李潤樂，格日力#

(1.青海大學(xué)高原醫(yī)學(xué)研究中心，青海 西寧 810001；2.青海大學(xué)高原人畜共患病研究所，青海 西寧 810001)

包蟲病是感染棘球絳蟲幼蟲(棘球蚴)引起嚴(yán)重危害疫區(qū)人群健康的人畜共患寄生蟲病，可分為囊型包蟲病(Cystic echinococcosis，CE)和泡型包蟲病(Alveolar echinococcosis，AE)[1]。包蟲病主要流行于我國青海、新疆、西藏、四川、內(nèi)蒙古等牧區(qū)和半牧區(qū)[2]。我國部分地區(qū)是包蟲病，特別是素有“蟲癌”之稱的泡型包蟲病的重災(zāi)區(qū)。近年來，對包蟲病流行病學(xué)、臨床診斷學(xué)、治療防控學(xué)等方面取得了明顯成效，但對包蟲病的發(fā)病及免疫逃逸機(jī)制仍然了解甚少，尚處在初始階段。因此，加大對包蟲病的基礎(chǔ)研究是防控該病的重點(diǎn)。本文簡要總結(jié)了我國科技工作者在包蟲病基因組學(xué)等基礎(chǔ)研究方面取得的成果，以及在基礎(chǔ)研究方面尚存在的問題。

1 基因組研究方面

2013年日本學(xué)者聯(lián)合我國學(xué)者報(bào)道了針對四種絳蟲基因組的研究工作，其中包括多房棘球絳蟲和細(xì)粒棘球絳蟲的基因組，研究顯示多房棘球絳蟲和細(xì)粒棘球絳蟲基因組大小較血吸蟲小，為～115 Mbp，該研究通過對多房棘球蚴不同時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組研究發(fā)現(xiàn)，編碼基因約10 231～12 490個(gè)。[3]同年我國科學(xué)家成功解析了細(xì)粒棘球絳蟲基因組并且對細(xì)粒棘球蚴的轉(zhuǎn)錄組學(xué)特征進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)該蟲基因由1.5億堿基組成，編碼基因11 329個(gè)，其中1/5的基因?yàn)榧纳x特有基因，這些基因可能是決定棘球絳蟲獨(dú)特性的關(guān)鍵因素。[4]隨著這些基因組測序分析的完成，我們對棘球絳蟲與宿主間的關(guān)系，兩種棘球絳蟲在基因組、基因表達(dá)及基因表達(dá)機(jī)制的差異理解更深，為今后的診斷和治療研究提供方向。目前對于細(xì)粒棘球絳蟲的亞型(G1-G10)及中間宿主傳播途徑已十分明確[4]，然而對于多房棘球蚴的分型及傳播途徑尚不明確。

2 信號通路研究方面

目前對于調(diào)控棘球蚴生長發(fā)育及代謝的相關(guān)通路尚不明確，張文寶等人發(fā)現(xiàn)，細(xì)粒棘球蚴具有完整的MAPK、Erb、Wnt、Notch、Hedgehog、TGF-β、Jak-Stat、Insulin等信號通路[5，6]，并且基因組編碼表皮生長因子受體(EGFR)、纖維化生長因子受體(FGFR)、胰島素樣生長因子受體(IGFR)，但是缺乏相關(guān)生長因子FGF、EGF、IGF編碼基因，這個(gè)現(xiàn)象表明棘球蚴需依靠宿主的生長因子來維持其生物學(xué)功能，他們之間通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行聯(lián)系。通過對基因組分析，目前研究針對棘球絳蟲信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要因子的抑制劑(p38抑制劑SB202190和Ml3403[7，8]，ERK抑制劑PD98059[9]，EGFR抑制劑CI-1033[10]等)，在體外水平發(fā)現(xiàn)其可抑制原頭蚴的活性。

