（廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440）

廣州市農(nóng)貿(mào)市場家禽生鮮上市政策實施效果評估

鄭麗蘭，張海冰，陳 裕，楊穗娟，鐘錦輝，林 鴻，殷 實，張海明，彭 聰，曾佳臻，胡永輝，張 楨，鄺惠儀，陳裕華，林鐘婷，鄧小敏，楊秋菲，鐘卓玲，沈 丹

（廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440）

為評價廣州市家禽“集中屠宰、冷鏈配送、生鮮上市”的實施效果，為下一步調(diào)整禽流感綜合防控措施提出科學(xué)依據(jù)，2016年3—4月對廣州市限制活禽銷售區(qū)域和非限制活禽銷售區(qū)域內(nèi)的各11個農(nóng)貿(mào)市場進行調(diào)查研究。調(diào)查共采集496份市場內(nèi)、外環(huán)境棉拭子進行A型和H9亞型流感病毒熒光RT-PCR檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：限售區(qū)與非限售區(qū)農(nóng)貿(mào)市場環(huán)境樣品的A型流感病毒陽性率分別為81.06%和89.22%，差異顯著（p<0.05）；H9亞型流感病毒的陽性率分別為25.55%和43.12%，差異極顯著（p<0.01）；外環(huán)境樣品中，限制區(qū)的地面擦拭標(biāo)本禽流感陽性率為54.55%，而非限制區(qū)的陽性率則高達100%，差異顯著（p<0.05）；內(nèi)環(huán)境樣品中的污水和檔口地面兩個采樣點樣品的H9亞型病毒陽性率在限制區(qū)和非限制區(qū)之間差異顯著（p<0.05）。本次調(diào)查結(jié)果顯示，廣州市采取的“限制活禽交易、生鮮上市”措施，對于禽流感防控起到了一定的積極作用，但仍存在一些不足需要改善，建議嚴(yán)格實施集中屠宰、冷鏈配送等措施。

禽流感；活禽市場；生鮮上市；效果評估

2013年2月始，我國浙江、江蘇、廣東等十多個省份相繼發(fā)生人感染H7N9亞型流感病毒事件[1-2]。同年5月18日，廣州市某區(qū)也發(fā)現(xiàn)了H7N9亞型流感病毒。截至2014年2月13日，廣東省共報告了逾40例人H7N9感染病例。隨后國內(nèi)外科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)：我國新出現(xiàn)的H7N9病毒是一種多宿主多次重配的新型病毒。為維護公共衛(wèi)生安全，降低人感染H7N9流感的風(fēng)險，促進家禽生產(chǎn)經(jīng)營業(yè)轉(zhuǎn)型升級，廣州市于2014年5月至11月在部分區(qū)域開展了家禽“集中屠宰、冷鏈配送、生鮮上市”的先行試點工作，基本形成了一套符合廣州市本地實際情況的家禽生鮮上市模式。

為評價廣州市家禽“集中屠宰、冷鏈配送、生鮮上市”政策的實施效果，2016年3月至4月，本課題組對廣州市限制活禽銷售區(qū)域（以下簡稱限制區(qū)）和非限制活禽銷售區(qū)域（以下簡稱非限制區(qū)）的禽流感病毒污染情況進行了調(diào)查研究。由于H9亞型流感病毒與H7N9亞型流感病毒的密切相關(guān)性，所以選擇通用型禽流感和H9亞型禽流感作為此次農(nóng)貿(mào)市場家禽生鮮上市政策效果評估的指標(biāo)。

1 方法

1.1 確定研究對象及抽樣原則

廣州市劃定的限制區(qū)內(nèi)共有208家農(nóng)貿(mào)市場，非限制區(qū)內(nèi)共有241家農(nóng)貿(mào)市場。本調(diào)查在限制區(qū)與非限制區(qū)分別選取11個農(nóng)貿(mào)市場進行研究。

