姜燕華，張成才，成 浩*

(1.寧波市寧海縣農(nóng)林局，浙江 寧波 315600；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/國家茶樹改良中心，浙江 杭州 310008)

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茶樹良種場(chǎng)不同品種的SSR鑒定研究

姜燕華1，張成才2，成 浩2*

(1.寧波市寧?？h農(nóng)林局，浙江 寧波 315600；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/國家茶樹改良中心，浙江 杭州 310008)

以寧?？h橋頭胡鎮(zhèn)汶溪茶葉良種場(chǎng)的15個(gè)茶樹品種的葉片為試驗(yàn)材料，每個(gè)待鑒定品種隨機(jī)選擇3～4個(gè)單株作為待測(cè)樣本，以國家茶樹種質(zhì)資源圃品種作為標(biāo)準(zhǔn)品種，采用SSR技術(shù)檢測(cè)待測(cè)品種與檔案記載情況是否相符。試驗(yàn)結(jié)果表明：通過21對(duì)SSR引物的PCR擴(kuò)增，良種場(chǎng)中的‘龍井43’、‘安吉白茶’和‘迎霜’的SSR標(biāo)記數(shù)與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品種完全一致，說明這3個(gè)品種保持原品種的特征特性；‘歌樂茶’、‘勁峰’和‘平陽特早’3個(gè)品種部分樣本的標(biāo)記數(shù)與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品種一致，說明這3個(gè)品種中的部分單株出現(xiàn)某種程度的變異；‘早逢春’、‘碧云’、‘竹紫春’、‘烏牛早’、‘水谷茶’和‘福鼎大白茶’6個(gè)品種的標(biāo)記數(shù)與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品種出現(xiàn)不一致，說明這6個(gè)品種在良種場(chǎng)繁育過程中出現(xiàn)同名異物或同物異名的錯(cuò)誤；良種場(chǎng)中的‘銀片’、‘鳩坑種’和‘紫筍’無法確定其是否屬于相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品種，說明在良種收集過程中，無法弄清品種的來源。通過本研究糾正了品種收集過程中出現(xiàn)的錯(cuò)誤，指出了品種繁育過程中出現(xiàn)的突變。

茶樹；SSR；品種鑒定；無性系

茶樹是重要的經(jīng)濟(jì)作物，在我國的種植栽培歷史悠久。19世紀(jì)以前，我國的茶產(chǎn)業(yè)一直處于世界領(lǐng)先地位，而后逐漸衰落，直到新中國成立之后才進(jìn)入蓬勃發(fā)展的時(shí)期。近50年來，我國茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展基本可以分為3個(gè)階段：擴(kuò)大種植面積階段(1950～1978年)、提高單產(chǎn)階段(1979～1989年)和提高質(zhì)量階段(1990年至今)[1]。在第一階段中，我國的茶園面積成倍增加，各地開辟了大量的新茶園。其中，一部分為生產(chǎn)茶園；另一部分為茶樹良種場(chǎng)，陸續(xù)引種有不同的茶樹良種，為一定區(qū)域內(nèi)的茶園提供種苗保障。長期以來，一些當(dāng)時(shí)成立的茶樹良種場(chǎng)，由于人員流動(dòng)和疏于管理，已經(jīng)失去了作為良種場(chǎng)的功能，轉(zhuǎn)而成為生產(chǎn)茶園，造成了資源的浪費(fèi)。如何對(duì)這些良種場(chǎng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，特別是如何對(duì)其所種茶樹良種進(jìn)行鑒別，以考察其是否具有恢復(fù)茶樹良種場(chǎng)功能的潛質(zhì)，成為一個(gè)亟待解決的問題。

近年來，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于小麥[2-3]、水稻[4]、玉米[5-7]、茶葉[8-13]等多種作物研究，尤其是在遺傳多樣性、親緣關(guān)系、品種鑒別領(lǐng)域使用最多。其中，簡單重復(fù)序列標(biāo)記(SSR，simple sequence repeats)，由于檢測(cè)方便、鑒別能力高，成為最好的品種鑒別方法之一[5,14]。在茶樹品種鑒別方面，楊陽等使用SSR標(biāo)記、劉本英等使用ISSR(inter simple sequence repeats)標(biāo)記，分別構(gòu)建了湖南省和云南省主要茶樹品種的指紋圖譜，為這些茶樹品種的鑒別提供了依據(jù)[15-16]。張成才等使用SSR標(biāo)記對(duì)浙江省主要無性系茶樹品種的鑒定進(jìn)行了研究，并且提出了相應(yīng)的鑒定標(biāo)準(zhǔn)[17]。

