褚茂兵，肖徐進，陳高峰，黃景選，郭安托

（蒼南縣水產(chǎn)研究所，浙江　蒼南　325802）

應用自由絲狀體培育法篩選壇紫菜良種

褚茂兵，肖徐進，陳高峰，黃景選，郭安托

（蒼南縣水產(chǎn)研究所，浙江蒼南325802）

壇紫菜人工養(yǎng)殖自20世紀70年代初引進浙江省蒼南縣以來，養(yǎng)殖技術到如今已有了根本性的變革，養(yǎng)殖面積也已大大擴展，但苗種培育方式卻一直沒有改進。種質(zhì)異化、退化嚴重，病害頻發(fā)，嚴重制約了蒼南縣壇紫菜產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展。近年來，我們應用自由絲狀體貝殼移植法對壇紫菜良種進行擴種和篩選試驗，取得了較好的效果?，F(xiàn)總結(jié)如下。

1　材料和方法

1.1種菜

A為沿浦本地養(yǎng)殖菜；B為平潭養(yǎng)殖菜；C為南麂野生菜；D為象山養(yǎng)殖菜。挑選成熟度好、健壯無病無爛、不附生雜藻的藻體，要求單株能剪取20 cm2有效葉片。

1.2海水

無工業(yè)污染的蒼南縣近岸海水。比重1.018～1.021，pH值7.9～8.1。海水經(jīng)沉淀過濾后，在培養(yǎng)用的三角燒瓶中煮沸，冷卻后添加適量營養(yǎng)液待用。

1.3培養(yǎng)容器

主要有500、1 000、2 000、3 000和5 000 mL的三角燒瓶。先把瓶子洗凈，再加需要量的培養(yǎng)海水作煮沸消毒處理，煮沸后瓶口馬上包扎雙層濾紙，然后冷卻待用。

1.4營養(yǎng)液

在1 000 mL淡水中溶解40 g硝酸鉀、40 g硝酸鈉、10 g磷酸二氫鉀、20 g乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）、0.8 g氯化鈣、2.5 g硫酸亞鐵、0.2 g硫酸錳，加熱溶化煮沸，冷卻后加入VB10.1g、VB120.25 mg。在棕色瓶中存放，一個月重配1次。每1 000 mL培養(yǎng)海水中滴加營養(yǎng)液1 mL，作為標準量。

2　試驗過程

2.1種菜的去污處理

上午把挑選的每樣種菜各3株洗凈，11：00—14：00日曬3 h，日曬溫度15～17℃，14：00—16：00進行無菌洗刷。然后，把經(jīng)此處理后藻體上富含果孢子囊部分的葉片剪取放入果孢子采集瓶中。

2.2果孢子采集

把經(jīng)除污處理的種菜，加入消毒海水，置于500 mL三角燒瓶里采集果孢子。每天多次搖動瓶子，務必使放散出的孢子不堆集，并在第3或4天以及第7天分兩次收集孢子水，收集時要刷干凈采集瓶的瓶底和瓶壁，然后計數(shù)水中孢子量，以此計算放散量，去掉每樣各一瓶放散量最少的。

2.3自由絲狀體的培養(yǎng)

2.3.1去污效果檢查階段（附壁培養(yǎng)），1月中旬到2月下旬以每瓶（1 000 mL三角燒瓶）投放果孢子50萬～100萬的量，進行分瓶培養(yǎng)，A、B、D各為8瓶，C為4瓶。這期間，培養(yǎng)海水中營養(yǎng)鹽含量為標準的1/4，水溫控制為15～20℃，光強1 000～2 000 lx，光照時間為24 h，每天搖瓶2次。快者4～5 h，慢者7～10 d，可以觀察到紅色絲狀絲出現(xiàn)在瓶底，并逐漸布滿瓶底，最后擴展到瓶壁，果孢子投放濃度越高出現(xiàn)時間越早。約20 d左右開始，會逐漸發(fā)現(xiàn)有雜藻污染的瓶子，至2月下旬結(jié)束此階段。

2.3.2擴大培養(yǎng)階段（懸浮培養(yǎng)）2月下旬到4月下旬，附壁培養(yǎng)階段結(jié)束后，去除有污染的瓶子，刷壁收集共得各樣自由絲狀體濕重（下同）為A 15 g、B 14 g、C 3 g、D 11 g。以每0.5 g（C樣）或1 g（A、B、D樣）濕重自由絲狀體加1 000 mL培養(yǎng)海水為比例進行擴大培養(yǎng)：第1個月每半月加一次標準營養(yǎng)液，第2個月每周加一次標準營養(yǎng)液，水溫控制在20℃，光強2 000 lx，光照時間24 h，每天搖瓶3～4次，每次100下，每半月更換培養(yǎng)海水50%。

2.4自由絲狀體的貝殼移植及培養(yǎng)

