尹太坤，楊 方，劉正才 ，林永輝

( 1.福州大學(xué) 石油化工學(xué)院 福建 福州 350108； 2.福建出入境檢驗(yàn)檢疫局 檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，福建 福州 350001 )

鰻鱺肌肉中孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠染料殘留標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制

尹太坤1，楊 方2，劉正才2，林永輝2

( 1.福州大學(xué) 石油化工學(xué)院 福建 福州 350108； 2.福建出入境檢驗(yàn)檢疫局 檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，福建 福州 350001 )

為建立鰻鱺肌肉中孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠染料殘留標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制和定值方法，以一定質(zhì)量濃度孔雀石綠對(duì)鰻鱺進(jìn)行藥浴給藥，使孔雀石綠在魚體內(nèi)自然代謝，從而使鰻鱺體內(nèi)含有隱性孔雀石綠殘留。經(jīng)均質(zhì)、真空包裝及輻照處理后，獲得一批500個(gè)獨(dú)立包裝的的鰻鱺肌肉樣本。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)該樣本進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)，經(jīng)8家獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室協(xié)同定值及不確定度評(píng)估，其特性值為2.82 μg/kg，擴(kuò)展不確定度為0.39 μg/kg(k=2)。所建立的制備方法為染料殘留鰻鱺基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室制備提供了一種參考。

鰻鱺肌肉；隱性孔雀石綠；殘留；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了的特性值，用于校準(zhǔn)設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)[1]，在保證分析方法的準(zhǔn)確性及可溯源性方面具有重要作用[2]。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為純品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)兩類，后者的候選材料獲取于天然基體，目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測(cè)樣品完全一致，在分析中可有效避免基體效應(yīng)對(duì)物質(zhì)成分分析的影響。

孔雀石綠屬三苯甲烷類染料，曾作為驅(qū)蟲劑和殺菌劑廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，其在生物體內(nèi)會(huì)代謝為隱性孔雀石綠[3]。隱性孔雀石綠具有較高的親脂性，在魚類脂肪組織中代謝速度較慢，會(huì)形成穩(wěn)定殘留并有明顯的蓄積現(xiàn)象[4-5]。由于孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠具有致癌性、高毒性、高殘留的特點(diǎn)[6-10]，美國(guó)、日本、歐盟等國(guó)家已禁止孔雀石綠在水產(chǎn)品中使用, 我國(guó)也于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》 中嚴(yán)禁使用。因此，孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠已成為殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)項(xiàng)目，開展食品中殘留監(jiān)控具有重要意義。

近年來有報(bào)道關(guān)于含藥物殘留的動(dòng)物源基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制[11-15]，但尚未見含孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠染料殘留的鰻鱺(Anguillajaponica)肌肉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本文介紹了以鰻鱺肌肉為基體的含孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制過程，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已在實(shí)際工作中得到應(yīng)用，用于檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters UPLC/Premier超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源(美國(guó)Waters公司)；直線電子加速器(同方威視IS075型，7.5 MeV，5 kW)；勻漿機(jī)(丹麥FOSS公司)；拍擊均質(zhì)器(英國(guó)Seward公司)；Bond Elut 氧化鋁SPE固相萃取柱(中性，安捷倫科技有限公司)。

隱性孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98.5%)和隱性孔雀石綠-D6氚代同位素內(nèi)標(biāo)(純度≥99.8%)，均購(gòu)于德國(guó) Dr.Ehremstorfer公司；乙腈為色譜純，購(gòu)于德國(guó)Merck公司；包裝材料：鋁箔復(fù)合材料平口袋為外包裝，聚乙烯平口袋作內(nèi)袋。

1.2 自然污染樣本的制備

選取約250 g已確認(rèn)不含目標(biāo)物的鰻鱺，于養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖，水溫20～22 ℃，采用空氣泵24 h增氧。配制質(zhì)量濃度約為0.03 mg/L的孔雀石綠溶液，以全池噴灑方式給藥，用藥3 d后采集陽(yáng)性樣本，均質(zhì)混勻，制成肉糜。采用雙層復(fù)合袋獨(dú)立真空包裝，每袋約15 g，粘貼樣品標(biāo)簽，獲得獨(dú)立包裝樣本500個(gè)。

