闞威，趙全邦，馬睿麟，沈艷麗，馬占全，胡廣衛(wèi)，李靜，馬世春，蔡金山

(1．青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧810000;2．中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京朝陽100125)

青海地區(qū)犬感染棘球絳蟲的調(diào)查

闞威1，趙全邦1，馬睿麟1，沈艷麗1，馬占全1，胡廣衛(wèi)1，李靜1，馬世春2，蔡金山1

(1．青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧810000;2．中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京朝陽100125)

包蟲病也稱棘球蚴病，是由帶科(Taeniidae)棘球?qū)?Genus Echinococcus)和泡球?qū)?Genus Alveococcus)絳蟲的中絳期(幼蟲)引起的人獸共患寄生蟲病，有棘球蚴病(Echinococcosis)和泡球蚴病(Alveococcosis)兩種［1］。棘球蚴病在以畜牧業(yè)為主的國家和地區(qū)多見，在我國，主要流行于西北、華北、東北，以及西南廣大農(nóng)牧區(qū)，是嚴(yán)重危害人畜健康和妨礙畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展的地方?。?］。青海省是棘球蚴病的高發(fā)流行區(qū)，其疫病分布之廣，疫情之重，危害之大已成為主要的動(dòng)物疫病，病原主要有細(xì)粒棘球絳蟲(E-chinococcus granulosus)、多房棘球絳蟲(Echinococcus multiloclaris)、少節(jié)棘球絳蟲(Echinococcus oligarthrus)和伏氏棘球絳蟲(Echinococcus vogeli)4個(gè)蟲種［3］。主要寄生于狐、犬、貓等食肉動(dòng)物的小腸中，青海省牧區(qū)內(nèi)有數(shù)量眾多的牧羊藏犬，此外有野犬和其他犬類及狼、狐貍等食肉動(dòng)物存在［4］。棘球絳蟲的終末宿主(犬)是棘球蚴病的重要傳染源，棘球絳蟲的蟲卵隨牧羊犬糞排出，污染食物、飲水和周圍環(huán)境，所以及時(shí)、準(zhǔn)確地檢測流行區(qū)終末宿主棘球絳蟲的感染情況和對(duì)感染動(dòng)物進(jìn)行強(qiáng)制驅(qū)蟲，對(duì)控制棘球蚴病的流行、綜合防控措施實(shí)施和防治效果等均具有重要的意義［5］。

鑒于青海省是棘球蚴病的主要流行區(qū)，為掌握犬棘球絳蟲病的流行情況，遏制家畜棘球蚴病的流行，中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心制定了《棘球蚴病綜合防控技術(shù)集成與示范項(xiàng)目》，對(duì)包括青海省在內(nèi)的5省(區(qū))進(jìn)行家畜棘球蚴病流行病學(xué)調(diào)查，以建立棘球蚴病綜合防控模式，形成棘球蚴病防控技術(shù)規(guī)范及防控水平評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，并加以示范推廣。本文對(duì)青海省境內(nèi)的牧羊犬棘球絳蟲(包蟲)病感染情況已進(jìn)行調(diào)查和研究，旨在從終末宿主著手，制定有效的防控措施，以降低棘球蚴病在人畜之間的流行。

1 材料與方法

1．1 調(diào)查地區(qū)全省40個(gè)縣(市)。

1．2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2000年至2014年全省40縣(市)牧民定居點(diǎn)牧羊犬或藏犬。

1．3 試驗(yàn)試劑及藥品氫溴酸檳榔堿、犬糞抗原檢測試劑(天津天之泰有限責(zé)任公司)、蔗糖、剖檢手術(shù)器械。

1．4 方法

1．4．1 氫溴酸檳榔堿瀉下法1958年來自新西蘭的蓋摩教授首次提出了氫溴酸檳榔堿瀉下法，從此檳榔堿瀉下就成為犬感染細(xì)粒棘球絳蟲重要的檢測方法之一。對(duì)全省各縣(市)的牧羊犬或藏犬，按0.5 mL/kg體重的劑量，將1.5%氫溴酸檳榔堿溶液注入口腔，服藥后約40～60 min，會(huì)排出黏性液體糞樣，收取其1/3糞樣，用3%福爾馬林溶液輕洗于搪瓷盤中沉淀片刻，棄去上清液，再進(jìn)行肉眼檢查。

