朱凜，萬金娟，沈美芳，趙沐子，孫建國，朱錫和，王崇華

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇南京 210017；2.南京帥豐飼料有限公司，江蘇南京 211313）

4種配合飼料對克氏原螯蝦幼蝦生長及免疫性能的影響

朱凜1，萬金娟1，沈美芳1，趙沐子1，孫建國2，朱錫和1，王崇華1

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇南京 210017；2.南京帥豐飼料有限公司，江蘇南京 211313）

以均初始體質(zhì)量為（3.02±0.01）g的克氏原螯蝦幼蝦為研究對象，進行為期58 d的養(yǎng)殖試驗，同時比較研究不同配合飼料（D1、D2、D3、D4）對蝦的攝食、生長以及非特異性免疫力的影響。養(yǎng)殖試驗結(jié)束后進行白斑綜合征病毒（WSSV）感染試驗，并于感染后0、12、24、36、48、60、72、84 h統(tǒng)計蝦的存活率。養(yǎng)殖試驗結(jié)果表明：與D1組相比，投喂D4、D3、D2飼料組均能顯著提高克氏原螯蝦的增重率、特定生長率，降低飼料系數(shù)（P<0.05）；D4、D3組溶菌酶水平顯著高于D1組，D4組超氧化物歧化酶水平顯著高于D2、D1組，D4組過氧化氫酶水平顯著高于其他三組（P<0.05）；各組間存活率、葡萄糖、皮質(zhì)醇和丙二醛水平均無統(tǒng)計學(xué)意義差異（P>0.05）。攻毒試驗結(jié)果表明：感染W(wǎng)SSV 24 h后蝦開始出現(xiàn)死亡；36 h時，各組間存活率無顯著差異（P> 0.05）；48 h、60 h、72 h時，D4、D3、D2組存活率顯著高于D1組（P<0.05）；84 h時，D4組存活率顯著高于其他三組（P<0.05），D1、D2、D3組之間存活率差異不顯著（P>0.05）。綜上所述，D4組飼料使用效果最佳。

克氏原螯蝦；不同配合飼料；生長；免疫

克氏原螯蝦（Procambarus clarkia）俗稱“小龍蝦”，隸屬甲殼綱（Cmstacea），十足目（Decapoda），螯蝦科（Cambaridae），原螯蝦屬（Procambarus），是當(dāng)今世界上最主要的淡水螯蝦養(yǎng)殖種類，其產(chǎn)量占整個螯蝦產(chǎn)量的70%～80%，也是我國目前重要的經(jīng)濟水產(chǎn)養(yǎng)殖對象。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，克氏原螯蝦——尤其是幼蝦時期人工配合飼料的開發(fā)也越來越受到人們的關(guān)注。但在目前關(guān)于克氏原螯蝦幼蝦飼料營養(yǎng)方面尚缺系統(tǒng)的研究。試驗采用四種不同飼料，研究其對克氏原螯蝦幼蝦生長性能和免疫性能方面的影響，旨在為高效、綠色的克氏原螯蝦配合飼料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

試驗設(shè)計4組飼料，以某品牌商用蝦料為基礎(chǔ)飼料（D1），在基礎(chǔ)飼料（D1）中分別添加1%的大蒜素、1%大蒜素+0.02%芽孢桿菌和4%烏賊膏制成3種試驗飼料（D2、D3、D4），試驗基礎(chǔ)飼料配方見表1。試驗使用的大蒜素、芽孢桿菌、烏賊膏分別來自洛陽納鈺商貿(mào)有限公司、浙江省淡水水產(chǎn)研究所魚藥廠和南京帥豐飼料有限公司。飼料原料分別粉碎后過60目篩網(wǎng)，然后進行超微粉碎（粒度98%能過80目），混合均勻后用膨化機制成直徑為1.0 mm的沉性顆粒飼料，在50℃烘干24 h，冷卻后放入密封袋中于4℃冰柜中保存待用。

