 討論

本研究對(duì)企業(yè)A和B的41批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液、企業(yè)C的4批高滲羥乙基淀粉氯化鈉注射液、企業(yè)D的羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液，用豚鼠進(jìn)行了全身主動(dòng)過敏和被動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，羥乙基淀粉40氯化鈉注射液等滲和高滲溶液均無明顯過敏反應(yīng)。目前羥乙基淀粉40氯化鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未制定過敏反應(yīng)檢查項(xiàng)，但因藥物在臨床不良反應(yīng)中有過敏反應(yīng)現(xiàn)象，故建議企業(yè)增加過敏反應(yīng)發(fā)生的質(zhì)量監(jiān)控。另外因《中國(guó)藥典》中過敏反應(yīng)檢查是用豚鼠全身主動(dòng)過敏檢查法，僅是對(duì)動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)進(jìn)行觀察，也受試驗(yàn)者主觀因素影響，存在誤差。而在臨床上出現(xiàn)的一些超過敏反應(yīng)癥狀在此檢查法中也不能體現(xiàn)出，故可對(duì)過敏實(shí)驗(yàn)敏感動(dòng)物模型方面作進(jìn)一步研究。

本次研究中羥乙基淀粉130組中有1只豚鼠出現(xiàn)咳嗽癥狀，該組組胺及IgG水平比陰性及羥乙基淀粉40組也略有升高，雖統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異，但結(jié)合前期不良反應(yīng)檢索結(jié)果提示我們分子量大小與過敏反應(yīng)存在一定的正相關(guān)，中、高分子量的羥乙基淀粉存在過敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，其作為代血漿使用時(shí)，為急救用藥且用量大，所以安全性尤為重要。故有必要對(duì)羥乙基淀粉130、羥乙基淀粉200進(jìn)行進(jìn)一步過敏研究，同時(shí)在其臨床應(yīng)用時(shí)收集組胺及IgG這兩項(xiàng)過敏指標(biāo)與不良反應(yīng)相關(guān)性的數(shù)據(jù)，對(duì)易過敏病人提高警惕，以減少不良反應(yīng)的發(fā)生，保障用藥的安全。

[1] 陳燕，駱喜寶，潘云． 羥乙基淀粉的藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]． 醫(yī)學(xué)綜述，2012，18(4):593-595．

[2] 張美玉，李貽奎，張嘉，等.魚腥草注射液過敏及類過敏實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26(8)：610-614.

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(2014年版)[OL].http://www.sfda.gov.cn/WS01/CL1616/101018.html

Experimental Study on Anaphylactoid Reactions of Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection

ZONG Wei-feng,WANG Yu-xin,LIU Yang,WANG Yao,ZHANG Wei-feng,LU Yi-hong*

(Jiangsu Institute for Food and Drug Control，Nanjing 210008,china)

Objective To evaluate the sensitizations of Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection. Methods Active systemic anaphylaxis(ASA) test, internal sensitive index’s determination and screening and Passive Cutaneous Anaphylaxis(PCA) test are carried out. Observe the allergy safety of the samples. Results We use guinea pigs to carry on ASA test and PCA test with Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection from 45 batches of 3 companies and no changes have occurred. Measuring and comparing the sensitive index of HIS,IgG, IgM and IgE in plasma, IgM and IgE are not obvious variation; HIS and IgG positive group and negative group and sample groups are different.Conclusions It is suggestion that Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection safety evaluation should include allergic reactions, HIS and IgG sensitive index monitoring in clinical application of hydroxyethyl starch.

Hydroxyethyl starch 40 sodium chloride injection;Anaphylactoid reactions; HIS; IgG

宗衛(wèi)峰(1978-)，男，副主任藥師，研究方向：藥品藥理毒理研究、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)。E-mail：wfzong@sina.com

陸益紅，主任藥師，研究方向：藥品藥理毒理研究、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)。E-mail：yihonglu@163.com

研究報(bào)告

R-332

A

1671-7856(2017) 01-0064-03

10.3969.j.issn.1671-7856.2017.01.013

2016-06-14