1．4．2 剖檢法犬棘球絳蟲病感染的定性定量調(diào)查依據(jù)最準(zhǔn)確的就是剖檢法，同時(shí)剖檢法也是檢測棘球絳蟲感染的最準(zhǔn)確方法，是WHO規(guī)定的棘球絳蟲感染檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。其操作為收集調(diào)查動(dòng)物，剖檢，取小腸，兩端結(jié)扎，置于已編號(hào)的塑料袋或容器中。低溫保存，待檢。如要長距離運(yùn)送樣品，應(yīng)該用冷藏車或冰塊運(yùn)輸。剖檢時(shí)?？蓪⑿∧c分為數(shù)段，置于托盤，用剪刀剪開后浸入溫生理鹽水中。然后，直接取樣或者對(duì)樣品進(jìn)行富集后用肉眼和顯微鏡觀察用肉眼觀察或寄生蟲學(xué)常規(guī)方法收集蟲體，統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并計(jì)數(shù)。

1．4．3 糞抗原ELISA檢測法棘球絳蟲寄生于宿主的十二指腸處，其在宿主體內(nèi)所產(chǎn)生的分泌物、代謝物、脫落的節(jié)片等隨著宿主排泄物排出體外，稱為糞抗原，常用的糞抗原檢查法雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)因操作和結(jié)果觀察容易，而被廣泛的使用。通過糞抗原制備特異性的抗體，應(yīng)用抗原－抗體特異性結(jié)合的原理，檢測糞抗原，對(duì)終末宿主的感染情況進(jìn)行檢測。

1．4．4 飽和糖水漂浮法有時(shí)為了進(jìn)行科學(xué)研究或達(dá)到準(zhǔn)確診斷目的，常將檢出蟲卵作為實(shí)驗(yàn)室確診的依據(jù)之一，利用寄生蟲飽和蔗糖漂浮法，稱取一定量的糞便，用飽和蔗糖溶液溶解，沾取漂浮液上部的溶液，鏡檢是否有蟲卵。其過程是在500 mL水中加入650 g蔗糖溶解后，可到比重1.27的飽和蔗糖液。稱取0.5 g糞便，放人15 mL離心管中，加少量飽和蔗糖液，充分?jǐn)嚢韬?，加飽和蔗糖液至略隆起于試管口，靜置30 min，鏡檢計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2．1 氫溴酸檳榔堿瀉下法結(jié)果2000年從德令哈、稱多、甘德、澤庫、貴南5個(gè)縣采用氫溴酸檳榔堿瀉下法，共檢測306只牧羊犬，其中有110只藏犬患有細(xì)粒棘球絳蟲的感染，感染率為35.95%。2012年在全省40縣(市)基層獸醫(yī)站同樣采用氫溴酸檳榔堿瀉下法，檢測230只牧羊犬，其中22只牧羊犬患有細(xì)粒棘球絳蟲的感染，感染率為9.57%。合計(jì):2年采用氫溴酸檳榔堿瀉下法共檢測536只牧羊犬，132只感染有細(xì)粒棘球絳蟲，平均感染率為22.76%。

2．2 剖檢法結(jié)果2012年剖檢玉樹、剛察、同德、澤庫、海晏、興海、貴南7個(gè)縣的28只犬，剖檢結(jié)果顯示，有18只牧羊犬感染細(xì)粒棘球絳蟲，感染率為64.29%。

2014年對(duì)共和、剛察、貴南、都蘭、澤庫、互助6個(gè)縣的34只牧羊犬進(jìn)行剖檢檢查，剖檢結(jié)果顯示:6個(gè)縣共有20只犬感染細(xì)粒棘球絳蟲，感染率為58.82%。合計(jì)，2012、2014年共剖檢96只牧羊犬，其中62只感染有細(xì)粒棘球絳蟲，平均感染率為64.56%。

