譚澤芬，劉紹蓮

（永勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，云南 麗江 674200）

農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法及經(jīng)驗(yàn)探討

譚澤芬，劉紹蓮

（永勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，云南 麗江 674200）

通過(guò)介紹農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法，具體分析了不同檢測(cè)環(huán)節(jié)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，同時(shí)提出了在操作中遇到具體問(wèn)題的處理方式以及注意事項(xiàng)，供參考借鑒。

農(nóng)藥殘留；檢測(cè)方法；經(jīng)驗(yàn)

用農(nóng)藥殘留速測(cè)儀檢測(cè)農(nóng)藥殘留，方便快捷、前處理簡(jiǎn)單、對(duì)檢測(cè)人員要求低、操作簡(jiǎn)便且靈敏度高，便于農(nóng)藥殘留檢測(cè)部門開(kāi)展快速檢測(cè)工作。但目前速測(cè)儀廠家多、型號(hào)多，僅永勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中就有3個(gè)廠家的速測(cè)儀：PR-410型、海葒興HHXSI-24NC以及CL-BIII型等。

但萬(wàn)變不離其宗，根據(jù)多年的工作經(jīng)驗(yàn)，速測(cè)儀的原理相同，操作步驟大致一樣，只是試劑、樣品的取樣量不同而已，快速檢測(cè)技術(shù)有一定的技巧可循，掌握了這些方法，對(duì)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)工作就能透徹理解、準(zhǔn)確操作，有效地做好快速檢測(cè)工作，從而達(dá)到對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全有效監(jiān)管的目的。

1 檢測(cè)范圍

所有農(nóng)藥殘留速測(cè)儀都只檢測(cè)有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類兩類農(nóng)藥，因現(xiàn)階段我國(guó)有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥使用量約占95%以上，且在蔬菜和水果上使用最多，也是最容易引起中毒的兩大類農(nóng)藥，是國(guó)家重點(diǎn)監(jiān)控的目標(biāo)，為此只要監(jiān)管好這兩類農(nóng)藥，就基本可避免食用蔬菜和水果中毒事件發(fā)生。

2 檢測(cè)原理

乙酰膽堿酯酶（或丁酰膽堿酯酶）水解后，水解產(chǎn)物碘化硫代乙酰膽堿與顯色劑二硫雙硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，而有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解或水解程度下降，從而無(wú)顯色反應(yīng)或黃色產(chǎn)物減少，用此判斷有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是否存在。

在反應(yīng)完成后，用分光光度計(jì)測(cè)定黃色產(chǎn)物隨時(shí)間變化的吸光值，計(jì)算出抑制率，以此判斷蔬菜和水果中含有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類殘留的情況。根據(jù)抑制率來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果，依據(jù)農(nóng)藥含量做出是否合格的判斷。

抑制率（%）=△Ao-△At/△Ao×100%

式中：△Ao——對(duì)照液反應(yīng)后吸光度的變化值；

△At——樣品溶液反應(yīng)后吸光度的變化值。

3 檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備

3.1 緩沖液的配制

將緩沖試劑倒入燒杯中，加入規(guī)定量的娃哈哈純凈水或二級(jí)及以上的超純水溶解，混勻即可。

3.2 底物

底物用規(guī)定量的緩沖液溶解。

3.3 酶和顯色劑

如不是溶液，都要用規(guī)定量的配制好的緩沖液溶解后才可使用。

配制好的底物、酶及顯色劑需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結(jié)冰。配好的緩沖液常溫保存即可。

4 空白對(duì)照及檢測(cè)樣品的制備

不同型號(hào)的儀器設(shè)備的農(nóng)殘速測(cè)儀，其空白對(duì)照及檢測(cè)樣品的制備順序都相同，都是按酶—緩沖液（待測(cè)液）—顯色劑—底物的順序加入，不同的只是酶、顯色劑及底物的取用量不同，樣品的取樣量不同而已。下面以海葒興HHXSI－24NC速測(cè)儀為例來(lái)說(shuō)明對(duì)照及樣品的制備。

4.1 空白對(duì)照的制備

取酶100 μL于軋口瓶中（或者試管），加入緩沖液2.5 mL，再加入顯色劑100 μL、底物20 μL，搖勻后立即倒入比色皿中，放入儀器指定通道，按操作進(jìn)行測(cè)量。

