●孫彥聰

超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用

●孫彥聰

目的：探討超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用。方法：對(duì)超高效液相色譜法在頭袍他美醋含量、有關(guān)物質(zhì)、聚合物及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述，并對(duì)未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行探討。結(jié)果：超高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭袍他美醋藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過(guò)程、體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)、生物等效性研究中。結(jié)論：隨著新型固定相、檢測(cè)器的研究以及聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用前景廣闊。

超高效液相色譜法；抗生素；藥物分析

超高效液相色譜法是藥物分析中常用的一種色譜分析方法，它采用規(guī)則均勻的顆粒(通常直徑在10μm以下)作為固定相，通過(guò)高壓輸液泵輸送流動(dòng)相，利用樣品中不同的組分被流動(dòng)相攜帶移動(dòng)的速度不同從而被分離檢出。超高效液相色譜法自1985年被收錄于《中國(guó)藥典》后，經(jīng)過(guò)三十年的發(fā)展，在藥品檢驗(yàn)過(guò)程中的作用日益顯著，已成為藥品檢驗(yàn)中最為重要的分析方法。對(duì)此，本文將基于筆者相關(guān)文獻(xiàn)研究，并主要以以頭抱他美醋這一抗生素為研究對(duì)象探討超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用情況，并對(duì)未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行探討?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 超高效液相色譜技術(shù)的原理優(yōu)點(diǎn)

超高效液相色譜的分離原理與高效液相色譜技術(shù)相同，但相對(duì)來(lái)說(shuō)，超高效液相色譜技術(shù)的性能較好且具有更高的速度、靈敏度和分辨率。超高效液相色譜技術(shù)在線速度較大或者高壓下環(huán)境下依然可以實(shí)現(xiàn)良好的效果，對(duì)樣品進(jìn)行高效的分離。超高效液相色譜技術(shù)使用的粒徑為1.7N，m，它比粒徑為5N，m的色譜柱提高了三倍的長(zhǎng)度。與此同時(shí)，其柱不變，就可以使得分析是在提高3倍流速下進(jìn)行的，大大縮短了分析時(shí)間。超高效液相色譜技術(shù)主要是通過(guò)減少顆粒的粒徑的方法，讓顆粒的色譜峰變窄，從而可以提高檢測(cè)的靈敏度。超高效液相色譜法與高效液相色譜法相比大大地提高了分辨率，更有利于對(duì)雜質(zhì)樣品進(jìn)行離子化，有助于對(duì)基質(zhì)雜質(zhì)進(jìn)行分離，提高檢測(cè)靈敏度。

2 超高效液相色譜法在頭抱他美醋藥物分析中的應(yīng)用

與經(jīng)典色譜分析方法相比分析耗時(shí)短，分離效率大為高。隨著高靈敏檢測(cè)器的開發(fā)和廣泛應(yīng)用，檢測(cè)靈敏度大為提高，為實(shí)現(xiàn)藥品的快速、高效、準(zhǔn)確的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。超高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭抱他美醋藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過(guò)程、體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)、生物等效性研究中。

2.1 含量、有關(guān)物質(zhì)

頭抱他美醋是以3一乙酞氧基一7一氨基頭抱烷酸為原料，與氨嚎厲乙酞氯經(jīng)過(guò)縮合后，再水解得到頭抱他美，頭抱他美與特戊酸嗅甲醋發(fā)生醋化反應(yīng)生成頭抱他美醋。生產(chǎn)合成工藝較為繁瑣，反應(yīng)過(guò)程受到反應(yīng)溫度、酸堿度、時(shí)間影響，導(dǎo)致底物的分解、副反應(yīng)的發(fā)生，致使所得產(chǎn)品的含量、雜質(zhì)種類、聚合物情況復(fù)雜?！吨袊?guó)藥典》中鹽酸頭抱他美醋采用等度洗脫法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，王建等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)改用梯度洗脫法，采用極性更大的流動(dòng)相洗脫2min后逐步調(diào)整不同極性的流動(dòng)相比例，至乙睛一甲醇一水一磷酸鹽緩沖液(540二142.5二250二25)維持巧min，大量在《中國(guó)藥典》條件下不能出峰的極性小的雜質(zhì)得到充分的洗脫和檢出。此外進(jìn)行檢測(cè)對(duì)鹽酸頭抱他美醋，7一ADCA、頭抱他美酸、AE活性醋等合成過(guò)程中的中間產(chǎn)物，酸堿破壞、氧化破壞、高溫等分解產(chǎn)物等雜質(zhì)在233nm波長(zhǎng)處均有相似的紫外吸收，使用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)靈敏度更高。