2．3 糞抗原ELISA檢測法結(jié)果采用糞抗原ELISA檢測犬糞3 887份，包括2009年剛察636份、2010年剛察644份、2011年全省縣(市)1 017份、2012年全省基層獸醫(yī)站1 590份，檢出感染棘球絳蟲犬糞496份，2009年剛察121份，感染率為33.80%，2010年剛擦196份，感染率30.43%、2011年全省40個(gè)縣(市)111份，感染率為10.91%、2012年基層獸醫(yī)站68份，感染率為4.30%，4年檢測結(jié)果顯示，犬棘球絳蟲病的平均感染率為19.86%。

2．4 飽和糖水漂浮法結(jié)果采用飽和糖水漂浮法對(duì)2012年從海晏、貴南、同德、澤庫、互助采集的102份犬糞進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果顯示，僅有3份感染棘球絳蟲病，感染率為2.93%。

3 討論與小結(jié)

有史以來，氫溴酸檳郎堿瀉下法是確定犬棘球絳蟲病感染的經(jīng)典方法之一，稱之為“檳榔堿瀉下檢測法”，在牧醫(yī)工作中具有較好的應(yīng)用價(jià)值。此外，應(yīng)用氫溴酸檳榔堿瀉下法檢測犬棘球絳蟲病的感染，不僅工作難度大，既浪費(fèi)時(shí)間又浪費(fèi)精力，而且對(duì)畜牧獸醫(yī)工作人員具有潛在的感染危險(xiǎn)性，并造成對(duì)周圍生活環(huán)境的污染，導(dǎo)致棘球蚴病的人畜感染。隨著吡喹酮等高效驅(qū)蟲藥的問世和使用，檳榔堿作為驅(qū)蟲藥的歷史已經(jīng)過去，現(xiàn)僅用于絳蟲感染流行病學(xué)基線調(diào)查。本試驗(yàn)在2000年和2012年采用此方法，共檢測536只藏犬，2年平均感染率為22.76%，其中2000年為35.95%，2012年為9.57%，由此看出通過近幾年牧區(qū)使用吡喹酮給牧羊犬驅(qū)蟲，牧羊犬感染棘球絳蟲比例有所下降。

早在1992年Allan［6］等，首次報(bào)道用兔抗細(xì)粒棘球絳蟲成蟲體粗提抗原的抗體做夾心ELISA檢測感染犬細(xì)粒棘球絳蟲糞抗原，敏感性為87.5%特異性為96.5%，且將保存于5.0%甲醛放置6個(gè)月以上的糞便標(biāo)本檢測效果不會(huì)發(fā)生改變。2008年，國內(nèi)學(xué)者黃燕［7］等，研究了犬糞便棘球絳蟲蟲體抗原雙抗體ELISA檢測方法，通過與剖檢結(jié)果比較系統(tǒng)的敏感性為92.3%特異性為80%，此方法可用于細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲感染的診斷，還可檢出不同荷蟲量自然感染狐貍多房棘球絳蟲的糞抗原，最低可檢出50條蟲體感染的糞便樣品，認(rèn)為糞抗原夾心ELISA檢測具有早期診斷價(jià)值和較好的療效考核價(jià)值。由此可見，糞抗原檢測法在診斷犬細(xì)粒棘球絳蟲感染具有較高的敏感性和特異性，可作為棘球蚴病常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法推廣應(yīng)用。糞抗原夾心ELISA檢測不僅具有早期診斷價(jià)值，而且還有較好的療效考核價(jià)值，將成為檳榔堿檢測法的替代方法，已逐漸用于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室。本試驗(yàn)使用天津天之泰有限責(zé)任公司生產(chǎn)的糞抗原ELISA檢測試劑盒，操作簡便省時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果可信性強(qiáng)，可以作為實(shí)驗(yàn)室和臨床診斷犬棘球絳蟲病的方法，但是該試劑成本較高，且要求檢測數(shù)量較大，因此僅能在動(dòng)物疫控中心使用。

