馮倩倩，陳 飛，安靖霏，劉皈陽

HPLC法測(cè)定苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑中苯酚的含量

馮倩倩，陳 飛，安靖霏，劉皈陽*

目的 建立HPLC法測(cè)定苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑中苯酚的含量。方法 色譜柱：Agilent ZorBax SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-水(40∶60)；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果 苯酚在10.08～101.6 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=9.515 X+0.288 9(r=1.000)；平均回收率分別為99.08%、99.29%，RSD分別為0.79%、0.66%。結(jié)論 該方法具有良好的準(zhǔn)確度、精密度、專屬性，能較好地控制苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑的質(zhì)量。

苯酚消毒液；復(fù)方薄荷腦醑；苯酚；HPLC；含量測(cè)定

0 引言

苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑均為含苯酚的醫(yī)院制劑，分別為《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》西藥制劑第2版外用溶液劑和醑劑項(xiàng)下的收錄品種，苯酚消毒液主要用于金屬器械浸泡消毒，復(fù)方薄荷腦醑主用于小兒皮膚止癢[1]。苯酚作為酚類有機(jī)物，具有殺菌、消毒、防腐的作用。但苯酚有毒，對(duì)皮膚、黏膜有強(qiáng)烈的腐蝕、刺激作用，需要進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，確保制劑能夠發(fā)揮相應(yīng)的作用，同時(shí)避免不良反應(yīng)的發(fā)生。另外，因苯酚具有一定的揮發(fā)性，環(huán)境因素對(duì)制劑的影響較大，因此，有必要建立合適的質(zhì)量控制方法，監(jiān)測(cè)制劑中苯酚的含量變化[2]。目前，原標(biāo)準(zhǔn)中苯酚項(xiàng)下的含量檢測(cè)方法均為溴量法，在操作過程中需要用到溴液和易制毒試劑三氯甲烷，且操作復(fù)雜，步驟繁瑣，影響因素多，試驗(yàn)誤差較大，且溴液在標(biāo)準(zhǔn)溫度下易揮發(fā)為有毒的溴蒸汽，會(huì)對(duì)分析測(cè)試人員的身體健康產(chǎn)生不良影響。為更好地控制制劑質(zhì)量，本文參照相關(guān)文獻(xiàn)[3-8]建立HPLC法測(cè)定苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑中苯酚的含量，方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便快速。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀：包括四元泵，VWD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation化學(xué)工作站；梅特勒-托利多MS105DU型電子天平；賽默飛Evolution 201型紫外分光光度計(jì)。

1.2 試藥 苯酚對(duì)照品(批號(hào)：100509-201203，中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用)；薄荷腦(批號(hào)：150901，南通薄荷廠有限公司)；乙醇(批號(hào)：20051001，北京貞玉民生藥業(yè)有限公司)；碳酸氫鈉(批號(hào)：150107，河北華晨藥業(yè)有限公司)；甘油(批號(hào)：20140616，浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司)；復(fù)方薄荷腦醑(批號(hào)：160218、160219、160220，解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院)；苯酚消毒液(批號(hào)：160213、160214、160215，解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院)；甲醇為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 色譜柱：Agilent ZorBax SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(40∶60)；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苯酚對(duì)照品100.8 mg，置100 mL量瓶，用水溶解并定量稀釋制成每1 mL中含1.008 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為50.40 μg/mL的苯酚對(duì)照品溶液。

2.2.2 苯酚消毒液供試品溶液的制備 精密量取苯酚消毒液2.5 mL置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取上述稀釋液5 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得苯酚消毒液供試品溶液。

2.2.3 復(fù)方薄荷腦醑供試品溶液的制備 精密量取復(fù)方薄荷腦醑1 mL置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得復(fù)方薄荷腦醑供試品溶液。2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 分別按處方比例制備不含苯酚的苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 依次分別精密量取苯酚對(duì)照品溶液、苯酚消毒液供試品溶液、復(fù)方薄荷腦醑供試品溶液、苯酚消毒液陰性對(duì)照溶液和復(fù)方薄荷腦醑陰性對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)下液相色譜條件注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，苯酚消毒液陰性對(duì)照溶液和復(fù)方薄荷腦醑陰性對(duì)照溶液在苯酚對(duì)照品峰處均無干擾。見圖1。

圖1 苯酚高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、2.5、5、10 mL，置50 mL量瓶中；量取2.5 mL置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為10.08、25.20、50.41、100.8、201.6 μg/mL的系列溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以苯酚濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=9.515 X+0.288 9(r=1.000)，結(jié)果表明，苯酚在10.08～201.6 μg/mL的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的苯酚對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算苯酚對(duì)照品峰面積的RSD為0.13%。結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的苯酚消毒液樣品(批號(hào)：160218)和同一批號(hào)的復(fù)方薄荷腦醑樣品(批號(hào)：160213)，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法各制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算苯酚峰面積的RSD分別為1.09%、1.71%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的苯酚消毒液(批號(hào)：160218)和復(fù)方薄荷腦醑(批號(hào)：160213)供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，苯酚峰面積的RSD為0.28%、0.52%。結(jié)果表明，室溫條件下苯酚消毒液和復(fù)方薄荷腦醑供試品溶液中苯酚在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密量取苯酚消毒液陰性對(duì)照樣品2.5 mL置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取上述稀釋液5 mL置50 mL量瓶中，按低、中、高3個(gè)劑量組，分別精密加入“2.2.1”項(xiàng)下苯酚對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0、2.5、3.0 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，每個(gè)劑量組各取3份，共9份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算苯酚的回收率。結(jié)果見表1。精密量取復(fù)方薄荷腦醑陰性對(duì)照樣品1 mL，置100 mL量瓶中，按低、中、高3個(gè)劑量組，分別精密加入“2.2.1”項(xiàng)下苯酚對(duì)照品儲(chǔ)備液4.0、5.0、6.0 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，每個(gè)劑量組各取3份，共9份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算苯酚的回收率。結(jié)果見表2。

