韓燁晨，張 娟，王俊武，員世宇，吳海萍，溫 爽，趙冬冬，王 卓，蘇曉菲，朱昱波，程 佳，孫耀貴，王文魁，李宏全，段智變*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，太谷 030801；2.山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，太原 030024；3.河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，新鄉(xiāng) 453003)

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復(fù)方中藥對(duì)腹水綜合征肉雞肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量的作用

韓燁晨1，張 娟1，王俊武1，員世宇1，吳海萍1，溫 爽1，趙冬冬1，王 卓1，蘇曉菲2，朱昱波3，程 佳1，孫耀貴1，王文魁1，李宏全1，段智變1*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，太谷 030801；2.山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，太原 030024；3.河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，新鄉(xiāng) 453003)

本試驗(yàn)旨在研究腹水綜合征(AS)肉雞肝組織α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、I型膠原和III型膠原蛋白變化及復(fù)方中藥的防治作用。將309羽7日齡羅斯肉雞隨機(jī)分為6組，空白組正常飼養(yǎng)，其余5組飼養(yǎng)環(huán)境為9～11 ℃、高能飼料和高鈉飲水，模型組不給予任何藥物，中藥組(高、中、低劑量組)分別給予2、1、0.5 g·(kg·d)-1復(fù)方中藥，L-Arg組飼料中添加1% L-Arg。結(jié)果表明：15、25、35和45日齡，與空白組相比，模型組AS發(fā)病率、腹水心臟指數(shù)、心臟指數(shù)、肺臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量顯著增加(P<0.01或P<0.05)，脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.01或P<0.05)；與模型組相比，各劑量中藥組和L-Arg組均能改善上述指標(biāo)(P<0.01或P<0.05)。肉雞腹水綜合征肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量顯著上升，參與AS病理發(fā)生發(fā)展；氣血雙補(bǔ)、行氣利水的復(fù)方中藥能有效防治AS，其機(jī)制與復(fù)方中藥能顯著降低AS肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量相關(guān)。

復(fù)方中藥；肉雞腹水綜合征；α-SMA；I型膠原蛋白；III型膠原蛋白

腹水綜合征(ascites syndrome，AS)是主要發(fā)生于28～49日齡肉雞的一種營(yíng)養(yǎng)代謝病，病因涉及遺傳、缺氧、低溫、營(yíng)養(yǎng)和疾病等方面，臨床表現(xiàn)為腹水、右心肥大、肝和肺充血腫大，世界AS發(fā)病率約為25%[1]。

AS肉雞肝的變化是AS三大評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)之一[2]，剖檢可見(jiàn)肝充血腫大，有血漿凝塊附著。臨床表現(xiàn)和病理剖檢均提示AS中存在肝機(jī)能障礙，且有學(xué)者認(rèn)為AS中的腹水產(chǎn)生可能與肝損傷有關(guān)，其根本原因?yàn)槿毖鮗3]。哺乳動(dòng)物及人類醫(yī)學(xué)研究表明[4]，缺氧可直接損傷肝功能，引發(fā)肝纖維化，繼而形成腹水。因此，肝或許在AS發(fā)生發(fā)展中有重要作用。

α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin， α-SMA)是肝星狀細(xì)胞活化的特異性標(biāo)志物，肝星狀細(xì)胞活化是肝纖維化的中心環(huán)節(jié)[5]，因此α-SMA水平的變化與肝纖維化水平正相關(guān)。I型膠原的大量合成是肝纖維化和肝硬化發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分[6]。III型膠原則在肝星狀細(xì)胞活化較早期合成較多[7]。因此，α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量與肝纖維化水平密切相關(guān)。

中藥是具有整體調(diào)節(jié)機(jī)體各項(xiàng)功能特點(diǎn)的純天然產(chǎn)物，在畜禽各類疾病中具有獨(dú)特的治療優(yōu)勢(shì)和研究意義。本課題組前期結(jié)果表明[8]，復(fù)方中藥能通過(guò)影響NO、ET-1有效防治AS，本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同日齡AS肉雞肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量，并以當(dāng)歸、黃芪、丹參、茯苓等自擬復(fù)方中藥進(jìn)行治療觀察，為AS及其中藥防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