2.2 聚合物的測(cè)定

采用分子排阻色譜法對(duì)頭抱他美醋中的高分子量聚合物進(jìn)行檢查，根據(jù)高分子量聚合物的分子量大小選擇不同孔徑的葡聚糖凝膠色譜柱，藥物分子量較小，隨流動(dòng)相進(jìn)人色譜柱后進(jìn)人滯留于固定相表面的孔穴中，在色譜柱中所走的途徑較長(zhǎng)，保留時(shí)間也較長(zhǎng)。聚合物分子空間尺寸較大、隨流動(dòng)相進(jìn)人色譜柱后不會(huì)進(jìn)人固定相表面的孔穴中而直接通過(guò)色譜柱，保留時(shí)間短。采用超高效液相色譜法，能夠?qū)崿F(xiàn)體積不同的分子的分離和測(cè)定。

2.3 體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究

目前臨床上廣泛采用超高效液相色譜法進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)以及藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的含量測(cè)定，用于體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究。林茵等學(xué)者選取健康的志愿者16例，所有實(shí)驗(yàn)者禁食1h2后于次日清晨空腹口服鹽酸頭抱他美醋059，分別于用藥前及用藥后定時(shí)抽取靜脈血約3ml，分離血清，精密量取待測(cè)血漿02ml，加人6%的高氯溶液02ml，振蕩后離心，取上清液作為供試品溶液，注人超高效液相色譜儀，通過(guò)測(cè)定服藥后不同時(shí)間段內(nèi)的血漿中頭抱他美醋活性物的含量分析藥物體內(nèi)代謝過(guò)程及時(shí)間，為臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。

3 HPLC及其聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

隨著研究的深入，超高效液相色譜儀的輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器均有了新的發(fā)展，特別是檢測(cè)器的發(fā)展，隨著各個(gè)部件的改進(jìn)，方法的靈敏度不斷提升。如：小角度激光散射檢測(cè)器(LALLSPD)可以用于多糖、蛋白質(zhì)類高聚物的高分子質(zhì)量物質(zhì)及分布的快速檢測(cè)，且不需要標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。與此同時(shí)多種聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展為超高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用帶來(lái)了新的生機(jī)。如超高效液相色譜一熱噴霧一質(zhì)譜聯(lián)用，用于同一樣品溶液中不同組分的同步分離和測(cè)定，極大的提高了檢驗(yàn)效率，樣品量及流動(dòng)相的消耗大大下降；超高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用和超高效液相色譜一核磁共振聯(lián)用在藥物雜質(zhì)檢測(cè)中，能夠?qū)?zhǔn)分子離子進(jìn)行多級(jí)裂解，從而提供化合物的相對(duì)分子量以及豐富的碎片信息，實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)信息的準(zhǔn)確分析，且分離檢驗(yàn)過(guò)程中不受流動(dòng)相中的緩沖鹽溶液的干擾。特別是在雜質(zhì)研究和藥物動(dòng)力學(xué)研究階段，通常雜質(zhì)含量以及血藥、尿液等體液樣本中藥物濃度很低，分析難度大且干擾多，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定藥物分析中的痕量物質(zhì)。在體內(nèi)藥物代謝過(guò)程臨床用藥監(jiān)測(cè)的研究中有著廣闊的發(fā)展前景，監(jiān)測(cè)血藥濃度的同時(shí)對(duì)其相關(guān)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行確證，操作簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高。

4 討論

抗生素的發(fā)現(xiàn)和使用開啟了人類對(duì)抗感染的新篇章，挽救了無(wú)數(shù)人的生命。天然抗生素的種類較少且均已產(chǎn)生了耐藥性，人工合成的抗生素已成為主導(dǎo)。每年有數(shù)以萬(wàn)計(jì)的患者死于與之相關(guān)的藥源性疾病，藥品的安全性逐漸引起人們的重視。這些不良反應(yīng)一方面與藥物本身的藥理活性有關(guān)，更主要的是藥品中所存在的毒性雜質(zhì)密切相關(guān)?？股氐姆蛛x、分析是藥物分析中較困難的領(lǐng)域。微生物法、分光光度法、化學(xué)方法所需時(shí)間較長(zhǎng)、專一性較差，正逐漸被取代。采用超高效液相色譜法進(jìn)行抗生素類藥物分析具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，隨著今后各種新型固定相、檢測(cè)器的研究和開發(fā)，聯(lián)用技術(shù)的不斷發(fā)展，使該方法抗生素類藥物分析中的應(yīng)用不斷加大。

（作者單位：陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院）

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孫彥聰，陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院藥學(xué)B1302班。