寧海縣橋頭胡汶溪茶葉良種場(chǎng)位于寧波市寧?？h橋頭胡鎮(zhèn)，始建于1974年，陸續(xù)引種有‘勁峰’、‘迎霜’、‘烏牛早’等10余個(gè)茶樹良種，直至20世紀(jì)90年代初達(dá)到如今的規(guī)模。多年來，該良種場(chǎng)由于人員流動(dòng)、檔案不全，一直沒能得到很好地利用。為了確定該良種場(chǎng)所種茶樹品種與部分檔案記載是否一致，藉此評(píng)估其對(duì)當(dāng)前寧海縣茶葉生產(chǎn)、種苗繁育等方面的潛在意義，本實(shí)驗(yàn)使用SSR標(biāo)記的方法，根據(jù)部分檔案推測(cè)的品種名稱，對(duì)該良種場(chǎng)種植的15個(gè)茶樹品種進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料和方法

1.1 取樣

‘勁峰’、‘迎霜’、‘烏牛早’等15個(gè)待鑒定品種，每個(gè)品種分別從茶行中隨機(jī)選3～4個(gè)單株共59個(gè)單株，取葉片作為待鑒定樣品(表1)。

從茶樹國家種質(zhì)資源圃中，取與待鑒定材料相應(yīng)的各品種1芽2葉嫩梢，作為品種鑒定的標(biāo)準(zhǔn)樣。資源圃沒有保存‘銀片’品種，因此沒有取到該品種的標(biāo)準(zhǔn)樣；資源圃沒有保存‘水谷茶’品種，保存有‘水古茶’，因此采‘水古茶’為標(biāo)準(zhǔn)樣(表1)。

表1 供試材料信息

1.2 基因組DNA的提取及PCR擴(kuò)增

采樣后，將樣品迅速放于液氮中冷凍，使用天根生化科技有限公司(DP305)的植物基因組DNA試劑盒提取各份材料的基因組DNA。檢測(cè)濃度后，稀釋到20 ng·μL-1保存?zhèn)溆谩?/p>

PCR擴(kuò)增使用10 μL反應(yīng)體系，包括DNA模板2 μL，上下游引物各0.2 μL，Taq酶0.2 μL，10×Buffer 2 μL，dNTP 0.5 μL，加ddH2O至10 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min，94℃變性30 s、58℃退火30 s、72℃延伸30 s共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。

1.3 電泳檢測(cè)及數(shù)據(jù)處理

使用10%聚丙烯酰胺凝膠，在120 V的電壓下電泳90 min，銀染顯色[18-19]。顯色后，人工讀帶，條帶由大到小分別記為A、B、C、D等，無條帶或者帶型難以辨認(rèn)記為“..”，在Excel中進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，使用Popgen32軟件構(gòu)建遺傳聚類圖。

1.4 品種判定標(biāo)準(zhǔn)

本試驗(yàn)，參考水稻[20]和茶樹[17]品種鑒定方法對(duì)樣品品種進(jìn)行判定：①某一單株與標(biāo)準(zhǔn)品種差異標(biāo)記數(shù)=0，則判定該單株屬于這一品種；②某一單株與標(biāo)準(zhǔn)品種差異標(biāo)記數(shù)=1，則判定該單株疑似屬于這一品種；③某一單株與標(biāo)準(zhǔn)品種差異標(biāo)記數(shù)≥2，則判定該單株不屬于這一品種。

2 結(jié)果與分析

本研究使用實(shí)驗(yàn)室前期篩選過的多態(tài)性高、帶型清晰的21對(duì)SSR引物(表2)，分別對(duì)15個(gè)待鑒定品種的59個(gè)單株和14個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣進(jìn)行PCR擴(kuò)增。然后，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，銀染顯色(圖1)。人工讀帶并構(gòu)建帶型模擬圖(圖2)，然后使用Popgen32軟件構(gòu)建遺傳聚類圖(圖3)。差異標(biāo)記數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3，檢測(cè)結(jié)果匯總見表4。

