桑利偉　劉愛勤　高圣風(fēng)　孫世偉　茍亞峰　王政　孟倩倩

摘 要 胡椒瘟病是危害我國胡椒產(chǎn)業(yè)的首要病害，目前基本依賴使用化學(xué)農(nóng)藥防治。篩選應(yīng)用生物農(nóng)藥是減少化學(xué)農(nóng)藥用量的有效途徑。本文采用生長速率法測(cè)定胡椒瘟病病原菌對(duì)12種生物農(nóng)藥和新型低毒化學(xué)農(nóng)藥的敏感性。結(jié)果表明：70%烯?！む拙G、木霉菌WP和枯草芽孢桿菌WP對(duì)胡椒瘟病病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分別為0.211 3、0.49和0.78 μg/mL。

關(guān)鍵詞 胡椒瘟病病原菌 ；生物農(nóng)藥 ；敏感性

中圖分類號(hào) S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.10.010

Abstract Back pepper Phytophthora foot rot is the most serious disease of the black pepper in China. At present， the control of this disease depends on the use of chemical fungicides， and the screening and using of biological fungicides is an effective way to reduce the dosage of chemical fungicides. Phytophthora capsici was treated with 12 biofungicides and low toxic chemical fungicides to test its sensitivity to the fungicides by using the mycelium growth rate method. The results showed that these 12 fungicides displayed various inhibition effects on mycelium growth of P. capsici， while Enoyl Azoxystrobin WG 70%， Trichoderma WP and Bacillus subtilis WP proved to be the most effective fungicides with EC50 values of 0.2113 μg/mL， 0.49μg/mL and 0.78 μg/mL respectively to control the Phytophthora foot rot.

Keywords Phytophthora capsici ； Biological fungicide ； Sensitivity

胡椒（Piper nigrum）是一種熱帶特色香辛作物，也是一種深受人們喜愛的調(diào)味品，在食品、醫(yī)療保健等領(lǐng)域用途廣泛，產(chǎn)品附加值高。海南是中國胡椒的主產(chǎn)地，其種植面積和產(chǎn)量均占全國總量的98%以上，目前種植面積達(dá)26 667 hm2，年產(chǎn)值約30億元，已成為近百萬熱區(qū)農(nóng)民致富的特色優(yōu)勢(shì)作物。胡椒瘟病是危害我國胡椒生產(chǎn)的首要病害。該病是由疫霉菌（Phytophthora capsici）侵染引起的一種傳染性很強(qiáng)的土傳性病害，病情嚴(yán)重的胡椒園損失達(dá)90%以上，甚至全園毀滅[1]。目前，該病害防治多依賴化學(xué)農(nóng)藥，出現(xiàn)農(nóng)藥越打越多、病害防治越難的問題。應(yīng)用生物農(nóng)藥替代化學(xué)農(nóng)藥，是實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥減量的主要途徑。本文通過藥劑的毒力測(cè)定，篩選出防治胡椒瘟病的生物農(nóng)藥和高效低毒低殘留農(nóng)藥，提高綠色防控技術(shù)水平，為促進(jìn)我國胡椒產(chǎn)業(yè)綠色可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種與藥劑

辣椒疫霉（Phytophthora capsici），2013年11月由筆者從香飲所胡椒種植基地采集的葉片中分離、鑒定所得。供試藥劑見表1。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖16 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。馬鈴薯去皮，切成塊煮沸0.5 h，然后用紗布過濾，再加糖及瓊脂，溶化后補(bǔ)足水至1 000 mL。1.05 kg/cm2，121℃滅菌20 min。

1.2 方法

首先，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定不同供試藥劑的濃度梯度，將不同濃度梯度的供試藥劑溶液加入PDA培養(yǎng)基中，各供試藥劑有效成分在PDA培養(yǎng)基中含量見表1。采用生長速率法[2]，測(cè)定供試藥劑對(duì)胡椒瘟病菌的抑制作用。培養(yǎng)72 h后檢查各處理菌的生長情況，十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑制生長率，抑制生長率/%=（A-B）-（C-B）/（A-B）×100%，其中A為對(duì)照菌落直徑，B為菌餅直徑，C為處理菌落直徑。將抑制率轉(zhuǎn)化為幾率值，將劑量取對(duì)數(shù)，求出毒力回歸方程，進(jìn)一步算出EC50[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同供試藥劑對(duì)胡椒瘟病菌的EC50值比較

各供試藥劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2、斜率值和EC50，見表2。

供試藥劑按照EC50基本上可以歸為4類：70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢桿菌WP，EC50介于0.21～0.78 μg/mL，EC50非常小，說明這三種藥劑抑菌效果最好；芽孢桿菌/淡紫擬青霉WP和75%肟菌·戊唑醇WG，EC50介于18.62～89.13 μg/mL，這兩種藥劑抑菌效果較好；20%嘧菌酯WG、和30%苯甲·嘧菌酯SC的EC50分別為190.5和213.8 μg/mL，說明這2種藥劑抑菌效果一般；2%武夷菌素AS、哈茨木霉WP、1.5%苦參·蛇麻素AS、45%異菌脲SC、和24%腈苯唑SC，EC50介于2 691.5～7 762.5 μg/mL，這五種藥劑抑菌效果較差。