1.2 試驗設(shè)計

養(yǎng)殖試驗在江蘇省淡水水產(chǎn)研究所祿口基地進行，試驗對象為初均體質(zhì)量為（3.01±0.02）g的克氏原螯蝦。試驗開始后對克氏原螯蝦進行1周馴養(yǎng)，馴化期間所有蝦均投喂基礎(chǔ)飼料（D1）。隨后隨機選取1組繼續(xù)投喂D1，另外3組分別投喂D2、D3、D4，每個試驗處理設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)50尾蝦，每天投喂3次（07：00、12：00、19：00）。采用飽食量法投餌，即為蝦體質(zhì)量的3%～4%。并根據(jù)攝食和生長情況作適當(dāng)調(diào)整，以每次投飼后無殘餌為宜。試驗在水泥池（2.50 m×2.5 m×0.8 m）中進行，試驗期間氣泵連續(xù)充氧，DO>6.85 mg/L，水溫28～32℃，pH值為6.7～7.5，氨氮<0.049 mg/L，硫化氫<0.015 mg/L。正式養(yǎng)殖58 d后，蝦稱重、采樣等。

1.3 攻毒試驗

在飼養(yǎng)試驗及采樣結(jié)束后，每個水泥池選取體質(zhì)量基本一致、健康狀況良好的10尾克氏原螯蝦進行攻毒試驗。病毒采用實驗室的白斑綜合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV），按每100 g蝦腹節(jié)注射毒液1.0 mL后，放養(yǎng)于規(guī)格為160 L的蓄養(yǎng)槽內(nèi)，并保證充足的氧氣，觀察蝦死亡情況，并分別每隔12 h統(tǒng)計存活率。

1.4 樣品采集與分析測定方法

60 d養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，對試驗蝦饑餓養(yǎng)殖24 h，統(tǒng)計尾數(shù)并稱重。隨后每個水泥池隨機抽取9尾蝦，用一次性無菌注射器從蝦的頭胸甲后部刺入心臟，抽取血液，并置于2 mL Eppendorf管中于4℃、5 000 r/min離心10 min，取血清，-80℃凍存?zhèn)溆茫糜谘甯黜椛笜?biāo)測定。

分別計算各組的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)、存活率。血清各項生化指標(biāo)（葡萄糖、皮質(zhì)醇、溶菌酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、過氧化氫酶采用相關(guān)試劑盒進行測定，試劑盒均購自南京建成生物研究所。相關(guān)計算公式如下：

式中：W0和Wt分別為試驗初始和終末時蝦的均體質(zhì)量（鮮質(zhì)量g）；t為試驗天數(shù)（d）；F為每尾蝦平均攝食飼料質(zhì)量（風(fēng)干基礎(chǔ)）（g）；N0和Nt分別為試驗初始和終末時蝦的尾數(shù)（尾）。

表1 實驗基礎(chǔ)飼料配方%

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS19.0軟件進行相關(guān)性檢驗、方差分析和LSD多重比較，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 四種配合飼料對克氏原螯蝦生長性能的影響

從表2可見：投喂不同配合飼料對克氏原螯蝦的增重率、特定生長率和飼料系數(shù)均有顯著影響（P<0.05），對存活率無顯著影響（P>0.05）。其中投喂D4、D3、D2飼料組均能顯著提高克氏原螯蝦的增重率、特定生長率，降低飼料系數(shù)；D4組對生長性能的影響最大，D3組次之。

2.2 四種配合飼料對克氏原螯蝦非特異性免疫力的影響

由表3可以看出，各組間葡萄糖、皮質(zhì)醇和丙二醛水平均無統(tǒng)計學(xué)意義差異（P>0.05）；D4、D3組溶菌酶水平顯著高于D1組，D4組超氧化物歧化酶水平顯著高于D2、D1組，D4組過氧化氫酶水平顯著高于其他三組（P<0.05）；D1、D2、D3組之間超氧化物歧化酶和過氧化氫酶水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 四種配合飼料對克氏原螯蝦抗白斑綜合征病毒的影響