1日齡羅斯肉雞309羽(雌雄不限)及三段式飼養(yǎng)飼料(購(gòu)自山西省文水縣大象禽業(yè)有限公司)。常規(guī)育雛至7日齡，健康雞隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、L-Arg組和中藥組(分為高、中、低劑量組)，自由飲水采食。參考文獻(xiàn)方法[8-10]，對(duì)模型組、L-Arg組和中藥組采用低溫(9～11 ℃)、高能飼料(添加3%豬油、4%魚(yú)粉)、高鈉(飲水總Na+為0.12%)多因素法誘發(fā)肉雞腹水綜合征試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，L-Arg組在飼料中額外添加1% L-精氨酸，中藥組(高、中、低劑量組)在飲水中分別添加2、1、0.5 g·(kg·d)-1劑量復(fù)方中藥。

于15、25、35和45日齡隨機(jī)取10羽雞，稱重，處死后迅速剖取心、肺、肝和脾，測(cè)定臟器指數(shù)和腹水心臟指數(shù)，取部分肝組織樣品測(cè)定α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量。取35日齡肉雞肝組織部分樣品制作病理切片。

1.2 制備復(fù)方中藥藥劑

參考前期試驗(yàn)，選擇能影響肉雞NO和ET-1的復(fù)方中藥[8]，將當(dāng)歸、黃芪、丹參、茯苓以2∶3∶2∶2比例依次配比組方(藥材購(gòu)自山西省太谷縣藥材公司)，清水浸泡30 min后熬制40 min，收集藥液，重復(fù)3次，合并藥液過(guò)濾，減壓蒸餾濃縮至1 g·mL-1湯劑，-20 ℃保存?zhèn)溆茫曃骨皽鼗幚怼?/p>

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 常規(guī)指標(biāo) 通過(guò)觀察肉雞臨床癥狀(腹部膨大有波動(dòng)感)、剖檢結(jié)果(肝充血腫大，有血漿凝塊附著)和腹水量(大于20 mL)[9]判定AS發(fā)病。

腹水心臟指數(shù)(Ascites heart index, AHI)：右心室重與全心室重的比值(RV/TV)。取心臟，沿冠狀溝剪去兩心房，清除多余組織，稱取全心室重量(TV)，沿前后縱溝剪下右心室(RV)，稱重，計(jì)算AHI[5]。正常肉雞AHI小于0.219，AS肉雞 AHI大于0.250[11]。

臟器指數(shù)：臟器/體重。稱量剖取的心、肺、肝和脾，計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3.2 肝組織病理學(xué)觀察 取35日齡肉雞左側(cè)肝葉中間部分肝組織，10% 中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)切片5 μm，Masson染色觀察肝組織膠原。

1.3.3 肝組織α-SMA、I型膠原蛋白和III型膠原蛋白含量測(cè)定 取肝組織(0.1～0.2 g)，于冰冷生理鹽水中洗凈，拭干，稱重，按質(zhì)量(g)∶體積(mL)=1∶9加入0.9 %生理鹽水，在冰水浴環(huán)境下用勻漿機(jī)制備肝組織勻漿，3 000 r·min-1離心15 min，取上清液，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定肉雞肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量。

1.3.4 主要化學(xué)試劑及儀器設(shè)備 雞α-SMA蛋白ELISA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限公司)，雞I型膠原蛋白ELISA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限公司)，雞III型膠原蛋白ELISA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限公司)，高速冷凍離心機(jī)(D-375型，德國(guó)Sigma公司)，石蠟切片機(jī)(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械)，倒置熒光顯微鏡(IX81-F72FL/PH，日本Olympus公司)。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié) 果

2.1 發(fā)病率、體重、AHI及臟器指數(shù)

結(jié)果表明，模型組肉雞發(fā)育遲緩，個(gè)頭較小，被毛粗亂，食欲較差，腹部膨大著地，試驗(yàn)后期模型組肉雞腹部皮膚青紫發(fā)紺，脹滿下垂，站立困難，呼吸急促，腹部觸診有明顯波動(dòng)感，可抽出30～200 mL的稻草黃色液體。剖檢可見(jiàn)心室肥大，心包積液；肝淤血腫大，偶見(jiàn)斑駁的黃色病變；肺充血水腫等癥狀。各中藥組和L-Arg組肉雞臨床癥狀明顯改善。表1結(jié)果表明，根據(jù)試驗(yàn)方法中的肉雞臨床癥狀、剖檢結(jié)果和腹水量作為標(biāo)準(zhǔn)判定AS發(fā)病，模型組肉雞腹水綜合征累計(jì)發(fā)病率顯著高于空白組(P<0.01)，高、中劑量中藥組和L-Arg組發(fā)病率顯著低于模型組(P<0.01)。

