黃雪梅，趙詠梅，蒲澤晏，余恒勇

（1.遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧629000；2.重慶市黔江區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶400032）

血清 CA125、HE4及 MMP-9聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌早期診斷中的臨床價(jià)值研究

黃雪梅1，趙詠梅1，蒲澤晏1，余恒勇2

（1.遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧629000；2.重慶市黔江區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶400032）

目的 探討血清糖類抗原125（CA125）、人附睪分泌蛋白4（HE4）及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）三者聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌早期診斷中的價(jià)值。方法 選取2014年2月至2016年2月間我院收治的60例卵巢癌患者作為觀察組，并選取我院同一時(shí)期收治的45例良性卵巢腫瘤患者作為卵巢良性腫瘤組，以及45例健康志愿者作為健康對(duì)照組。采用電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）檢測(cè)三組的血清CA125水平，并采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)其血清HE4及MMP-9水平，并對(duì)比三組上述指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 觀察組血清CA125、HE4及MMP-9水平均顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組中不同分期患者的上述血清標(biāo)志物水平組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且觀察組上述各標(biāo)志物檢測(cè)的陽(yáng)性率均明顯高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；并且在卵巢癌的診斷中，血清CA125、HE4及MMP-9三者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為93.3%，明顯優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度63.3%、83.3%、76.7%，同時(shí)三者聯(lián)合檢測(cè)的特異度為96.7%明顯優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)的特異度74.4%、91.1%、81.1%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論單獨(dú)檢測(cè)患者血清CA125、HE4及MMP-9水平在卵巢癌的早期診斷中具有一定的價(jià)值，而三指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)明顯提高了檢測(cè)的靈敏度及特異度，在卵巢癌早期診斷中的價(jià)值更高。

糖類抗原125； 人附睪分泌蛋白4； 基質(zhì)金屬蛋白酶-9； 卵巢癌； 電化學(xué)發(fā)光法； 酶聯(lián)免疫法

卵巢癌作為女性生殖系統(tǒng)中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居女性腫瘤發(fā)病率的第三位，而死亡率居女性惡性腫瘤死亡率之首，且近年來(lái)的發(fā)病率不斷上漲，嚴(yán)重威脅廣大女性的生命健康安全［1］。相關(guān)研究統(tǒng)計(jì)顯示，在癌癥的早期及時(shí)給予患者手術(shù)或介入治療，其5年生存率可達(dá)90%，而在癌癥晚期因癌細(xì)胞已發(fā)生擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，患者的5年生存率低于30%［2］。此外，因處卵巢癌早期的患者臨床癥狀隱匿，70%左右的患者確診時(shí)已屬癌癥晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳手術(shù)及治療時(shí)機(jī)［3-4］。因而尋找一種有效的卵巢癌早期診斷手段已成為目前臨床關(guān)注的重點(diǎn)。本研究通過(guò)檢測(cè)卵巢癌患者、良性卵巢腫瘤患者與健康志愿者的血清CA125、HE4及MMP-9表達(dá)水平，探討CA125、HE4及MMP-9單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌早期診斷中的價(jià)值。

材料和方法

1 一般資料

入選我院于2014年2月至2016年2月間診治的卵巢癌患者60例作為觀察組，其中年齡在20～64歲，平均45.3±9.6歲；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期共19例，Ⅲ、Ⅳ期共41例；組織學(xué)分類：低分化腺癌6例，子宮內(nèi)膜樣癌10例，黏液性囊腺癌15例，漿液性囊腺癌29例。并將我院同時(shí)期收治的良性卵巢腫瘤患者45例當(dāng)作卵巢良性腫瘤組，其中年齡在19～65歲，平均46.2±10.3歲；組織學(xué)分類：卵巢纖維瘤3例，成熟畸胎瘤14例，黏液性囊腺瘤11例，漿液性囊腺瘤17例。上述兩組卵巢癌及良性卵巢腫瘤患者均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查進(jìn)行確診，且入選患者均為初發(fā)初治，無(wú)既往手術(shù)史；同時(shí)排除合并其他惡性腫瘤、全身性感染及嚴(yán)重心肝腎損傷患者。此外，另入選同期進(jìn)行體檢檢查合格的健康婦女45例作為健康對(duì)照組，年齡在21～66歲，平均47.5±10.1歲。同時(shí)其肝腎功能均正常、無(wú)心肺腎等重要器官疾病，同時(shí)婦科檢查無(wú)異常，無(wú)既往卵巢疾病史。上述三組入選者的年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間可比。同時(shí)該研究在患者知情且同意的前提下進(jìn)行。

2 方法

分別抽取三組入選者的清晨空腹靜脈血5mL，4℃低溫離心分離獲得其血清，-70℃凍存待測(cè)。其中血清CA125水平采用ECLIA法進(jìn)行檢測(cè)，相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)羅氏公司；而血清HE4及MMP-9水平采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒分別購(gòu)自瑞士康乃格公司及美國(guó)R&D公司，上述試驗(yàn)步驟均由專人嚴(yán)格按照試劑盒及相關(guān)儀器說(shuō)明書進(jìn)行。分別 以CA125＞35U/mL、HE4＞150pmol/L、MMP-9＞168ng/mL［5］為陽(yáng)性計(jì)算三組的陽(yáng)性率。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

