成爭(zhēng)艷 雷龍春 楊旭峰 陳星

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 1.病理科；2. 胸外科，四川 成都 610101)

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·論著·

食管鱗狀細(xì)胞癌PRL-3及Intβ1表達(dá)分析及意義

成爭(zhēng)艷1雷龍春1楊旭峰1陳星2

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 1.病理科；2. 胸外科，四川 成都 610101)

目的 研究促肝細(xì)胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和整合素β1(Intβ1)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)水平及差異，探討其臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)40例食管癌患者食管癌組織，癌旁組織和正常組織中PRL-3 和Intβ1 蛋白的表達(dá)水平，利用Image Pro6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)算平均光密度值(MOD)，分析其表達(dá)的差異。結(jié)果 PRL-3和Intβ1的表達(dá)，癌組織中均高于癌旁組織，正常組織中表達(dá)最低(P<0.05)。結(jié)論 PRL-3 和Intβ1在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)增高，可作為參考指標(biāo)判斷食管鱗狀細(xì)胞癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后。

食管鱗狀細(xì)胞癌；免疫組化；促肝細(xì)胞再生磷酸酶3；整合素β1

食管癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)居第8位[1]，死亡率居第6位[2]。我國(guó)是食管癌高發(fā)地區(qū), 其發(fā)病率和死亡率均明顯高于世界平均水平, 且無性別差異[3-4]。在集中高發(fā)區(qū)，食管癌標(biāo)準(zhǔn)化死亡率在10.34/10 萬～78.32/10萬,占高發(fā)縣全部惡性腫瘤死亡的11.69%～42.61%, 居城市和農(nóng)村惡性腫瘤死亡率的第4位[5]。但是其發(fā)病的分子機(jī)制仍不清楚[6]。促肝細(xì)胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3, PRL-3)是一種蛋白酪氨酸磷酸酶，具有促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)與遷移的作用[7]，Saha等[8]發(fā)現(xiàn)PRL-3與癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。整合素β1(integrinβ1, Intβ1) 在腫瘤組織的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中因?yàn)榭墒辜?xì)胞間的黏附能力下降而發(fā)揮作用[9]。目前PRL-3及Intβ1與食管癌的關(guān)系研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)PRL-3和Intβ1在食管癌的表達(dá)，探討其關(guān)系，為臨床提供判斷食管癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的客觀有效指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集四川省人民醫(yī)院城東病區(qū)2012年1月至2014年12月因食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除治療的病理標(biāo)本共40例。取癌組織及相應(yīng)的癌旁組織(距腫瘤邊緣1.0 cm)、正常組織(距腫瘤邊緣5.0 cm)作為對(duì)照，所有標(biāo)本均由病理診斷醫(yī)師HE切片，明確病理診斷。所有患者術(shù)前均未行放療或化療。

1.2 主要試劑 PRL-3單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)； Intβ1單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片，按照免疫組化二步法檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行操作，測(cè)定PRL-3和 Intβ1的表達(dá)。用0.01 mol/L PBS(pH7.4)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 PRL-3 及Intβ1以胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色信號(hào)為陽性細(xì)胞。每張切片高倍鏡下隨機(jī)選取5～6個(gè)視野拍照，采用Image Pro6.0圖像分析系統(tǒng)分析測(cè)量平均光密度值(mean optical density，MOD)，進(jìn)行各組比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，用Pearson分析相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PRL-3的蛋白表達(dá)情況和MOD比較 免疫組化檢測(cè)40例人食管癌組織、癌旁組織及正常組織中PRL-3表達(dá)情況結(jié)果顯示，食管癌組織中PRL-3有27例(67.5% )陽性(圖1A),而相應(yīng)的40例癌旁組織有15例(37.5%)陽性表達(dá)，且陽性細(xì)胞均集中在不典型增生區(qū)域的細(xì)胞質(zhì)中(圖1B)；正常組織中PRL-3有13例(32.5%)散在陽性(圖1C)。MOD結(jié)果顯示，PRL-3表達(dá)總趨勢(shì)為癌組織>癌旁組織>正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

圖1 不同組織中PRL-3蛋白表達(dá)情況(×400)

注：與正常組比較，①P<0.05， ②P<0.05

2.2 Intβ1的蛋白表達(dá)情況和MOD比較 食管癌組織中Intβ1有29例(72.5%)陽性(圖2A)，而相應(yīng)的40例癌旁組織有16例(40%)陽性表達(dá)(圖2B)，正常組織中有15例(37.5%)散在陽性表達(dá)(圖3C)。MOD結(jié)果顯示，Intβ1表達(dá)總趨勢(shì)為癌組織>癌旁組織>正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

2.3 PRL-3和Intβ1表達(dá)的相關(guān)性 癌組織和癌旁組織中PRL-3 和Intβ1表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.412，P=0.024；r=0.446，P=0.049)；在正常組織中PRL-3和Intβ1表達(dá)無相關(guān)性(r=-0.137，P=0.563)。