由圖1可見：感染W(wǎng)SSV 24 h后開始出現(xiàn)死亡。36 h時，各組間存活率無顯著差異（P>0.05）；48 h、60 h、72 h時，D4、D3、D2組存活率顯著高于D1組（P<0.05），D4、D3、D2組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05）；84 h時，D4組存活率顯著高于其他3組（P< 0.05），D1、D2、D3組之間存活率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

表2 四種配合飼料對克氏原螯蝦生長性能的影響

表3 四種配合飼料對克氏原螯蝦非特異性免疫力的影響

圖1 四種配合飼料對克氏原螯蝦抗白斑綜合征病毒的影響

3 討論

大蒜素是大蒜中的主要生物活性成分，含多種烯丙基有機硫化物。研究表明，其特殊強烈的蒜香氣味，對鯽魚、羅非魚以及中華鱉等水產(chǎn)動物具有很好的誘食作用，能提高其攝食量。同時，大蒜素中的三硫醚和二硫醚能透過病原菌的細(xì)胞膜進入細(xì)胞質(zhì)中，將所含琉基氧化為雙硫鍵，破壞病原菌正常的新陳代謝，從而有效的抑制和殺滅多種病原微生物。目前，國內(nèi)外學(xué)者對大蒜素在水產(chǎn)動物飼料上的應(yīng)用已有報道。聶乾忠發(fā)現(xiàn)在飼料中添加80 mg/kg大蒜素時可以促進草魚的生長[1]；胡石亮等在牛蛙飼料中添加100 mg/kg大蒜素的試驗組比對照組提高19.5%[2]；宋文華在對草魚的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加大蒜素能顯著提高草魚幼魚溶菌酶、超氧化物歧化酶和補體C3的活性[3]；曹丹等在暗紋東方鲀的飼料中添加100 mg/kg的大蒜素，極顯著地提高暗紋東方鲀脾臟中溶菌酶的活力[4]；蔡春芳等在銀鯽飼料中添加0.5%大蒜素時，表現(xiàn)出顯著的免疫增強作用[5]。本試驗中，在基礎(chǔ)飼料中添加1%的大蒜素，能顯著提高克氏原螯蝦幼蝦的增重率、特定生長率，降低餌料系數(shù)；在感染W(wǎng)SSV后，其存活率顯著高于基礎(chǔ)飼料組。與上述研究一致。

本試驗中，在添加1%大蒜素飼料的基礎(chǔ)上，再添加0.02%芽孢桿菌，能顯著提高克氏原螯蝦的增重率，降低飼料系數(shù)。這與國外學(xué)者在對斑節(jié)對蝦、羅氏沼蝦的研究結(jié)果一致[6-7]。芽孢桿菌對甲殼動物的促生長作用可能歸功于芽孢桿菌在腸道內(nèi)生長繁殖過程中能夠產(chǎn)生大量揮發(fā)性脂肪酸，降低腸道pH值，從而抑制有害微生物；同時腸道pH值降低又可以促進水產(chǎn)動物幼體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化，尤其是對蛋白質(zhì)的消化和吸收[8]。沈文英等[9]在研究中指出枯草芽孢桿菌表達的重組VP28通過提高對蝦機體非特異性免疫力，進而提高蝦體抗WSSV感染的作用。

烏賊膏因為自身具有濃烈的烏賊（魷魚）內(nèi)臟腥香味，而同樣常被用作水產(chǎn)動物的誘食劑，可以提高飼料的適口性和利用率；此外烏賊膏富含膽固醇類蛻殼刺激素以及二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）及維生素A和維生素D，能有效促進甲殼類動物蛻殼和生長。本試驗表明，在配合飼料中添加4%的烏賊膏，能顯著提高克氏原螯蝦的增重率和特定生長率，降低飼料系數(shù)。但是周萌等[10]研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加1%、2%烏賊膏對魚的增重率有一定程度的提高，但與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這可能是由于甲殼類動物與魚類不同的生理機能造成的。此外，本試驗發(fā)現(xiàn)烏賊膏組蝦的溶菌酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶水平要高于其他幾組，表明烏賊膏的添加可以提高蝦體的非特異性免疫力和抗氧化能力，從而提高其抗WSSV感染的能力。

[1]聶乾忠.大蒜素對草魚魚種階段生產(chǎn)性能及抗病力影響研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[2]胡石亮，陳學(xué)文，譚利群，等.大蒜素在牛蛙飼料中應(yīng)用效果的研究[J].飼料研究，2000（03）：32-33.