表2 21對(duì)引物信息

待鑒定品種‘安吉白茶’(AJBC)，4個(gè)樣本相互之間的帶型完全一致，而且與標(biāo)準(zhǔn)樣品完全一致，因此認(rèn)為這4個(gè)樣本所代表的群體為無性系群體，并且屬于‘安吉白茶’品種；同樣地，待鑒定品種‘龍井43’(LJ43)，4個(gè)樣本相互間帶型一致，且與標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，認(rèn)為這4個(gè)樣本所代表的群體為‘龍井43’的無性系群體。待鑒定品種‘迎霜’(YS)，4個(gè)樣本間帶型一致，同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)樣品帶型一致，認(rèn)為這4個(gè)樣本所代表的群體為‘迎霜’的無性系群體。

圖1 引物5077部分樣品譜帶Fig.1 SSR fingerprints of samples using primer 5077

圖2 21個(gè)SSR標(biāo)記在待定品種及標(biāo)準(zhǔn)品種中的帶型模擬圖Fig.2 Simulating diagrams of 21 SSR markers on farm collection and standard varieties注：左側(cè)第一列為待鑒定品種編號(hào)，每個(gè)編號(hào)對(duì)應(yīng)的一行為該品種4個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)樣品的帶型；圖頂部的一行數(shù)字為SSR標(biāo)記引物編號(hào)，每個(gè)編號(hào)所對(duì)應(yīng)的列，為這個(gè)標(biāo)記在每個(gè)樣本中的帶型。Note: Codes on left column are cultivars to be identified, corresponding row for each code shows banding patterns of 4 samples of each cultivars and its reference standard; numbers on top of diagram indicate SSR markers, each column underneath shows marker banding patterns for each corresponding sample.

待鑒定品種‘歌樂茶’(GL)，4個(gè)樣本中GL3和GL4帶型一致且與標(biāo)準(zhǔn)樣品帶型一致，與GL1有1個(gè)標(biāo)記存在差異，與GL2有2個(gè)標(biāo)記存在差異，聚類結(jié)果發(fā)現(xiàn)以上4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品一起聚為一類。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體為無性系群體，其中混雜有親緣關(guān)系較近的單株，該群體屬于‘歌樂茶’品種。

待鑒定品種‘勁峰’(JF)，4個(gè)樣本中JF3和JF4與標(biāo)準(zhǔn)樣品帶型完全一致，JF2與標(biāo)準(zhǔn)樣品有2個(gè)標(biāo)記差異，而JF1與標(biāo)準(zhǔn)樣品差異標(biāo)記數(shù)為13個(gè)。因此JF3和JF4為‘勁峰’；而JF1和 JF2不屬于‘勁峰’品種，而且聚類分析結(jié)果表明，JF1與其他3個(gè)樣本以及標(biāo)準(zhǔn)樣品間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，JF2與JF3、JF4和標(biāo)準(zhǔn)樣品聚為一類。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體為‘勁峰’的無性系群體，但是群體里面混雜有親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的單株。

待鑒定品種‘平陽特早’(PYTZ)，4個(gè)樣本中，PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4之間的帶型一致，且與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在1個(gè)標(biāo)記的差異；PYTZ3與其他3個(gè)樣本存在2個(gè)標(biāo)記的差異，與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在3個(gè)標(biāo)記的差異，聚類分析發(fā)現(xiàn)PYTZ3與其他3個(gè)樣本以及標(biāo)準(zhǔn)樣品的親緣關(guān)系較近。因此認(rèn)為PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4疑似屬于‘平陽特早’品種；PYTZ3不屬于‘平陽特早’品種。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體，疑似屬于‘平陽特早’品種的無性系群體，但其中混雜有親緣關(guān)系較近的單株。

表3 15個(gè)待鑒定品種的59個(gè)單株與標(biāo)準(zhǔn)樣品差異標(biāo)記數(shù)統(tǒng)計(jì)