表1 肉雞腹水綜合征發(fā)病率

Table 1 Incidence of broilers with AS

項(xiàng)目Item空白組GroupNone模型組GroupControlL-Arg組GroupL-Arg高劑量中藥組HighTCMgroup中劑量中藥組MiddleTCMgroup低劑量中藥組LowTCMgroup發(fā)病率/%Incidence(%)3.9(2/51)30.2A(16/53)9.8B(5/51)5.9B(3/51)11.8b(6/51)19.2(10/52)

括號(hào)內(nèi)為該組發(fā)病個(gè)體數(shù)和試驗(yàn)總數(shù)。與空白組對(duì)比，a.P<0.05，A.P<0.01；與模型組對(duì)比，b.P<0.05，B.P<0.01。下同

The number in bracket is individuals with AS and the total number in the corresponding group. compared with group None, a.P<0.05, A.P<0.01; compared with group Control, b.P<0.05, B.P<0.01. The same as below

表2結(jié)果表明，各日齡模型組肉雞體重均極顯著低于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和中劑量中藥組15、25、35日齡以及15日齡低劑量中藥組體重顯著高于模型組(P<0.01，P<0.05)；15、25、35日齡L-Arg 組體重顯著高于模型組(P<0.01或P<0.05)。

各日齡模型組AHI均極顯著高于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和各日齡中劑量中藥以及15日齡低劑量中藥組AHI顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；各日齡L-Arg組AHI極顯著低于模型組(P<0.01)。

各日齡模型組心臟指數(shù)均極顯著高于空白組(P<0.01)；15、25、45日齡高劑量中藥組和15、25、45日齡中劑量中藥組心臟指數(shù)顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、25、45日齡L-Arg組心臟指數(shù)極顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)。

各日齡模型組肺臟指數(shù)顯著高于空白組(P<0.01或P<0.05)；各日齡高劑量中藥組和25、35、45日齡中劑量中藥組以及45日齡低劑量中藥組肺臟指數(shù)顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、45日齡L-Arg組肺臟指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05)。

各日齡模型組肝臟指數(shù)顯著高于空白組(P<0.01或P<0.05)；各日齡高劑量中藥組肝臟指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05)；15、45日齡L-Arg組肝臟指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05)。

25、35、45日齡模型組脾臟指數(shù)顯著低于空白組(P<0.01或P<0.05)；35、45日齡高劑量中藥組脾臟指數(shù)顯著高于模型組(P<0.05)；35日齡L-Arg組脾臟指數(shù)顯著高于模型組(P<0.05)。

項(xiàng)目Item日齡Day空白組GroupNone模型組GroupControlL-Arg組GroupL-Arg高劑量中藥組HighTCMgroup中劑量中藥組MiddleTCMgroup低劑量中藥組LowTCMgroup體重/gBodyweight15482.0±18.4360.3±15.4A427.7±9.3B451.7±10.4B417±15.9B395±23.8b251014.0±39.6941.7±31.1A1047.3±36.6B1049.7±33.1B1002.7±30.3b947.7±27.8351803.0±131.01429.8±140.3A1650.7±33.2b1821.3±136.2B1618.3±102.3b1546.7±44.8452901.7±553.92280.8±120.9A2621.0±155.42886.3±11.2B2639.3±275.02416.2±91.9AHI150.1799±0.01280.2722±0.0116A0.2070±0.0214B0.2045±0.0177B0.2132±0.0144B0.2454±0.0183b250.1976±0.00740.2733±0.0137A0.2239±0.0070B0.2188±0.0185B0.2455±0.0072B0.2615±0.0075350.2205±0.01560.3376±0.0072A0.2662±0.0211B0.2571±0.0113B0.2959±0.0098B0.3208±0.0172450.2708±0.00890.3829±0.0203A0.3152±0.0116B0.3049±0.0126B0.3387±0.0096B0.3727±0.0124心臟指數(shù)/‰Heartindex156.138±0.1106.982±0.090A6.332±0.185B6.367±0.301B6.382±0.271b6.597±0.329254.492±0.3335.639±0.226A4.774±0.297B4.608±0.350B4.883±0.111b5.296±0.414353.850±0.2694.643±0.266A4.307±0.1374.402±0.0864.427±0.5194.574±0.130454.089±0.0585.150±0.316A4.681±0.281b4.416±0.154B4.697±0.159b4.940±0.211肺臟指數(shù)/‰Lungindex155.084±1.1806.825±0.604a5.428±0.248b5.127±0.615b5.696±0.6276.135±1.117254.385±0.6805.846±0.213A4.904±0.4134.346±0.392B4.565±0.648b5.112±0.756354.642±1.1015.795±0.624a4.987±0.3024.578±0.274B4.801±0.286b5.222±0.309454.974±0.3775.994±0.272A5.160±0.516b5.011±0.438B5.078±0.334B5.267±0.403b肝臟指數(shù)/%Liverindex152.739±0.1013.688±0.331A2.966±0.114b3.004±0.196b3.102±0.4773.202±0.266252.252±0.1642.710±0.282a2.302±0.1062.250±0.227b2.329±0.3442.614±0.253352.161±0.1842.554±0.179a2.170±0.1192.147±0.147b2.213±0.3582.370±0.166452.241±0.1822.503±0.066a2.272±0.192b2.242±0.201b2.296±0.2032.328±0.046脾臟指數(shù)/‰Spleenindex151.198±0.3900.712±0.1170.904±0.0471.065±0.5870.840±0.1330.732±0.150251.188±0.1530.808±0.101a1.003±0.2401.035±0.1990.963±0.1670.874±0.078351.538±0.2210.889±0.238A1.424±0.294b1.434±0.232b1.213±0.1911.085±0.245451.563±0.3350.874±0.140A1.181±0.2531.265±0.368b1.185±0.2341.002±0.140