1.2 樣品選擇

采集所選農(nóng)貿(mào)市場內(nèi)各檔口的內(nèi)外環(huán)境樣品，盡量兼顧每個檔口，采集位置優(yōu)先選擇可能殘留禽流感病毒的地方。檔口內(nèi)外環(huán)境樣品需采集潮濕和臟的樣品。檔口內(nèi)環(huán)境棉拭子的采集順序依次為檔口銷售臺、檔口污水、檔口地面、案板、籠具表面。檔口外環(huán)境棉拭子的采集順序依次為垃圾箱內(nèi)壁、下水道、地面污水、地面擦試標(biāo)本、運輸車輛。采集時需1份/管，在管上標(biāo)明樣品種類（如飲水）并進行唯一性編號。

1.3 樣品數(shù)量

在非限制區(qū)采集樣品269份，在限制區(qū)采樣227份，共采集496份棉拭子樣品。

1.4 檢測試劑與方法

通用型流感病毒（AIV）和H9亞型流感病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒均購自中山達安基因股份有限公司；RNA提取試劑購自美國應(yīng)用生物有限公司。

用RNA提取試劑盒提取所采集樣品的禽流感病毒核酸。根據(jù)各檢測項目的RT-PCR試劑盒方法，分別用ABI7500實時熒光核酸擴增儀進行核酸擴增。首先對采集的樣品進行通用型流感病毒檢測，再對陽性樣品進行H9亞型流感病毒檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SSPS 20統(tǒng)計軟件和EXCEL軟件對調(diào)查結(jié)果進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析；陽性率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 限制區(qū)與非限制區(qū)通用型流感病毒及H9亞型流感病毒陽性率比較

通用型流感病毒和H9亞型流感病毒陽性率在限制區(qū)和非限制區(qū)之間存在差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。

表1 限制區(qū)與非限制區(qū)樣品的AIV陽性率比較

2.2 限制區(qū)和非限制區(qū)不同采樣點樣品的AIV核酸檢測結(jié)果比較

雖然通用型流感病毒在限制區(qū)和非限制區(qū)內(nèi)各采樣點的陽性率有所差別，但是差異不明顯（P>0.05）。外環(huán)境樣品中，限制區(qū)地面擦拭標(biāo)本的陽性率為54.55%，非限制區(qū)的陽性率為100%，差異顯著（χ2=4.14，p<0.05）；其他采樣點外環(huán)境樣品之間的差異都不明顯（P>0.05），具體見表2。

表2 限制區(qū)和非限制區(qū)不同采樣點樣品的AIV核酸檢測結(jié)果

2.3 限制區(qū)和非限制區(qū)不同采樣點樣品的H9亞型流感病核酸檢測結(jié)果比較

比較限制區(qū)和非限制區(qū)樣品的H9亞型病毒陽性率，發(fā)現(xiàn)限制區(qū)內(nèi)環(huán)境樣品的陽性率比非限制區(qū)低；內(nèi)環(huán)境樣品中的污水和檔口地面樣品陽性率在限制區(qū)和非限制區(qū)之間差異顯著（p<0.05）。外環(huán)境樣品之間的差異都不明顯（P>0.05），具體見表3。

表3 限制區(qū)和非限制區(qū)不同采樣點樣品的H9亞型流感病核酸檢測結(jié)果

3 討論

2013年3月，上海和安徽兩地首先發(fā)現(xiàn)3例人感染新型重配H7N9亞型流感病毒的病例。隨后，國內(nèi)外科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，我國出現(xiàn)的H7N9病毒是一種多宿主多次重配的新型病毒[2]。其中，H7N9病毒編碼定位于囊膜內(nèi)蛋白的6個基因節(jié)段（PB2?PB1?PA?NP?M 和NS）全部來源于多年來流行于我國家禽中的H9N2病毒。新型H7N9病毒繼承了母源病毒（H9N2）變異迅速、基因復(fù)雜的特點，通過不斷地基因重配獲得了感染人的能力[1]。由此可見，H9亞型中的H9N2病毒，在新型H7N9病毒的產(chǎn)生并獲得傳染人能力中扮演著重要角色，或許它還將繼續(xù)參與H7N9病毒的變異。因此，此次調(diào)查選擇了H9亞型禽流感病毒作為一個評估指標(biāo)，同時為防止漏檢，還選擇了通用型流感病毒作為指標(biāo)。