2.2 胡椒瘟病菌對(duì)供試藥劑的敏感性比較

通過對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸分析，得出各供試藥劑的回歸方程和斜率K（見表2）?；貧w方程的斜率與病菌對(duì)殺菌劑的敏感性成正比[4]。按回歸方程的斜率K，供試藥劑可以分為3類：2%武夷菌素AS、70%烯酰·嘧菌酯WG、1.5%苦參·蛇麻素AS和哈茨木霉WP，斜率K在1.032 7～1.212 4，是供試藥劑中斜率K較大的，說明胡椒瘟病菌對(duì)這4種藥劑的敏感性較高；20%嘧菌酯WG、45%異菌脲SC、和24%腈苯唑SC的斜率K介于0.822 2～0.970 5，在供試藥劑中斜率K屬中等，胡椒瘟病菌對(duì)這3種藥劑的敏感性一般；枯草芽孢桿菌WP、30%苯甲·嘧菌酯SC、木霉菌WP、芽孢桿菌/淡紫擬青霉WP和75%肟菌·戊唑醇WG，斜率K介于0.377 3～0.583 7，在供試藥劑中斜率K較小，胡椒瘟病菌對(duì)這五種藥劑的敏感性較差。

3 結(jié)論

在不同藥劑毒力測(cè)定中，EC50越小、斜率值越大，說明病原菌對(duì)藥劑的反應(yīng)靈敏度越高，即隨著濃度的增加，抑菌率明顯增大。在試驗(yàn)中，EC50低的藥劑其毒力回歸方程斜率值往往也較小。綜合分析供試藥劑的EC50和斜率值，結(jié)果表明，70%烯?！む拙G、木霉菌WP和枯草芽孢桿菌WP對(duì)胡椒瘟病菌的抑菌效果非常好。

2009年，劉愛勤等測(cè)定了胡椒瘟病病原菌對(duì)常用的12種殺菌劑的敏感性。試驗(yàn)結(jié)果表明：69%烯酰嗎啉·錳鋅WP、25%甲霜·霜霉WP、50%烯酰嗎啉WP和36%霜休錳鋅WP對(duì)病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分別為1.862 1、1.129 8、3.419 8和6.309 6 μg/mL。2015年，農(nóng)業(yè)部提出到2020年，我國農(nóng)業(yè)要實(shí)現(xiàn)“一控兩減三基本”，主要農(nóng)作物病蟲害綠色防控覆蓋率達(dá)到30%，化學(xué)農(nóng)藥使用量實(shí)現(xiàn)零增長。推廣應(yīng)用生物農(nóng)藥或高效低毒低殘留農(nóng)藥替代化學(xué)農(nóng)藥，是實(shí)現(xiàn)化學(xué)農(nóng)藥減量的主要途徑。本文篩選出70%烯?！む拙G、木霉菌WP和枯草芽孢桿菌WP對(duì)胡椒瘟病菌的抑菌效果非常好，EC50介于0.21～0.78 μg/mL，比69%烯酰嗎啉·錳鋅WP、25%甲霜·霜霉WP等的EC50小很多，說明對(duì)胡椒瘟病菌的抑制效果更顯著。推廣應(yīng)用70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢桿菌WP替代生產(chǎn)中長期使用的69%烯酰嗎啉·錳鋅WP、25%甲霜·霜霉WP等化學(xué)藥劑，將為實(shí)現(xiàn)胡椒產(chǎn)業(yè)到2020年化學(xué)農(nóng)藥使用量零增長的目標(biāo)提供技術(shù)保障。

藥劑毒力測(cè)定試驗(yàn)只說明在離體條件下對(duì)胡椒瘟病菌的直接活性，田間防治效果受到很多因素影響，有待于試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。上述抑菌效果較好的供試藥劑，可進(jìn)一步在田間進(jìn)行藥效比較，結(jié)合室內(nèi)、室外效果，選擇優(yōu)良的殺菌劑，在胡椒生產(chǎn)中進(jìn)行合理的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 桑利偉，劉愛勤，譚樂和，等. 海南省胡椒瘟病病原鑒定及發(fā)生規(guī)律[J]. 植物保護(hù)，2011，37（6）：168-171.

[2] 黃圣明，郭少貞，劉秀娟，等. 咪鮮安等八種殺菌劑對(duì)芒果炭疽菌的毒性比較[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，1992，13（1）：67-70.

[3] 劉愛勤，桑利偉，孫世偉，等. 胡椒瘟病病原菌對(duì)12種殺菌劑的敏感性測(cè)定[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)工程，2009，33（2）：11-13.

[4] 劉愛勤，桑利偉，孫世偉，等. 香草蘭疫霉菌對(duì)9種殺菌劑的敏感性測(cè)定[J]. 農(nóng)藥，2008，47（11）：847-848.