待鑒定品種‘早逢春’(ZFC)，4個(gè)樣本中，ZFC2和ZFC3之間的帶型一致，但與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在13個(gè)標(biāo)記的差異；ZFC1與以上兩個(gè)樣本存在9個(gè)標(biāo)記的差異，與ZFC4存在7個(gè)標(biāo)記的差異，與標(biāo)準(zhǔn)樣本存在12個(gè)標(biāo)記的差異；ZFC4與ZFC2和ZFC3之間存在8個(gè)標(biāo)記的差異，與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在13個(gè)標(biāo)記的差異；聚類分析發(fā)現(xiàn)4個(gè)樣本聚為一類，但與標(biāo)準(zhǔn)樣品親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體為無性系群體但不屬于‘早逢春’，而且其中混雜了親緣關(guān)系較近的單株。

待鑒定品種‘碧云’(BY)，4個(gè)樣本中，BY3和BY4帶型一致，與BY2存在1個(gè)標(biāo)記的差異，與BY1存在7個(gè)標(biāo)記的差異；4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在5～9個(gè)標(biāo)記的差異；聚類分析發(fā)現(xiàn)，4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品一起聚為一類。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體，為無性系群體，該群體里面混雜有親緣關(guān)系較近的單株，該群體與‘碧云’品種親緣關(guān)系較近，但是不屬于‘碧云’品種。

待鑒定品種‘水谷茶’(SG)，4個(gè)樣本中SG2和SG3帶型一致，與SG1和SG4均存在1個(gè)標(biāo)記的差異；SG1和SG4間存在2個(gè)標(biāo)記的差異；4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品‘水古茶’存在13～14個(gè)標(biāo)記的差異，聚類分析發(fā)現(xiàn)4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品‘水古茶’親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體屬于無性系，但是與標(biāo)準(zhǔn)樣品‘水古茶’并非一個(gè)品種。

待鑒定品種‘竹紫春’(ZZC)，4個(gè)樣本中ZZC1和ZZC3帶型一致，與ZZC2存在一個(gè)標(biāo)記的差異，與ZZC4存在10個(gè)標(biāo)記的差異；ZZC2和ZZC4存在11個(gè)標(biāo)記的差異；4個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在10～14個(gè)標(biāo)記的差異；聚類分析發(fā)現(xiàn)ZZC1、ZZC2和ZZC3聚為一類，ZZC4和標(biāo)準(zhǔn)樣品均與它們的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)。以上結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體，為無性系群體，但混雜有親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的個(gè)體，而且該群體不屬于‘竹紫春’品種。

待鑒定品種‘烏牛早’，3個(gè)樣本中WNZ1和WNZ2有2個(gè)標(biāo)記存在差異，與WNZ3存在5個(gè)標(biāo)記的差異；WNZ2和WNZ3存在6個(gè)標(biāo)記的差異；3個(gè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣品有11～13個(gè)標(biāo)記存在差異；聚類分析發(fā)現(xiàn)3個(gè)樣本聚為一類，但與標(biāo)準(zhǔn)樣品親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。以上結(jié)果表明，這3個(gè)樣本所代表的群體可能屬于無性系群體，但其中混雜有親緣關(guān)系較近的單株，而且該群體并非‘烏牛早’品種。

待鑒定品種‘銀片’(YP)，4個(gè)樣本中YP1、YP2和YP4帶型完全一致，與YP3存在1個(gè)標(biāo)記的差異。由此，認(rèn)為這4個(gè)樣本所代表的是一個(gè)無性系群體，但由于本試驗(yàn)沒有‘銀片’標(biāo)準(zhǔn)樣品，不能確定該群體是否屬于‘銀片’品種。

待鑒定品種‘紫筍’(ZS)，4個(gè)樣本中ZS1、ZS2和ZS4間的帶型一致，與ZS3存在1個(gè)標(biāo)記的差異，與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在7個(gè)標(biāo)記的差異，聚類分析發(fā)現(xiàn)4個(gè)樣本均與標(biāo)準(zhǔn)樣品‘紫筍群體’(群體種)聚為一類。結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體為無性系群體，該群體可能由紫筍群體種中的某一單株擴(kuò)繁而成，因而與標(biāo)準(zhǔn)品種親緣關(guān)系較近，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以確定該待測(cè)品種為‘紫筍群體’品種。