4月下旬，取4樣自由絲狀體各50 g，用切碎機切碎，裝入噴壺，加入育苗海水，充分攪勻后，均勻噴灑到池底的貝殼上。噴灑后蓋光48 h，再弱光培育7 d時間，防止藻段浮起。移植后約半個月時間可見苗，至7月上旬其生長發(fā)育程度已與傳統(tǒng)于2—3月采果孢子的貝殼絲狀體同步。8月上旬開始縮光培育（與大眾同樣），培育條件也相同。如此同傳統(tǒng)育苗法相比，可節(jié)省2個月（30%）貝殼管理時間，洗殼總次數(shù)也減少了30%。

2.5秋季采苗（采殼孢子）和海上養(yǎng)成

9月中旬（比海區(qū)大眾統(tǒng)一采苗時間遲一天）下午，取已完全成熟的貝殼絲狀體下海刺激，刺激時間為當日傍晚16：30至次日4：30。刺激完后，每樣貝殼各放一桶，分別加清潔海水50 L，并取貝殼（與試驗組同樣量）于一桶作對照，觀察發(fā)現(xiàn)7：00開始有殼孢子放散，9：00進入放散高峰期，尤以A、B為顯著，對照組水色無變化。10：30鏡檢孢子放散量，10×10倍下每視野孢子數(shù)：A為110，B為107，C為83，D為103，對照組為26。用染布法采殼孢子，每樣各采3行60張網(wǎng)簾（3 m×4 m），晾1小時掛入海區(qū)筏架。于10月上旬分苗完畢，每樣各一行分別養(yǎng)在高、中、低潮區(qū)。按照普通的方法進行養(yǎng)殖管理及收割。

3　試驗結(jié)果

3.1第一年試驗結(jié)果

3次收割各試驗組（另取各試驗組所在同排同時收割中產(chǎn)量較好的傳統(tǒng)養(yǎng)殖紫菜一行作對照組）總產(chǎn)量見表1。如此計算得：A增產(chǎn)（總產(chǎn)，下同）12.1%，B增產(chǎn)10.9%，C增產(chǎn)4.9%，D增產(chǎn)2.0%。通過第一年的自由絲狀體培育技術研究及應用于生產(chǎn)，初步選定由沿浦海區(qū)（A）和平潭海區(qū)（B）挑選的種菜具有養(yǎng)殖優(yōu)勢，次年將在這兩個品種的試驗筏架上挑選出個體健壯的菜種進行重復擴大驗證試驗，并著重探索降低育苗成本的技術方法。

3.2第二年進一步篩選結(jié)果

次年1月中旬，在各試驗筏架上分別選取優(yōu)良種菜各3株，進行果孢子采集和自由絲狀體擴大培育。4月下旬進行自由絲狀體貝殼移植，A、B各12 000只。并在3月上旬，用從A、B筏架上選取的種菜各10 kg進行傳統(tǒng)育苗法采苗（春季采苗，下稱A（傳統(tǒng)）、B（傳統(tǒng)），各采40×667 m2（4萬只貝殼）。9月中旬統(tǒng)一下海刺激，采殼孢子。觀察殼孢子放散量（每千只貝殼加海水10 L，10×10倍下每視野孢子數(shù)）：A為116，B為122，A（傳統(tǒng)）為24，B（傳統(tǒng)）為27，對照組為21。采得網(wǎng)簾：A、B各6行，A（傳統(tǒng)），B（傳統(tǒng)）各10行。

計算結(jié)果，A：新育苗法可增產(chǎn)12.5%，傳統(tǒng)育苗法可增產(chǎn)5.6%；B：新育苗法可增產(chǎn)11.7%，傳統(tǒng)育苗法可增產(chǎn)4.8%。從A及B的試驗數(shù)據(jù)中可見：同樣種菜來源，采用新育苗法，其增產(chǎn)效果更加明顯。

表1　收獲情況表

4　小結(jié)

據(jù)有關研究報告和筆者這幾年的試驗生產(chǎn)結(jié)果表明，通過自由絲狀體進行紫菜生產(chǎn)和通過傳統(tǒng)貝殼絲狀體進行紫菜生產(chǎn)相比，其效果是相同的，甚至更好。而自由絲狀體法是通過單株采苗、純種培育，這樣就能很容易鑒別出品種的性狀是否優(yōu)良，從而使選種育種工作更容易取得進展。

壇紫菜果孢子萌發(fā)溫度范圍為7～26℃，在這一范圍內(nèi)，溫度在低限時萌發(fā)速度雖然比較慢，但萌發(fā)率比較高，病死率較低；而溫度傾向高限時，則萌發(fā)快，萌發(fā)率在短期內(nèi)也比較高，但病死率增加。因此具備控溫控光條件的，為大規(guī)模生產(chǎn)性育苗著想，可以在11—12月份就進行果孢子采集，也可以把經(jīng)過養(yǎng)成證明為良種的自由絲狀體通過試驗室常規(guī)條件培育，連續(xù)為下年育苗用，這也是本育種法的優(yōu)勢之一。另外海水比重在1.020～1.025，pH值在8.0～8.2之間最好。

采用同樣的種菜，用該育苗方法能比傳統(tǒng)育苗法有較大程度增加產(chǎn)量的結(jié)果，再加上其種菜需求量極少，育苗時間短，管理成本也可降低30%左右。因此，該法具有較大的推廣應用價值。

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.11.016

（2015-09-14）