2.2 35日齡肉雞肝組織病理學(xué)變化

圖1結(jié)果表明，35日齡空白組肝結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊，間隙中偶見(jiàn)少量纖維組織沉積；模型組肝結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞界限不清晰，間隙內(nèi)有大量纖維組織沉積；高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組和L-Arg組均對(duì)肝臟間隙內(nèi)纖維組織的沉積有不同程度的改善作用。

2.3 肝組織α-SMA蛋白含量

圖2顯示，各日齡模型組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量均極顯著高于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和15、35、45日齡中劑量中藥組以及15、45日齡低劑量中藥組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、35、45日齡L-Arg組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)。

2.4 肝組織I型膠原蛋白含量

圖3顯示，15、25、35日齡模型組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量極顯著高于空白組(P<0.01)；15、25、35日齡高劑量中藥組和15、25、35日齡中劑量中藥組以及15、25日齡低劑量中藥組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、25、35日齡L-Arg組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量極顯著低于模型組(P<0.01)。

A.空白組；B.模型組 ；C. L-Arg組：D.高劑量中藥組； E.中劑量中藥組；F.低劑量中藥組A. Group None; B. Group Control; C. Group L-Arg; D. High dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group; E. Middle dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group; F. Low dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group圖1 35日齡肉雞肝組織切片(Masson染色， 400×)Fig.1 Liver microscopic images of broilers at 35 days of age (Masson-trichrome, 400×)

圖2 肉雞肝組織α-SMA蛋白含量Fig.2 The level of α-SMA protein in liver of broilers

圖3 肉雞肝組織I型蛋白含量Fig.3 The level of collagen type I protein in liver of broilers

2.5 肝組織III型蛋白含量

圖4顯示，各日齡模型組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著高于空白組(P<0.01，P<0.05)；各日齡高劑量中藥組和各日齡中劑量中藥組以及25、35、45日齡低劑量中藥組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；各日齡L-Arg組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著低于模型組(P<0.05或P<0.01)。

圖4 肉雞肝組織III型蛋白含量Fig.4 The level of collagen type III protein in liver of broilers

3 討 論

肉雞腹水綜合征是一種常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)代謝病，肝是機(jī)體重要的代謝和解毒器官，在疾病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。本試驗(yàn)剖檢結(jié)果顯示，病雞腹腔內(nèi)有大量稻草黃色膠狀液體，肝門(mén)靜脈充血，肝充血腫大呈暗紅色，邊緣鈍圓，被膜緊張，表面有淡黃色血漿纖維蛋白凝塊附著，或呈斑駁黃色，表面不平，有膠狀凝塊附著。AS肉雞心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和肺臟指數(shù)顯著增加表明臟器發(fā)生增生、充血和腫大，脾臟指數(shù)顯著減小表明脾萎縮，免疫功能減退。