待鑒定品種‘福鼎大白’(FDDB)，4個(gè)樣本相互之間的差異標(biāo)記數(shù)為14～17個(gè)，與標(biāo)準(zhǔn)樣品的差異標(biāo)記數(shù)為9～15個(gè)，聚類分析發(fā)現(xiàn)FDDB2與標(biāo)準(zhǔn)樣品聚為一類，而其余樣本散見于聚類圖中。結(jié)果表明，這4個(gè)樣本所代表的群體為群體種，由于群體種遺傳背景復(fù)雜，因此無法根據(jù)SSR標(biāo)記確定這4個(gè)樣本是否屬于‘福鼎大白’。同樣類似的還有待鑒定品種‘鳩坑’(JK)，4個(gè)樣本間差異標(biāo)記數(shù)為10～15個(gè)，與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在13～14個(gè)標(biāo)記的差異，聚類分析發(fā)現(xiàn)，4個(gè)樣本聚為一類，因此認(rèn)為此4個(gè)樣本所代表的群體為群體種，但無法確定這4個(gè)樣本是否屬于‘鳩坑群體種’。

圖3 使用popgen32軟件構(gòu)建的遺傳聚類圖。Fig.3 Cluster diagrams of cultivars constructed using Popgen 32 software based on data of 21 SSR loci注：紅色圓圈表示標(biāo)準(zhǔn)樣品位置。Note: Red dots represent standard varieties.

表4 驗(yàn)證結(jié)果匯總

3 討論

本試驗(yàn)在取樣過程中發(fā)現(xiàn)，部分茶樹品種混雜有表型明顯不一致的單株，結(jié)果也表明，部分品種的確存在雜株。在茶樹種苗繁育過程中，良種場(chǎng)通常作為母本園，為種苗繁育提供扦插穗條。茶樹繁殖系數(shù)大，這些雜株會(huì)同真實(shí)品種一起大量擴(kuò)繁，經(jīng)銷售流入生產(chǎn)茶園，導(dǎo)致茶樹間存在性狀差異，最終影響茶葉產(chǎn)量和品質(zhì)。近年來，本實(shí)驗(yàn)室在多地取樣的過程中，發(fā)現(xiàn)有些品種存在名稱與事實(shí)不符的情況，給生產(chǎn)者和研究者帶來了很大的困擾。因此，在建立良種場(chǎng)的過程中，對(duì)新引種的品種一定要嚴(yán)格篩查，首先要保證該品種確為目標(biāo)品種，然后要剔除那些非目標(biāo)品種的單株，保證所種植品種的真實(shí)性和純度，從源頭上保證擴(kuò)繁后的茶苗性狀一致。

研究發(fā)現(xiàn)，‘龍井43’、‘安吉白茶’、‘歌樂茶’、‘迎霜’、‘勁峰’和‘平陽特早’等6個(gè)待鑒定品種與檔案記載的標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，然而‘歌樂茶’、‘勁峰’和‘平陽特早’3個(gè)品種中混雜有其他品種單株?！绶甏骸?、‘碧云’、‘竹紫春’、‘烏牛早’和‘福鼎大白茶’等5個(gè)待鑒定品種，與檔案記載的標(biāo)準(zhǔn)樣品不一致，并非檔案所述品種。待鑒定品種‘水谷茶’的4個(gè)樣本均非‘水古茶’。另外，待鑒定品種‘銀片’沒有取到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此不能確定其4個(gè)樣本是否屬于‘銀片’品種。