1.3 樣品均勻性與穩(wěn)定性檢驗(yàn)

隨機(jī)抽取15份獨(dú)立包裝樣品，取樣量為2 g，以每個(gè)樣品3次重復(fù)測(cè)試數(shù)據(jù)為一組，每種藥物共15組45個(gè)數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析法(F-檢驗(yàn))檢驗(yàn)樣品的均勻性。

穩(wěn)定性檢驗(yàn)分為長(zhǎng)期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性進(jìn)行，長(zhǎng)期穩(wěn)定性共進(jìn)行7個(gè)月，每月取樣1次，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，以平均值作為檢測(cè)結(jié)果。短期穩(wěn)定性通過模擬樣品運(yùn)輸條件，利用F-檢驗(yàn)法對(duì)檢測(cè)結(jié)果的均勻性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.4 定值及溯源性

本批標(biāo)準(zhǔn)品由8家認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室為本殘留質(zhì)量控制樣品協(xié)同定值，檢測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)夏皮洛—威爾克檢驗(yàn)[16]、柯克倫檢驗(yàn)及格拉布斯檢驗(yàn)[17]后取平均值進(jìn)行定值。特性值不確定度UCRM參照《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》[18]進(jìn)行評(píng)估。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在空間上具有溯源量值的功能[19]。本研究選擇的溯源路線是，用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)內(nèi)標(biāo)法定量確定含量，通過有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溯源到基準(zhǔn)單位[20]。以有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制的隱形孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液制作校準(zhǔn)曲線；測(cè)量前對(duì)所有計(jì)量?jī)x器(分析天平、容量瓶、移液槍等)進(jìn)行了校準(zhǔn)，考慮其示值不確定度；分析方法采用《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》[21]；具有資質(zhì)的8家實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢測(cè)情況選用不同的已被證實(shí)的檢測(cè)方法定值等，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和溯源性[22]。

1.5 樣品的分析方法

按《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》[21]檢測(cè)樣品中隱性孔雀石綠殘留量。采用乙腈超聲提取，經(jīng)中性氧化鋁柱凈化后，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。檢測(cè)離子對(duì)m/z：331.3/315.7(定量)、331.3/239.5(定性)、337.3/240.2(LMG-D6)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鰻鱺體內(nèi)藥物代謝

進(jìn)行鰻鱺給藥試驗(yàn)，連續(xù)藥浴2 d后停用藥物，清洗水池，換100%清水(不含藥物)養(yǎng)殖。經(jīng)取樣檢測(cè)，鰻鱺肌肉中隱性孔雀石綠的殘留量隨藥后時(shí)間的變化趨勢(shì)見圖1。隨時(shí)間的推移，血液和鰻鱺肌肉中隱性孔雀石綠的殘留量均先升后降。空白樣本于施藥前采集，陽(yáng)性樣本的采集時(shí)間考慮到預(yù)期質(zhì)量濃度范圍，選擇藥后第3 d采集自然污染樣本。將空白樣本與陽(yáng)性樣本分別宰殺，去頭、放血、除去內(nèi)臟和魚皮，置于冰柜-18 ℃冷凍保存。

圖1 鰻鱺肌肉中隱性孔雀石綠殘留量隨藥后時(shí)間變化

2.2 樣本的制備

將鰻鱺肌肉切段(每段長(zhǎng)約2 cm)置于勻漿機(jī)中，3000 r/min 轉(zhuǎn)速攪成糜樣并勻漿5 min；以4 kg/次的鰻鱺肌肉量攪拌3次，混合后再于大桶中人工攪拌20 min；再采用拍擊式均質(zhì)器進(jìn)行二次混勻：將樣品裝入拍擊袋，置于拍擊式均質(zhì)器中，按180拍/min的頻率，每次拍擊5 min后取出，再進(jìn)行更換拍擊，如此反復(fù)拍擊3次。對(duì)陽(yáng)性肌肉樣本，采用搗碎勻漿、拍擊均質(zhì)和人工攪拌相結(jié)合的工藝，保障了樣本的均勻性。選用聚乙烯平口袋為內(nèi)袋，鋁箔復(fù)合材料為外袋的雙層包裝袋進(jìn)行真空包裝后，對(duì)樣本進(jìn)行60Co-γ輻照滅菌，有效延長(zhǎng)了保質(zhì)期。輻照前后樣本中隱性孔雀石綠殘留量見表1，結(jié)果表明經(jīng)60Co-γ輻照后，鰻鱺基體中隱性孔雀石綠基本不降解，輻照后目標(biāo)物含量仍處于預(yù)期質(zhì)量濃度范圍內(nèi)。