農(nóng)貿(mào)市場是不同來源、不同批次、不同種類禽類的聚集地，其給病毒傳播擴展提供了優(yōu)良的環(huán)境條件。目前的研究認(rèn)為，活禽交易市場是禽流感病毒的重要存儲庫，是人感染H7N9等流感病毒的高風(fēng)險區(qū)域[3-4]。彭聰及鐘錦輝等[5-6]分別通過對廣州市活禽交易市場休市及“零存欄”政策進行效果評估發(fā)現(xiàn)，單純依靠每月一次的休市措施或活禽零售市場“零存欄”措施，無法從根本上降低活禽交易市場內(nèi)禽流感的污染率以及人感染禽流感的風(fēng)險，由此提出了“家禽生鮮上市”的研究設(shè)想并實施。

本次調(diào)查研究是“休市”及“零存欄”研究的延續(xù)。本調(diào)查從廣州市劃定的限制區(qū)與非限制區(qū)內(nèi)各選取11個農(nóng)貿(mào)市場，分別采集市場外環(huán)境和內(nèi)環(huán)境樣品進行通用型流感和H9亞型流感的病毒檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)限制區(qū)內(nèi)的通用型流感病毒污染嚴(yán)重程度明顯比非限制區(qū)低，這與陳兵等[7]的研究結(jié)論基本一致。可見針對活禽交易市場采取“家禽生鮮上市”的措施能在一定程度上降低農(nóng)貿(mào)市場內(nèi)禽流感病毒的污染程度，這也與上海、浙江以及香港等地的禽流感防控成功經(jīng)驗相符合。但與此同時，本調(diào)查也發(fā)現(xiàn)限制區(qū)環(huán)境樣品中禽流感病毒并沒有完全消失。調(diào)查發(fā)現(xiàn)目前市場上的冰鮮家禽有三種類型：第一類是去內(nèi)臟的冰鮮禽類，主要來自廣州市周邊的經(jīng)檢疫合格的家禽屠宰場；第二類是去除內(nèi)臟的完整家禽，其是在市場附近租一個地方屠宰，然后運到市場內(nèi)售賣的；第三類是整只家禽只放血、脫毛，沒有去內(nèi)臟（又叫“殺白”），然后運入市場進行售賣，售賣時根據(jù)客戶要求再去除內(nèi)臟，其來源基本與第二類相同。第二類和第三類冰鮮禽類的存在，可能是導(dǎo)致限制區(qū)內(nèi)環(huán)境樣品禽流感病毒陽性率依舊較高的主要原因之一。特別是第三種情況的存在，能在相當(dāng)程度上解釋限制區(qū)內(nèi)環(huán)境中的銷售臺和籠具表面樣品的AIV陽性率高于非限制區(qū)的原因。同時，由于第二類、第三類禽的屠宰點就在市場附近，很多時候市場外的垃圾箱就成了屠宰點丟棄廢物的地方，從而導(dǎo)致限制區(qū)外環(huán)境樣品中垃圾箱內(nèi)壁樣品的AIV和H9亞型流感的陽性率甚至比非限制區(qū)的還要高。由此推測“家禽生鮮上市”實施效果的好壞，關(guān)鍵還在具體實施過程中各環(huán)節(jié)和細節(jié)的有效監(jiān)督管理上。如果能夠有效控制家禽的非法運輸和屠宰，杜絕第二類、第三類家禽的出現(xiàn)，相信能夠更好地控制禽流感的發(fā)生和擴散。

比較內(nèi)外環(huán)境各采樣點樣品的AIV陽性情況發(fā)現(xiàn)，僅有限制區(qū)地面檫拭標(biāo)本的陽性率顯著低于非限制區(qū)，而其他采樣點的陽性率差別則不顯著。同樣，比較各采樣點H9亞型流感的陽性情況發(fā)現(xiàn)，僅有限制區(qū)污水和檔口地面樣品的陽性率顯著低于非限制區(qū)，而其他采樣點的陽性率差別不明顯。這可能與在各個采樣點采集的樣本量不足，不便于統(tǒng)計分析有關(guān)。例如，關(guān)于運輸車輛的樣品，總共采集了6份。建議下次研究最好適度擴大各采樣點的樣本量。

本研究提示，廣州市采取的設(shè)置活禽銷售限制區(qū)、推行活禽市場家禽生鮮上市的措施總體上是比較有效的，但依舊存在問題。應(yīng)進一步加強“集中屠宰、冷鏈配送”措施的執(zhí)行和監(jiān)督管理，切實降低禽流感的發(fā)生風(fēng)險以及人感染禽流感的風(fēng)險。

[1] LAM T T，WANG J，SHEN Y，et al. The genesis and source of the H7N9 infuenza viruses causing human infections in China[J]. Nature，2013，502（7470）：241-244.