3 免疫機(jī)制研究方面

感染多房棘球蚴和細(xì)粒棘球蚴病人血清細(xì)胞因子、抗體的變化，及單純原頭蚴、囊、囊液、六鉤蚴等引起的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，已有大量研究確證。包蟲病病人血清中檢測到高水平的Th2細(xì)胞因子，包括IL-4、IL-5和IL-13，但相對IFN-γ水平較低[11，12]。有研究顯示，棘球蚴通過改變宿主細(xì)胞因子(從Th1向Th2轉(zhuǎn)變)避免被宿主殺傷。在包蟲病患者和小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)增高[13]；包蟲病患者外周血中IL-10表達(dá)升高[14]。大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)揭示了棘球蚴的免疫逃避機(jī)制，通過提升宿主的免疫功能，進(jìn)而達(dá)到抑制棘球蚴和囊泡的生長(已在體內(nèi)/體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得到驗(yàn)證)。

4 抗原/基因診斷研究方面

抗原檢測從最早使用囊液到如今使用特異性重組抗原進(jìn)行檢測，靈敏度和特異性都有了很大的提升。如今已上市包蟲病檢測試劑盒公司有海泰、康白的和貝斯明。有研究發(fā)現(xiàn)，AgB、Ag5、IgG4、 Epc1P29、HSP20、EgEF-1β/δ、rEGCMDH、rEgAFFPT[15-17]等抗原可作為包蟲病檢測的特異性抗體，但還需進(jìn)一步明確。目前用于囊型包蟲病/泡型包蟲病抗體膠體金檢測的試劑盒，將純化羊細(xì)粒棘球囊液(HCF)和多房棘球絳蟲重組rEm18[18]作為抗原蛋白，具有良好的檢出率和區(qū)分效果。

對于基因診斷尚處在研究階段。有報(bào)道認(rèn)為，囊型包蟲病和泡型包蟲病的檢測是基于病灶的基因檢測，雖然靈敏度達(dá)到100%且無交叉反應(yīng)，但樣本來源是病灶，只能術(shù)后檢測并區(qū)分，不能達(dá)到在術(shù)前診斷的目的[19]。湯鋒課題組近期發(fā)現(xiàn)，包蟲病患者血漿循環(huán)DNA中存在棘球蚴特異性片段，可以用于包蟲病的特異性診斷。

5 存在的問題

受棘球絳蟲感染之后，在宿主體內(nèi)的不同發(fā)育階段(經(jīng)過蟲卵、六鉤蚴、棘球蚴等)的很多科學(xué)問題尚不清楚。如病原體感染之后，如何與宿主發(fā)生免疫應(yīng)答，又是什么情況下病原體能夠突破宿主的免疫保護(hù)而發(fā)生免疫逃逸，病原體在體內(nèi)生長發(fā)育過程中的細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑是什么等問題均不清楚?；谶@些問題，我們認(rèn)為需要高度重視包蟲病的基礎(chǔ)研究，設(shè)立科技重大專項(xiàng)，組織多部門、跨學(xué)科的聯(lián)合攻關(guān)。為此，須重視以下領(lǐng)域的研究：(1)研究對棘球蚴發(fā)育、存活及宿主相互作用的分子機(jī)制，以及棘球蚴的代謝、繁殖等的信號通路；(2)開發(fā)研制疫苗，EG95疫苗對羊有很好的保護(hù)作用，但尚無有效對包蟲病終未宿主犬的疫苗，若對犬實(shí)施疫苗預(yù)防，可以直接阻止蟲卵的傳播，控制感染，減少中間宿主感染棘球蚴病的幾率；(3)建立包蟲病早期分型診斷方法，目前包蟲病的診斷依然依賴B超、CT等影像學(xué)方法，往往經(jīng)影像學(xué)確診的病人已經(jīng)進(jìn)入晚期失去了最佳的治療機(jī)會(huì)，為此，應(yīng)利用分子生物技術(shù)建立一種敏感性、特異性均高的早期診斷的方法；(4)確定一些治療包蟲病新的藥物靶點(diǎn)，如G蛋白偶聯(lián)受體和絲氨酸蘇氨酸及酪氨酸蛋白激酶、絲氨酸蛋白酶，還有核激素等是近年來成功發(fā)現(xiàn)的新藥靶點(diǎn)[20，21]。

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