4.2 檢測(cè)樣品的制備

稱取2.0 g樣品于三角瓶中，加入10 mL緩沖液（如稱取4.0 g樣品，則加入緩沖液20 mL），搖勻振蕩1 min，稍靜置后，倒出樣液備測(cè)。取一軋口瓶（或試管），加入100 μL酶、2.5 mL待測(cè)液，混勻靜置10 min，再加入顯色劑100 μL、底物20 μL，搖勻后立即倒入比色皿中，放入儀器指定通道，按操作進(jìn)行測(cè)量即可。

5 碰到的問(wèn)題及處理

在檢測(cè)中，時(shí)常碰到以下問(wèn)題，可通過(guò)這些方法進(jìn)行處理。

5.1 對(duì)照值偏小

儀器工作以前，應(yīng)先預(yù)熱5～10 min，使儀器狀態(tài)穩(wěn)定；其次，將顯色劑和底物加入提取液后的時(shí)間嚴(yán)格控制，加入底物后應(yīng)立即檢測(cè)，盡量縮短操作時(shí)間。

5.2 樣品吸光值偏高

這現(xiàn)象是由于酶本身活性低、樣品待測(cè)液顏色深以及反應(yīng)中化學(xué)和物理干擾所造成。解決辦法：①將酶和其他試劑恢復(fù)至室溫，酶用前要搖勻；②制樣時(shí)樣品切成見(jiàn)方為宜，不可過(guò)碎，以免色素、纖維素等成分釋放。果實(shí)類蔬菜如西紅柿等應(yīng)避免汁水帶入樣品中導(dǎo)致試樣混濁，爛葉、枯葉中的某些成分也會(huì)導(dǎo)致溶液混濁，干擾測(cè)定；③發(fā)現(xiàn)樣品混濁時(shí)，適當(dāng)增加靜置時(shí)間，可消除上述不利影響的發(fā)生；④嚴(yán)格控制提取時(shí)間，時(shí)間過(guò)短不能有效提取蔬菜表面的農(nóng)藥殘留，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)把蔬菜中的色素提取。

5.3 檢測(cè)結(jié)果中抑制率不正常

對(duì)照測(cè)試時(shí)間與樣品測(cè)試時(shí)間相隔太久，導(dǎo)致對(duì)照與樣品測(cè)試溫度條件相差較大；其次，跟試劑的取用量是否準(zhǔn)確有關(guān)。

5.4 辛辣蔬菜等農(nóng)藥殘留假陽(yáng)性問(wèn)題

某些蔬菜如蔥（含有揮發(fā)性硫化物）、姜（含有姜辣素）以及蒜類（含硫揮發(fā)物，如硫化亞磺酸）等，蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，會(huì)引起干擾產(chǎn)生假陽(yáng)性?？刹扇≡龃髽悠非袎K，減少浸提時(shí)間的方法。

6 注意事項(xiàng)

6.1 移液槍要正確使用

移液槍使用的好壞，決定著試劑的取用量是否準(zhǔn)確。使用時(shí)，吸頭管要牢固裝好，取樣時(shí)只按壓至第一停點(diǎn)，將吸頭置于液面下，慢慢松開(kāi)，千萬(wàn)不要按壓到底取液，會(huì)導(dǎo)致取液量偏大。為避免損壞液槍，移液槍的移液量不能超出其范圍，吸頭內(nèi)含有液體時(shí)不可將移液槍水平放置，不使用時(shí)，將量程調(diào)為最大。

6.2 酶試劑的保存及使用

平常要在0～5℃環(huán)境條件下冷藏保存，酶試劑使用前要晃均勻，即用即取，要防止其他物質(zhì)的污染，以免溶液中毒失效。

6.3 試劑“只出不進(jìn)”

每次測(cè)試時(shí)，從試劑瓶中抽取的試劑不管是否使用，只要吸出來(lái)了，用不上或用不了，即使造成浪費(fèi)也不要打回去。否則容易污染整瓶試劑，造成更大的損失，甚至影響以后所有的測(cè)試，產(chǎn)生錯(cuò)誤的測(cè)試數(shù)據(jù)。

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2017-03-06）