表1 60Co-γ輻照對(duì)鰻鱺肌肉中隱性孔雀石綠殘留量的影響

2.3 樣品譜圖

0.5 μg/kg 隱性孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖2a；陽(yáng)性樣本按1.5前處理后上機(jī)檢測(cè)，得到離子監(jiān)測(cè)色譜圖(樣本含量2.91 μg/kg)見圖2b。由圖2可見，各離子對(duì)的峰形良好，且目標(biāo)物出峰處無(wú)雜峰干擾，方法檢出限為0.5 μg/kg，由此可見，制備的鰻鱺肌肉中隱性孔雀石綠的質(zhì)量濃度適當(dāng)。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)溶液(a) 及樣品(b)的選擇離子監(jiān)測(cè)色譜圖

2.4 均勻性檢驗(yàn)

隨機(jī)抽取15份獨(dú)立包裝樣品，每個(gè)樣品平行檢測(cè)3次。以每袋含量的平均值作為對(duì)袋序號(hào)的函數(shù)來研究樣品制備中的趨勢(shì)和分裝過程的邏輯關(guān)系(圖3)。由此可見樣品制備中的趨勢(shì)穩(wěn)定；分裝均一，數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

對(duì)檢測(cè)結(jié)果采用單因素方差分析法(F-檢驗(yàn))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差分析結(jié)果見表2。F值=1.1820.05，表明顯著水平α=0.05時(shí)，其結(jié)果均未見顯著差異，從而可以判定所研制的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是均勻的。

圖3 樣本均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)平均值

表2 鰻鱺肌肉中隱形孔雀石綠殘留量的均勻性方差分析

2.5 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.5.1 短期穩(wěn)定性

短期穩(wěn)定性試驗(yàn)?zāi)M樣品運(yùn)輸條件，將樣本分別置于-70 ℃、4 ℃、室溫、陽(yáng)光下曝曬條件下保存14 d后測(cè)定，考察短周期穩(wěn)定性。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)試3次，采用單因素方差分析法，分析結(jié)果見表3。在顯著水平α=0.05時(shí)，F(xiàn)=0.501

表3 短期穩(wěn)定性方差分析

2.5.2 長(zhǎng)期穩(wěn)定性

《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》[18]提供了2種檢驗(yàn)方法，余孔捷等[12,14-15]采用F檢驗(yàn)法檢驗(yàn)一元線性回歸模型的顯著性，通過評(píng)估回歸方差，檢驗(yàn)MSreg與s2比值的顯著性，對(duì)于95%的置信水平，當(dāng)P≥0.05時(shí)，表示回歸不顯著，判定為樣品穩(wěn)定。楊麗君等[23]采用t檢驗(yàn)法，通過誤差分析計(jì)算回歸參數(shù)b1(斜率)的標(biāo)準(zhǔn)偏差s(b1)，當(dāng)滿足|b1|0.05，表示回歸不顯著，從而可以判定所研制的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在7個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的。目前該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性試驗(yàn)仍在繼續(xù)監(jiān)控。

表4 隱性孔雀石綠長(zhǎng)期穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果(n=3) μg/kg

表5 長(zhǎng)期穩(wěn)定性方差分析

3 討 論

3.1 協(xié)同定值與離群值檢驗(yàn)

本批標(biāo)準(zhǔn)品采用多實(shí)驗(yàn)室協(xié)同定值的方案，大連出入境檢驗(yàn)檢疫局、浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局、河北出入境檢驗(yàn)檢疫局、廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局、廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局、深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局、福建中檢華日有限公司、福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院8家具有檢測(cè)資質(zhì)的機(jī)構(gòu)共同定值，分別用1～8編號(hào)表示。雖檢測(cè)環(huán)境、儀器條件、檢測(cè)人員不同，但均采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定(n=3)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果見表6。