目前，對(duì)AS的研究主要集中在肺動(dòng)脈高壓、心功能等方面，而對(duì)肝的相關(guān)研究較少[1]。肝纖維化[12]是指肝細(xì)胞損傷、炎癥等病因?qū)е碌穆愿螕p傷，肝纖維結(jié)締組織病理性增生的過(guò)程，待發(fā)展到假小葉形成時(shí)則稱為肝硬化。哺乳動(dòng)物及人類醫(yī)學(xué)研究表明，正常肝內(nèi)含有少量細(xì)胞外基質(zhì)，正常Disse間隙由基底膜樣基質(zhì)構(gòu)成，主要為IV和VI型膠原蛋白，使肝竇內(nèi)維持相對(duì)穩(wěn)定的微循環(huán)。當(dāng)肝受到炎癥等刺激或損傷時(shí)，如脂肪性、非酒精性脂肪性肝炎[13]、病毒性肝炎[14]、酒精性肝纖維化[15]等疾病，肝星狀細(xì)胞被缺氧、炎癥因子等各種刺激激活，變成具有增生性、移動(dòng)性、收縮性和纖維原性的肌成纖維細(xì)胞，合成分泌α-SMA，因此α-SMA被認(rèn)為是肝星狀細(xì)胞活化的標(biāo)志[16]。當(dāng)連續(xù)的基底膜形成，內(nèi)皮窗孔消失，肝Disse間隙中富含IV和VI型膠原的低密度基底膜膠原轉(zhuǎn)化為富含纖維形成膠原的高密度間質(zhì)膠原，即I和III型膠原[17]。待發(fā)展到肝纖維化時(shí)，I和III型膠原蛋白含量可達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)的80%～95%[18]，此時(shí)肝小葉正常結(jié)構(gòu)喪失，促使炎癥介質(zhì)和活性氧產(chǎn)生，誘導(dǎo)肝細(xì)胞變性壞死[19]，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微孔減少，竇內(nèi)血流減少，肝竇內(nèi)壓力和肝內(nèi)血管阻力增加，血液動(dòng)力學(xué)改變，門(mén)靜脈系統(tǒng)血流增加，是形成門(mén)靜脈系統(tǒng)高壓的直接原因[20]，是腹水形成的主要原因之一。正常的肝纖維化病程較長(zhǎng)，但在肉雞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，由于遺傳育種學(xué)對(duì)肉雞增重性能的選擇，而沒(méi)有相應(yīng)改善其心肺功能，使肉雞能自發(fā)形成肺動(dòng)脈高壓，導(dǎo)致組織缺氧[21]，同時(shí)肉雞飼養(yǎng)過(guò)程中使用含有大量蛋白質(zhì)的飼料，提高機(jī)體代謝率，增加耗氧量，因此肝纖維化病程發(fā)展迅速。

中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AS癥候主要由氣血雙虛、氣滯血瘀、水濕停聚所致，因此治療AS宜活血行氣、化濕逐瘀、疏肝理氣，與中醫(yī)理論分析肝纖維化為正氣不足、肝血瘀阻、濕熱耗陰所致相似。本試驗(yàn)過(guò)程中，AS肉雞心、肝和肺充血腫大，脾萎縮，且肝呈肝纖維化癥狀，腹腔有大量稻草黃色腹水，病理組織學(xué)顯示肝細(xì)胞間隙中有大量膠原蛋白沉積，肝正常生理結(jié)構(gòu)被破壞。