圖2 不同組織中Intβ1蛋白表達(dá)情況(×400)

注：與正常組比較,①P<0.05，②P<0.05。

3 討論

肝再生磷酸酶家族包含3個(gè)亞型，即PRL-1、PRL-2、 PRL-3，編碼基因分別位于染色體6q12、1p35、8q24.3上。其是一類獨(dú)特的核蛋白酪氨酸磷酸酶，含有完全相同的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶催化位點(diǎn)序列。研究表明PRLs，特別是PRL-3在多種腫瘤的發(fā)生、增殖及侵襲中起作用[10-11]。目前已發(fā)現(xiàn)PRL-3在乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌及胃癌等惡性腫瘤中表達(dá)升高，同時(shí)發(fā)現(xiàn)表達(dá)水平越高，腫瘤惡性程度越高，淋巴結(jié)及其它轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)水平明顯高于原發(fā)灶及正常組織[12-14]。Guo等[15]將PRL-3高表達(dá)的CHO細(xì)胞注入小鼠體內(nèi)，全部誘導(dǎo)出形成肺轉(zhuǎn)移瘤，并且有20%的小鼠合并出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移瘤，而注入PRL-3突變失活的對(duì)照組小鼠則無轉(zhuǎn)移性腫瘤形成。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化檢測(cè)了食管鱗狀細(xì)胞癌及癌旁組織，正常食管黏膜組織中PRL-3的表達(dá)情況，結(jié)果表明在食管鱗狀細(xì)胞癌中PRL-3 蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常組織，說明高表達(dá)的PRL-3 可能在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生中起作用。

整合素作為粘附分子五大家族成員之一，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞之間及細(xì)胞與胞外基質(zhì)(extracellular matarix, ECM)的粘附而發(fā)揮作用[16]。Intβ1是介導(dǎo)ECM信號(hào)的主要細(xì)胞表面受體，其與配體結(jié)合后有促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖和遷移等作用。研究表明, Intβ1表達(dá)升高除了影響腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的粘附，從而使腫瘤細(xì)胞更具有侵襲性，Intβ1還可以影響腫瘤細(xì)胞ERK,AKT等基因的表達(dá)，從而與腫瘤細(xì)胞的增殖、基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡等生物學(xué)行為有密切關(guān)系[17-19]。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)蛋白水平檢測(cè)Intβ1的表達(dá)，結(jié)果表明，在食管鱗狀細(xì)胞癌中Intβ1 蛋白在原發(fā)灶中的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常組織，證明Intβ1的高表達(dá)可能與食管鱗狀細(xì)胞癌黏附，侵襲增強(qiáng)有關(guān)。

PRL-3和Intβ1將各種細(xì)胞外信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)主要依靠MAPK信號(hào)通路[14]；有研究顯示，PRL-3通過Intβ1-ERK1/2-MMP-2信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)Intβ1的表達(dá)[20]。因此，其共同作用下促使腫瘤組織的侵襲性、活動(dòng)性和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在蛋白表達(dá)水平癌組織和癌旁組織中PRL-3 和Intβ1表達(dá)均呈正相關(guān)，說明其機(jī)制PRL-3可能通過活化通路提高Intβ1表達(dá)，從而增強(qiáng)細(xì)胞間質(zhì)侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。

4 結(jié)論

在食管鱗狀細(xì)胞癌中PRL-3和Intβ1的高表達(dá)，聯(lián)合檢測(cè)可能作為腫瘤標(biāo)志物來判斷食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，也有望成為治療腫瘤的靶點(diǎn)。

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Expression of phosphatase of regenerating liver-3 and integrin β1 in esophageal squamous cell carcinoma

CHENG Zhengyan1,LEI Longchun1,YANG Xufeng1,et al

(1.DepartmentofPathology,EastenDistrict,SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincial>People′sHospital,Chengdu610101,China;2.DepartmentofThoracicSurgery,EastenDistrict,SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople′sHospital,Chengdu610101,China)

Objective To study expression levels and differences of phosphatase of regenerating liver-3 and integrinβ1 protein in esophageal squamous cell carcinoma, and explore its clinical significance. Methods PRL-3 and Intβ1 expression level of esophageal cancer tissue, tissue adjacent to carcinoma and normal tissues were detected by analysis of the differences in expression. Results The protein expressions of PRL-3 and Intβ1 in esophageal squamous cell carcinoma were higher than that in the adjacent non-tumor tissues. The protein expressions of PRL-3 and Intβ1 were lowest in normal esophageal tissues. Conclusion PRL-3 and Intβ1 may be used as tumor markers in progression, invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma.

Esophageal squamous cell carcinoma; Immunohistochemistry; Phosphatase of regenerating liver-3; Integrin β1

R 365；R 735.1

A

10.3969/j.issn.1672-3511.2016.11.005

2016-04-06；編輯： 張文秀)