表6 協(xié)同定值 μg/kg

為保準(zhǔn)后續(xù)定值的準(zhǔn)確性，需對(duì)8家實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，剔除無(wú)效數(shù)據(jù)。楊方等[11-12,15]在定值前對(duì)各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值進(jìn)行了柯克倫檢驗(yàn)及格拉布斯檢驗(yàn)。對(duì)離群值進(jìn)行檢驗(yàn)之前，需對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)[14,22]。本研究為保證各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值無(wú)異常值，依次采用了夏皮洛-威爾克檢驗(yàn)、柯克倫檢驗(yàn)及格拉布斯檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。

3.1.1 正態(tài)分布檢驗(yàn)

檢驗(yàn)偏離正態(tài)分布的方法有圖文法、有方向檢驗(yàn)、多方向檢驗(yàn)、夏皮洛-威爾克檢驗(yàn)及愛潑斯—普利檢驗(yàn)等，參考《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和解釋-正態(tài)性檢驗(yàn)》[16]，根據(jù)8家實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)數(shù)據(jù)的情況，選取夏皮洛-威爾克檢驗(yàn)，n=24且P=α=0.05時(shí)P的分位數(shù)為0.916，計(jì)算得W值為0.970>0.916，所以在顯著性水平α=0.05上不拒絕零假設(shè)，即數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布。

3.1.2 柯克倫檢驗(yàn)

參考《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法》[17]，對(duì)8個(gè)參加協(xié)同定值的實(shí)驗(yàn)室提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行柯克倫檢檢?？驴藗悳?zhǔn)則嚴(yán)格應(yīng)用在所有標(biāo)準(zhǔn)差都是在重復(fù)性條件下，且由相同數(shù)目的測(cè)試結(jié)果計(jì)算的情形。給定P個(gè)由相同的n次重復(fù)測(cè)試結(jié)果計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)偏差Si(表6)，在P=8，n=3時(shí)，柯克倫的臨界值為C0(1%)=0.615，C0(5%)=0.516，8個(gè)實(shí)驗(yàn)室的柯克倫檢驗(yàn)的結(jié)果為0.3060，即C=0.3060<0.516[C0(5%)]，則8個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果無(wú)異常值，均可參與后續(xù)檢驗(yàn)。

3.1.3 格拉布斯檢驗(yàn)

柯克倫所檢驗(yàn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異的檢驗(yàn)，僅對(duì)應(yīng)于一組標(biāo)準(zhǔn)差中的最大值，即單側(cè)離群值檢驗(yàn)，而格拉布斯檢驗(yàn)主要是對(duì)實(shí)驗(yàn)室間變異的檢驗(yàn)，因此有必要依次對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)室的均值分別進(jìn)行單值和雙值格拉布斯檢驗(yàn)[17]。

在P=8時(shí)，單值格拉布斯檢驗(yàn)的臨界值G1(1%,8)=2.274，G1(5%,8)=2.126，而8家實(shí)驗(yàn)室的單值格拉布斯檢驗(yàn)結(jié)果G11=1.3206，G1p=1.5982，均

在P=8時(shí)，雙值格拉布斯檢驗(yàn)的臨界值G2(1%,8)=0.0563，G2(5%,8)=0.1101，而雙值格拉布斯檢驗(yàn)結(jié)果G21=0.4238，G2p=0.4127，均>G2(5%,8)，因此所有單元的數(shù)據(jù)均為正確值，均可參與后續(xù)定值。

3.1.4 定值

數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)、柯克倫檢驗(yàn)及格拉布斯檢驗(yàn)，所有單元的數(shù)據(jù)均可保留并參與最終定值，定值結(jié)果為2.82 μg/kg。

3.2 不確定度評(píng)定

特性值不確定度UCRM的評(píng)定參照《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》[18]，由于本批次采用郵政網(wǎng)絡(luò)協(xié)同定值，因短期運(yùn)輸所引起的不確定度usts已包含在各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值中，不用再單獨(dú)計(jì)算。故本批次標(biāo)準(zhǔn)品的不確定度來源由3部分組成：測(cè)定值標(biāo)準(zhǔn)不確定度uchar、瓶間標(biāo)準(zhǔn)不確定度ubb、長(zhǎng)期穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)不確定度ults。