人類醫(yī)學(xué)臨床常用補(bǔ)虛藥和活血化瘀等藥防治肝纖維化，如丹參、黃芪、柴胡、白術(shù)等[22]。動(dòng)物醫(yī)學(xué)常用腹水消[23]、苓桂術(shù)甘湯[24]等中藥防治AS發(fā)生。本試驗(yàn)中，AS肉雞肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量顯著升高，表明AS肉雞肝損傷，刺激肝組織大量合成α-SMA、I型和III型膠原蛋白，促進(jìn)腹水形成，參與AS發(fā)生發(fā)展，當(dāng)歸、黃芪、丹參、茯苓等組成的復(fù)方中藥和L-Arg能有效減少肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量，維持肝正常生理結(jié)構(gòu)，保護(hù)肝功能，有效防治AS。有研究表明，當(dāng)歸屬于重要的活血化瘀中藥，能在肝纖維化早、中期顯著減輕肝纖維化程度，降低肝內(nèi)膠原含量[25]；黃芪具有補(bǔ)中益氣等功效，是主要的扶正藥物之一，能明顯降低受損肝總膠原、I型、III型和V型膠原的含量[26]；丹參有活血祛瘀的功效，丹參酸乙是其主要成分之一，能顯著提高肝細(xì)胞非膠原蛋白生成量，降低膠原蛋白生成率和生成量[27]；茯苓健脾利水，能增加肝硬化中膠原纖維的降解，降低膠原纖維含量[28]。L-Arg能通過(guò)產(chǎn)生外源性一氧化氮(nitric oxide，NO)發(fā)揮生理作用，而NO能調(diào)節(jié)肝星狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，阻止肝星狀細(xì)胞收縮，松弛已收縮的細(xì)胞并減少α-SMA表達(dá)[29]，同時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)肝血流，降低組織細(xì)胞氧化損傷，保護(hù)肝功能[30]。這些中藥的藥理作用是本試驗(yàn)所用復(fù)方防治AS的藥理基礎(chǔ)，但中藥及復(fù)方中藥對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞的藥理作用是通過(guò)多種活性物質(zhì)單一或協(xié)同作用于多種受體，多重作用于一條或數(shù)條信號(hào)通路產(chǎn)生，因此能整體調(diào)節(jié)機(jī)體各項(xiàng)功能，提高免疫力。

本試驗(yàn)表明，肝α-SMA、I型膠原和III型膠原參與了AS的發(fā)生發(fā)展，復(fù)方中藥能通過(guò)影響肝α-SMA、I型和III型膠原蛋白防治AS，但是其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

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(編輯 白永平)

The Effect of the Compound Recipe of the Traditional Chinese Medicine on Collagen in Liver of Broilers with Ascites Syndrome

HAN Ye-chen1, ZHANG Juan1, WANG Jun-wu1, YUN Shi-yu1, WU Hai-ping1, WEN Shuang1,ZHAO Dong-dong1, WANG Zhuo1, SU Xiao-fei2, ZHU Yu-bo3, CHENG Jia1,SUN Yao-gui1, WANG Wen-kui1, LI Hong-quan1, DUAN Zhi-bian1*

(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu030801,China; 2.ShanxiHusbandryandVeterinarySchool,Taiyuan030024,China; 3.CollegeofAnimalScinece,HenanInstituteofScienceandTechnology,Xinxiang453003,China)

The objective of this study was to investigate the changes of α-smooth muscle actin (α-SMA), collagen type I and collagen type III in liver of broilers with ascites syndrome (AS) and the prevention and treatment of the compound recipe of the traditional Chinese medicine (TCM) on AS. A total of 309 7-day-old Ross broilers were randomly divided into six groups, group None was bred with normal diet, the rest were bred with high-energy diet derived from standard diet added with 3% lard and 4% fish meal and 0.12% Na+in drinking water at 9-11 ℃ to induce AS, group Control was given no medicine, compound recipe of the TCM groups (High, Middle, Low) were respectively given a dose of 2, 1, 0.5 mL·kg-1of the TCM in drinking water, and group L-Arg with 1% L-arginine in diet. The results showed that at 15, 25, 35 and 45 days of age, compared with group None, the incidence of AS, ascites heart index, heart index, lung index, liver index, the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers in group Control were increased significantly (P<0.01 orP<0.05), and spleen index in group Control was decreased significantly (P<0.01 orP<0.05). Compared with group Control, the items above were all improved in compound recipe of the traditional Chinese medicine groups and group L-Arg (P<0.01 orP<0.05). The study showed the increases of the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers participated in the pathogenesis of AS. The studied compound recipe of the traditional Chinese medicine with the role of tonifying qi-blood and activating qi to excrete water can prevent and treat AS of broilers effectively, and the mechanism was related to the decreases of compound recipe of the traditional Chinese medicine on the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers with AS.

compound recipe of the traditional Chinese medicine; ascites syndrome; α-smooth muscle actin; collagen type I; collagen type III

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.11.020

2016-06-30

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20140311022-1)；山西農(nóng)業(yè)大學(xué)橫向科技項(xiàng)目(2013HX28)

韓燁晨(1992-)，女，黑龍江省雙鴨山人，碩士生，主要從事中藥防治動(dòng)物血管病變研究，E-mail：hanyechen1992@163.com

*通信作者：段智變，女，山西祁縣人，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中獸醫(yī)藥對(duì)動(dòng)物血管病變及脾胃病證研究，E-mail：duanzhibian2008@aliyun.com

S853.33

A

0366-6964(2016)11-2310-08