[3]宋文華，張濤，富麗靜，等.大蒜素、枸杞多糖對草魚血清非特異性免疫指標(biāo)的影響[J].河北漁業(yè)，2011（06）：12-18.

[4]曹丹，周洪琪.不同添加劑對暗紋東方鲀生長和脾臟溶菌酶活力的影響[J].飼料廣角，2002（11）：18-19.

[5]蔡春芳，宋學(xué)宏，潘興法，等.幾種抗病促生長劑對銀鯽生長和免疫力的影響[J].水利漁業(yè)，2002，22（2）：21-23.

[6]Boonthai T，Vuthiphandchai V，Nimrat S.Probiotic bacteria effects on growth and bacterial composition of black tiger shrimp（Penaeus monodon）[J].Aquaculture Nutrition，2011（17）:634-644.

[7]Keysami M A，Saad C R，Sijam K，et al.Effect of Bacillus subtilis on growth development and survival of larvae Macrobrachium rosenbergii（de Man）[J].Aquaculture Nutrition，2007（13）:131-136.

[8]Moriarty D.The role of microorganisms in aquaculture ponds[J].Aquaculture，1997（151）：333-349.

[9]沈文英，傅玲琳，李衛(wèi)芬.枯草芽孢桿菌表達的VP28對南美白對蝦免疫力和抗病毒感染的影響[J].水生生物學(xué)報，2012，36（2）：375-378.

[10]周萌，朱旺明，汪福保，等.飼料中添加烏賊膏和酵母膏對生魚生長性能和腸道健康的影響[J].飼料工業(yè)，2012（14）: 27-31.

The effects of four diets on the growth performance and immunity of red swamp crayfish Procambarus clarkia

Zhu Lin1，Wan Jinjuan1，Shen Meifang1，Zhao Muzi1，Sun Jianguo2，Zhu Xihe1，Wang Chonghua1
（1.Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu province，Nanjing 210017，China；2.Nanjing ShuaiFeng feed co.，LTD，Nanjing 211313，China)

An experiment was conducted to investigate the effects of four diets on growth performance and immunity of red swamp crayfish Procambarus clarkia.600 Procambarus clarkii[average（3.01±0.02）g in initial body weight]were randomly divided into 4 groups（D1、D2、D3、D4）with 3 replicates per group and 50 crayfishper replicate in experiment.After 60-d feeding，the growth performance，immune-related enzyme activities and survival rates after white spot syndrome virus（WSSV）infection were investigated.Compared with the control，the weight gain and specific growth rates were significantly improved in D4、D3、D2 group，while the feed conversion ratio was significantly lower（P<0.05）.The level of lysozyme in D4、D3 were significantly higher than D1，the level of superoxide dismutase in D4 were significantly higher than D2 and D1，the level of peroxidase in D4 were significantly higher than other groups（P<0.05）.However，there was no significant difference in survival rate，glucose，cortisol and malondialdehyde among four groups（P>0.05）.The challenge experiment with WSSV showed that compared with D1 the survival rates in D4、D3、D2 significantly increased in 48 h、60 h、72 h after the infection，moreover，the survival rate in D4 was significantly higher than D1、D2、D3（P<0.05）.In conclusion，the optimal diet was D4 for Procambarus clarkia.

Procambarus clarkia；four diets；growth performance；immunity

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.003

S963.7

A

1004-2091（2016）10-0012-05

2016-05-10）

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目CX（16）1017；江蘇省科技支撐計劃項目（農(nóng)業(yè)）項目（BE2013446）

朱凜（1975-），女，研究方向：水產(chǎn)動物飼料與營養(yǎng)學(xué).E-mail：w007945@163.com