3.2.1 測(cè)定值標(biāo)準(zhǔn)不確定度uchar

包括實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)環(huán)境、儀器條件、檢測(cè)方法、檢測(cè)人員不同等產(chǎn)生的不確定度，各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差s=0.3392；即定值不確定度

3.2.2 瓶間標(biāo)準(zhǔn)不確定度ubb

瓶間不均勻性產(chǎn)生的不確定度

式中瓶間標(biāo)準(zhǔn)偏差的平方

重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差

3.2.3 長(zhǎng)期穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)不確定度ults

本批次標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了為期7個(gè)月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢測(cè)(t=7)，采用直線為經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，假設(shè)特性值Y以初始值Y0以一個(gè)常數(shù)b1線性降解(b1為相對(duì)降解速率)，為時(shí)間X的函數(shù)：Y(b0,b1,X)=Y0(1+b1X)。特性值的不確定度可通過將自變量Y0，X和b1的不確定度傳播給因變量Y得到[24,25]。

在沒有顯著降解的情況下，長(zhǎng)期穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)不確定度ults=s(b1)×t=0.136 μg/kg

3.3 日常使用運(yùn)輸與儲(chǔ)存條件

從-18 ℃保存的樣本看未見微生物腐敗、變質(zhì)情況出現(xiàn)，可保持7個(gè)月目標(biāo)物長(zhǎng)期穩(wěn)定；協(xié)同定值是在常溫條件下將所制得的鰻鱺樣本通過郵政網(wǎng)絡(luò)傳遞給8家實(shí)驗(yàn)室，從反饋的樣品接收狀態(tài)看，所有實(shí)驗(yàn)室均未有諸如脹包、樣品變質(zhì)等不正常樣品狀態(tài)的報(bào)告；樣品傳遞后的檢測(cè)結(jié)果也驗(yàn)證了樣品中目標(biāo)物的短期穩(wěn)定性。綜合評(píng)估認(rèn)為所制樣品可以常溫傳遞。故該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保存條件為-18 ℃冷凍密封保存，短期運(yùn)輸條件(≤14 d)為常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)可以采用冰袋冷凍方式。

4 結(jié) 論

本研究采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，多家實(shí)驗(yàn)室郵政網(wǎng)絡(luò)協(xié)同定值，制得一批含有孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠染料殘留的鰻鱺肌肉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。結(jié)果量值可靠，均勻性和穩(wěn)定性良好，孔雀石綠代謝物隱性孔雀石綠特性值為(2.82±0.39) μg/kg(k=2)。本研究建立的研制和定值方法對(duì)進(jìn)一步開展藥用染料殘留檢測(cè)用基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制具有重要的意義。

[1] 全浩, 韓永志. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其應(yīng)用技術(shù)[M]. 2版.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2002.

[2] Zakaria O, Rezali M F. Reference materials as a crucial tools for validation and verification of the analytical process[J]. Procedia Soc Behavl Sci， 2014 ,121(2)：204-213.

[3] 徐向榮, 郝青, 彭加喜, 等. 水產(chǎn)品中殘留孔雀石綠研究進(jìn)展[J]. 熱帶海洋學(xué)報(bào), 2013,32 (4)：97-106.

[4] 張瀾瀾, 李桂偉, 花麗茹, 等. 禁用獸藥—孔雀石綠[J]. 黑龍江水產(chǎn), 2015(1)：43-44.

[5] 張藝蓓, 岳田利, 喬海鷗, 等. 超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)魚中孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物[J].食品科學(xué), 2014, 35(10)：179-184.

[6] Doerge D R, Chang H C, Divi R L, et al. Mechanism for inhibition of thyroid peroxidase by leucomalachite green [J]. Chem Res Toxicol, 1998, 11(9)：1098-1104.

[7] He H, Yang S, Yu K, et al. Microwave induced catalytic degradation of crystal violet in nano-nickel dioxide suspensions[J]. J Hazard Mater, 2010, 173(1/3)：393-400.

[8] Culp S J, Mellick P W, Trotter R W, et al. Carcinogenicity of malachite green chloride and leucomalachite green in B6C3F1 mice and F344 rats[J]. Food Chem Toxicol, 2006, 44(8)：1204-1212.

[9] Srivastava S, Sinha R, Roy D. Toxicological effects of malachite green[J]. Aquat Toxicol, 2004, 66(3)：319-329.