剖檢法操作時(shí)，應(yīng)盡快從剖檢犬腹腔中取出小腸，兩端結(jié)扎，置于已編號(hào)的塑料袋或容器中。低溫保存，待檢。如要長距離運(yùn)送樣品，應(yīng)該用冷藏車或冰塊運(yùn)輸。剖檢時(shí)，可將小腸分為數(shù)段，置于托盤，用剪刀剪開后浸入溫生理鹽水中。然后，直接取樣或者對(duì)樣品進(jìn)行富集后用肉眼和顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)。此次在全省部分縣市共剖檢96只藏犬，2010年34只，2012年28只，2014年34只，感染棘球絳蟲犬62只，其3年平均感染率為64.57%，平均感染強(qiáng)度可達(dá)164 565，感染范圍為0～220萬。從剖檢年份來看，3年感染棘球絳蟲的犬只比列有所下降，同樣說明近幾年牧區(qū)采用吡喹酮給犬驅(qū)蟲，達(dá)到一定的效果，對(duì)遏制棘球蚴病的流行起到了一定的作用。

對(duì)于飽和糖水漂浮法，是當(dāng)下基層慣用的檢測方法，其操作簡單方便，但是檢出率較低，就從本試驗(yàn)研究可以看出，在2012年采用飽和糖水漂浮法檢測102份犬糞便，僅檢出3份，比起以上3種方法相差甚遠(yuǎn)，因此，獸醫(yī)工作者應(yīng)綜合考慮選擇合適的檢測方法，以達(dá)到對(duì)犬棘球絳蟲病調(diào)查的準(zhǔn)確性。

此次調(diào)查研究長達(dá)14年，綜合分析試驗(yàn)結(jié)果得知，我們長期以來在牧區(qū)推廣吡喹酮對(duì)牧羊犬驅(qū)蟲試驗(yàn)，得到了一定的效果，連年來牧羊犬棘球絳蟲病的感染率有所下降，這是對(duì)我們防控工作的肯定，也緩和了棘球蚴病在家畜與人類之間的傳播。

［1］Eckert J，Gemmell MA，Meslin FX，et al．WHO/0IE Manual on Echinococcosis in Humans and Animals:A Public Health Problem of Global Concern［J］．World Organization yor Animal Health Paris France，2001．

［2］汪明主編．獸醫(yī)寄生蟲學(xué)［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2007: 378-379．

［3］曹宏主編．青海省動(dòng)物疫病流行病學(xué)調(diào)查［M］．西寧:青海人民出版社，2008:345．

［4］李春花，蔡進(jìn)忠，賈萬忠，等．青海牧區(qū)藏犬寄生蟲病流行病學(xué)調(diào)查研究［J］．青海畜牧獸醫(yī)雜志，2014，44(4):1-4．

［5］賈萬忠，閆鴻斌，王玉朝，等．犬科動(dòng)物棘球絳蟲感染檢測方法研究進(jìn)展［J］．中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2010，26(2):179-182．

［6］Allan J C，Craig P S，Garcia Noval J，et al．Coproantigen detection for immunodiagnosis of echinococcosis and taeniasis in dogs and humans［J］．Parasitology，1992，104(Pt 2):347-355．

［7］黃燕，Heath D D，Antone J C，等．犬糞便棘球絳蟲抗原的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測法建立與應(yīng)用［J］．預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2008，24(6):407-411．

S852．65+5;S852．73+4

B

0529-6005(2017)01-0045-02

2015-12-14

中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心棘球蚴病綜合防控技術(shù)集成與示范項(xiàng)目

闞威(1986-)，男，獸醫(yī)師，碩士生，主要從事動(dòng)物防疫工作，E-mail:kanweind@163．com

蔡金山，E-mail:894569380@qq．com