本研究中部分待測(cè)品種與標(biāo)準(zhǔn)樣品存在遺傳上的差異，但在聚類時(shí)卻聚在一起，表明其親緣關(guān)系較近，推測(cè)這些混雜的單株可能是相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品種的有性后代(如本試驗(yàn)中‘紫筍’品種)，或其品種繁殖來源于相近或同一品種。如本研究中‘碧云’品種，它是由云南大葉種天然雜種中單株選育而成。云南大葉種是茶樹育種中常用的材料，通過其育種出的后代具有相似的遺傳背景，因此在進(jìn)行遺傳聚類分析時(shí)這些后代往往聚在一起。目前，我國國家級(jí)茶樹良種中，除了無性系品種，還包括‘鳩坑種’、‘祁門種’、‘龍井種’和‘紫陽種’等多個(gè)有性系品種，這些品種經(jīng)自然雜交的種子擴(kuò)繁而成，遺傳背景非常復(fù)雜[21]。因此，很難根據(jù)SSR標(biāo)記的差異數(shù)對(duì)個(gè)別單株進(jìn)行比較準(zhǔn)確的鑒定。本研究中，4個(gè)鳩坑種的樣本聚為一類，然而與其標(biāo)準(zhǔn)樣品的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)，由于其遺傳背景復(fù)雜，盡管遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)，仍很難明確的得出待鑒定品種是否屬于‘鳩坑種’的結(jié)論。另外，本研究中取‘紫筍群體’(群體種)作為待鑒定品種‘紫筍’的標(biāo)準(zhǔn)樣，4個(gè)樣本ZS1、ZS2和ZS4間的帶型一致，ZS3存在1個(gè)標(biāo)記的差異，由此推測(cè)該品種可能為無性系品種，然而聚類分析發(fā)現(xiàn)，4個(gè)待鑒定樣本與標(biāo)準(zhǔn)樣聚為一類，因此無法明確認(rèn)定待鑒定品種‘紫筍’是否屬于‘紫筍群體’。以上結(jié)果表明，有性系品種的鑒定方法，仍然需要進(jìn)一步探索。

本研究使用SSR的方法，對(duì)寧?？h橋頭胡汶溪茶葉良種場(chǎng)的15個(gè)茶樹品種與檔案記載是否一致進(jìn)行了研究，糾正品種收集過程中出現(xiàn)的錯(cuò)誤，為該良種場(chǎng)茶樹資源的充分利用提供了理論依據(jù)，也為其他類似研究提供借鑒。然而，本次試驗(yàn)每個(gè)待鑒定品種僅隨機(jī)選擇了3～4個(gè)單株作為樣本，而且并未開展形態(tài)學(xué)方面的調(diào)查研究，由于茶園部分品種混雜度較高，導(dǎo)致很難做到比較全面的評(píng)價(jià)。

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SSR Cultivar Identifications of Premium Teas

JIANG Yan-hua1, ZHANG Cheng-cai2, CHENG Hao2*

(1.AgriculturalandForestryBureauofNinghaiCounty,NingboZhejiang315600,China; 2.Tearesearchinstitute,ChineseAcademyofAgricultureSciences/NationalCenterforTeaImprovement,HangzhouZhejiang310008,China)

SSR was applied to determine the authenticity of 15 tea cultivars at a farm for preserving premium tea plants. The leaves from 3 to 4 individual plants of each cultivar were randomly collected for the test to compare with those from the respective standard varieties preserved at the China National Germplasm Tea Repository in Hangzhou. Twenty SSR markers were selected for the analysis and comparison. It was found that Longjing 43, Anjibaicha, and Yingshuang teas, as well as a few Gelecha, Jinfeng, and Pingyang Tezao plants, were genetically identical with the

tandards, and 6 cultivars of Zaofengchun, Biyun, Zhuzichun, Wuniuzao, Shuigucha, and Fuding Dabaicha deviated from the standards, while the identifications for Yinpian, Jiukengzhong, and Zisun could not be determined. The deviations suggested possible errors in cultivar collection, mislabeling, and/or mutation occurred during cultivation of the cultivars at the farm. The results provided the basic information for a full and accurate utilization of the collected germplasms in the repository farm. They also indicated that the genotypes and cluster diagram obtained from the SSR method could adequately be used to preliminarily identify the clonal tea cultivars. For the sexual variety, however, further study is required.

tea; SSR; cultivar identification; clonal

2016-07-01 初稿；2016-08-11 修改稿

寧波市林業(yè)科技項(xiàng)目(2014L02)。

姜燕華(1984-)，女，農(nóng)藝師，研究方向：茶樹種質(zhì)資源與遺傳育種。

*通訊作者：成浩(1962-)，男，研究員，研究方向：茶樹種質(zhì)資源與遺傳育種。E-mail:chenghao@mail.tricaas.com

S571.1；Q311

A

2096-0220(2016)03-0105-08