[10] 朱萬(wàn)燕, 劉玉芳, 劉冰, 等. 同位素內(nèi)標(biāo)法測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2011, 30(12)：781-784.

[11] 楊方, 楊守深, 盧聲宇, 等. 鰻鱺肌肉凍干粉中呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-(噁)唑烷酮?dú)埩魳?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制[J]. 分析化學(xué), 2010, 38(3)：397-400.

[12] 余孔捷, 楊方, 劉正才, 等. 含氟甲喹殘留的鰻鱺肉糜自然基體標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備[J]. 色譜, 2011, 29(7)：691-695.

[13] 時(shí)文春, 馮燕平, 李開鋒, 等. 魚肉中氯霉素標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2012, 31(10)：1339-1344.

[14] 黃超群, 謝文, 侯建波, 等. 蜂王漿凍干粉中甲硝唑殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品制備的研究[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2013, 32(4)：512-518.

[15] 余孔捷, 劉正才, 黃杰, 等. 含喹諾酮類多殘留鰻糜自然基體標(biāo)準(zhǔn)樣品快速制備[J]. 分析試驗(yàn)室, 2015, 34(2)：182-185.

[16] 國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. GB/T 4882—2001，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和解釋—正態(tài)性檢驗(yàn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

[17] 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院. GB/T6379.2—2004，測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.

[18] 全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)樣品技術(shù)委員會(huì). GB/T 15000.3—2008，標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[19] 韋英亮, 潘艷坤. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)期間核查溯源性定值分析方法[J]. 化學(xué)分析計(jì)量, 2012, 21(5)：101-103.

[20] 盧曉華. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溯源性與分級(jí)[J]. 中國(guó)計(jì)量, 2007(7)：39-41.

[21] 全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì). GB/T 19857—2005，水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005.

[22] 韓永志, 韓冰. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值的溯源性及不確定度[J]. 化工標(biāo)準(zhǔn)·計(jì)量·質(zhì)量, 2002(10)：22-24.

[23] 楊麗君, 梁君妮, 曹鵬, 等. 魚肉中氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備[J]. 食品科學(xué), 2015, 36(14)：176-180.

[24] Van der Veen A M H, Linsinger T P J, Schimmel H, et al. Uncertainty calculations in the certification of reference materials 4. Characterisation and certification[J]. J Accred Qual Assur， 2001, 6(7)：290-294.

[25] Linsinger T P J, Pauwels J, Lamberty A， et al. Estimating the uncertainty of stability for matrix CRMs[J]. Fresenius J Anal Chem,2001, 370(2/3)：183-188.

DevelopmentofaReferenceMaterialforLeucomalachiteGreenResiduesinEelMuscle

YIN Taikun1，YANG Fang2，LIU Zhengcai2，LIN Yonghui2

( 1. School of Chemical Engineering, Fuzhou University, Fuzhou 350108, China; 2. Technology Centre of Fujian Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China )

Eel (Anguillaanguilla) was bathed in malachite green at certain concentration to make the malachite green enter the eel and contain leucomalachite green (LMG) in muscle via metabolism to establish a method for the preparation and certification of the reference material of leucomalachite green (LMG) residues in the muscle. The positive 500 bags of samples of eel were performed in one batch by the procedure of homogenation, vacuum packing and irradiation. The homogeneity and stability of samples were detected by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The concentration of the chemical constituent of the sample was certified through the collaborative analysis program participated by 8 laboratories, and the uncertainty assessment was performed with property value of 2.82 μg/kg, and the expanded uncertainty of 0.39 μg/kg(k=2). It is concluded that the preparation method for matrix reference materials for the dye residues provides one kind of reference.

eel muscle; leuco malachite green; residue ; reference material

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.03.014

S912

A

1003-1111(2016)03-0272-06

2015-08-24；

2015-10-08.

質(zhì)檢公益項(xiàng)目(201310143-02);福建省科技重點(diǎn)項(xiàng)目(2012Y6001).

尹太坤(1988-)，男，碩士研究生;研究方向：食品安全分析.E-mail:1257005106@qq.com.通訊作者: 楊方(1969-)，女，主任技師;研究方向：農(nóng)獸藥殘留檢測(cè).E-mail:yangf@fjciq.gov.cn.