[2] CUI L，LIU D，SHI W，et al. Dynamic reassortments and genetic heterogeneity of the human-infecting infuenza A（H7N9）virus[J]. Nat Commun，2014，5：3142.

[3] WANG M，DI B，ZHOU D H，et al. Food markets with live birds as source of avian infuenza[J]. Emerg Infect Dis，2006，12（11）：1773-1775.

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[5] 彭聰，彭南秀，段曉冬，等. 廣州市活禽交易市場休市效果評估列隊研究[J]. 中國動物檢疫，2016，33（8）：3-7.

[6]鐘錦輝，彭聰，彭南秀，等. 基于禽流感病毒檢測的活禽零售市場“零存欄”效果評估[J].中國動物檢疫，2016，33（8）：13-16.

[7] 陳兵，馬智超，余光清，等. 寶安區(qū)2013-2014年人感染H7N9禽流感公共衛(wèi)生風(fēng)險評估[J]. 中國公共衛(wèi)生管理，2015，31（5）：613-615.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Effect Evaluation on the Implementation of Fresh Poultry Meat Marketing Policy in the Retail Live Bird Markets in Guangzhou City

Zheng Lilan，Zhang Haibing，Chen Yu，Yang Suijuan，Zhong Jinhui，Lin Hong，Yin Shi，Zhang Haiming，Peng Cong，Zeng Jiazhen，Hu Yonghui，Zhang Zhen，Kuang Huiyi，Chen Yuhua，Lin Zhongting，Deng Xiaomin，Yang Qiufei，Zhong Zhuoling，Shen Dan
（Guangzhou Animal Health Inspection Institution，Guangzhou，Guangdong 510440）

In order to evaluate the implementation effect of the“centralized slaughtering，cold chain distribution，fresh poultry meat listing and marketing”system in Guangzhou City，so as to provide scientifc basis for adjusting the comprehensive prevention and control measures for avian influenza（AI），an investigation was conducted in regions both limiting and allowing live-bird marketing（11 live-bird markets were selected on behalf of each type of the regions，respectively）during March to April，2016. Altogether 496 cotton swabs were collected from internal and external market environment and detected by fluorescent RT-PCR for avian influenza virus type A and subtype H9. Results showed that in the restricted and non-restricted regions，the positive rates of avian infuenza type A were 81.06% and 89.22% respectively，which showed a significant difference（p<0.01）. And that of avian influenza subtype H9 were 25.55% and 43.12% respectively，existing a highly signifcant difference（p<0.01）. Meanwhile，among the wipe samples of ground surface derived from external environment of restricted region，the positive rate of AI was 54.55%，while that in non-restricted region was 100%，still showing a signifcant difference. Moreover，in internal environment，obvious difference was also found in samples from sewage and stall ground surface betweenrestricted and non-restricted regions. These results indicated that the adopted measures of restricting live bird marketing and fresh poultry meat listing and marketing had played a certain positive role in AI prevention and control. However，there still exist some problems needing to be improved，and corresponding suggestions were given，such as strictly implementing measures of centralized slaughtering and cold chain distribution，etc.

avian infuenza；live bird market；fresh poultry listing and marketing；effect evaluation

book=4,ebook=10

S858.21

B

1005-944X（2017）01-0004-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.01.002

科技部科技基礎(chǔ)性工作專項（2012FY111000）；廣東省農(nóng)業(yè)廳H7N9流感聯(lián)合攻關(guān)項目（粵農(nóng)函〔2014〕1046號）；廣東省省級科技計劃項目“H7N9亞型禽流感診斷方法和綜合防控技術(shù)研究”（2013B020224004）

沈 丹