表1 苯酚消毒液回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表2 復(fù)方薄荷腦醑回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定 分別取苯酚消毒液樣品、復(fù)方薄荷腦醑樣品各3批，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算樣品中苯酚的含量。結(jié)果3批苯酚消毒液(批號(hào)：160218、160219、160220)的苯酚含量分別為2.03%、1.96%、2.01%，RSD分別為0.40%、0.63%、0.44%；3批復(fù)方薄荷腦醑(批號(hào)：160213、160214、160215)的苯酚含量分別為0.50%、0.52%、0.49%，RSD分別為0.37%、0.26%、0.40%。

3 討論

因苯酚為酚類有機(jī)物，具有很強(qiáng)的還原性，在空氣中易被氧化，生成帶紅色的醌類化合物，致使制劑中苯酚的含量逐漸下降，影響治療效果，故在儲(chǔ)存的過程中應(yīng)注意避光、密封保存。

取苯酚對(duì)照品溶液，在210～1 100 nm波長(zhǎng)處用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)苯酚在212和270 nm處有特征性吸收。210 nm處流動(dòng)相中甲醇的末端吸收會(huì)對(duì)色譜基線產(chǎn)生干擾，而且制劑中其他成分的干擾也較大，色譜分離結(jié)果較差；而采用270 nm測(cè)定苯酚的含量，可以避免制劑中其他成分的干擾，獲得令人滿意的分離效果，可以準(zhǔn)確測(cè)定制劑中制劑的含量。

通過比較甲醇-水、乙腈-水、甲醇-鹽酸溶液、甲醇-冰醋酸溶液等多種流動(dòng)相體系對(duì)苯酚分離測(cè)定的影響，發(fā)現(xiàn)采用甲醇-水作為流動(dòng)相體系可以取得良好的分離效果，系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果符合要求。另外，優(yōu)化不同比例甲醇-水流動(dòng)相體系，發(fā)現(xiàn)在60∶40時(shí)，苯酚的分離效果良好但出峰時(shí)間較短，通過增加水相比例達(dá)40∶60時(shí)，可以延長(zhǎng)出峰時(shí)間，分離效果較好，對(duì)陰性對(duì)照品溶液無干擾，而且出峰時(shí)間適中。故選用甲醇-水(40∶60)的比例作為檢測(cè)用流動(dòng)相。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1995:22-23,81-82.

[2] 陳曉峰,沈花.高效液相色譜法測(cè)定消炎止癢醑中苯酚的含量[J].抗感染藥物,2011,8(4):268-270.

[3] 蓋靜,王俊麗,安寶文,等.HPLC-DAD法測(cè)定復(fù)方樟腦搽劑中樟腦和苯酚的含量[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(2):87-89.

[4] 孫建華.HPLC法測(cè)定薄荷苯酚軟膏中苯酚含量[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2015,32(1):78-79.

[5] 楊小林,尚慶霞,邱棟梁,等.HPLC法測(cè)定苯酚乳膏中苯酚的含量[J].中國(guó)藥師,2011,14(7):1059-1060.

[6] 蔡樂,白林,徐風(fēng)華,等.HPLC法測(cè)定薄荷苯酚軟膏中苯酚的含量[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè),2014,11(2):82-84.

[7] 楊小林,尚慶霞,邱棟梁,等.HPLC法測(cè)定薄荷腦苯酚酊中苯酚的含量[J].北方藥學(xué),2013,10(8):12.

[8] 荊凡波,程顯隆,馬雙成,等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方硼砂溶液中苯酚的含量[J].藥物分析雜志,2010,30(1):28.

Determination of phenol in phenol solution for disinfection and compound menthol spirit by HPLC

FENG Qian-qian,CHEN Fei,AN Jing-fei,LIU Gui-yang*

(Department of Pharmacy,First Affiliated Hospital of Chinese PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for determination of phenol in phenol solution for disinfection and compound menthol spirit.Methods Agilent ZorBax SB-C18(4.6 mm×350 mm,5 μm)was used,the mobile phase consisted of methanol-water (40∶60),the detection wavelength was set at 270 nm,the flow rate was 1.0 mL/min,and the injection volume was 10 μL.Results A good linear relationship was observed on phenol in the range of 10.08～101.6 μg/mL with linear equation Y=9.515 X+0.288 9 (r=1.000).The average recovery was 99.08% and 99.29%,withRSDbeing 0.79% and 0.66%.Conclusion This method has a good accuracy,precision and specialization.It can be used for the determination of the quality of phenol solution for disinfection and compound menthol spirit.

Phenol solution for disinfection;Compound menthol spirit;Phenol;HPLC;Contentd determination

2016-04-28

解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100048

原《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》外用液體制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(13ZJZ17-2)

10.14053/j.cnki.ppcr.201612019

*通信作者