研究數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料則采用中位數(shù)表示，采用t檢驗(yàn)或Fisher's精確檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 三組血清標(biāo)志物水平

觀察組患者的血清各標(biāo)志物水平均明顯高于良性對(duì)照組與健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí)卵巢良性腫瘤組CA125及MMP-9水平顯著高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而卵巢良性腫瘤組與健康對(duì)照組HE4水平組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1　三組血清CA125、HE4及MMP-9表達(dá)水平比較（±s）

表1　三組血清CA125、HE4及MMP-9表達(dá)水平比較（±s）

注：與卵巢良性腫瘤組相比，*P＜0.05；與健康對(duì)照組相比，#P＜0.05

組別例數(shù)CA125（U/mL）HE4（pmol/L）MMP-9（ng/mL）觀察組60292.74*#（156.49～428.99）195.72*#（132.89～258.55）204.63*#（138.62～270.64）卵巢良性腫瘤組4558.60#（40.13～77.07）27.15#（19.81～34.49）85.32#（50.49～120.15）健康對(duì)照組4514.39（7.87～20.91）25.56（18.65～32.47）41.05（21.53～60.57）

2 卵巢癌不同臨床分期患者血清標(biāo)志物水平

Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者血清CA125、HE4及MMP-9水平均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表。

表2　卵巢癌不同臨床分期患者血清CA125、HE4及MMP-9水平比較（±s）

表2　卵巢癌不同臨床分期患者血清CA125、HE4及MMP-9水平比較（±s）

注：與Ⅰ、Ⅱ期相比，*P＜0.05

TNM分期例數(shù)CA125（U/mL）HE4（pmol/L）MMP-9（ng/mL）Ⅲ、Ⅳ期41405.29*（221.68～588.9）241.04*（167.52～314.56）283.65*（198.51～368.79）Ⅰ、Ⅱ期19157.43（96.86～218.00）167.37（113.11～221.63）116.78（79.25～154.31）

3 三組血清標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率

觀察組患者CA125、HE4及MMP-9檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為63.3%、83.3%、76.7%；卵巢良性腫瘤組上述各指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為37.8%、11.1%、26.7%；健康對(duì)照組各指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為13.3%、6.7%、11.1%。觀察組患者CA125、HE4及MMP-9檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對(duì)照組檢測(cè)的陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3　三組血清標(biāo)志物CA125、HE4及MMP-9檢測(cè)的陽(yáng)性率比較［n（%）］

4 三種血清標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值

在卵巢癌的診斷中，CA125檢測(cè)的靈敏度、特異度分別為63.3%、74.4%；HE4檢測(cè)的靈敏度、特異度分別為83.3%、91.1%；MMP-9檢測(cè)的靈敏度、特異度分別為76.7%、81.1%。此外，分別通過(guò)并聯(lián)實(shí)驗(yàn)提升上述三種血清標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度，通過(guò)串聯(lián)實(shí)驗(yàn)提升聯(lián)合檢測(cè)特異度。即對(duì)觀察組患者血清CA125、HE4、MMP-9這三種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，患者任意一種標(biāo)志物檢測(cè)陽(yáng)性則視作聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性，進(jìn)而觀察組陽(yáng)性患者數(shù)除以觀察組患者總數(shù)乘以100%為聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度；而對(duì)良性對(duì)照組和健康對(duì)照組血清CA125、HE4、MMP-9這三種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，三種標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)出陽(yáng)性才視作聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性，進(jìn)而上述兩組檢測(cè)陰性人數(shù)除以兩組總?cè)藬?shù)乘以100%為聯(lián)合檢測(cè)的特異度。三指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度及特異度分別為93.3%、96.7%，相比于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)來(lái)說(shuō)均有所提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4　三種血清標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度與特異度比較（%）

討論

卵巢癌作為婦科最常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，具有癥狀隱匿，發(fā)展迅速，復(fù)發(fā)及死亡率高等特點(diǎn)，近年來(lái)其發(fā)病率逐年上升，而病死率已居女性惡性腫瘤病死率之首［6］。全球每年卵巢癌患者的發(fā)病人數(shù)約為20萬(wàn)例，而預(yù)計(jì)每年死亡患者人數(shù)達(dá)12萬(wàn)人左右［7］。導(dǎo)致卵巢癌患者高死亡率的原因主要在于患者未能在癌癥的早期得到及時(shí)有效的診治，絕大多數(shù)患者在確診時(shí)已屬癌癥晚期，從而錯(cuò)失了最佳的治療時(shí)機(jī)。因此找到一種可靠的卵巢癌診斷手段，能夠及早發(fā)現(xiàn)并對(duì)患者進(jìn)行及時(shí)的治療，從而提高其生存率，成為目前臨床研究的重點(diǎn)之一。

血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)由于其操作簡(jiǎn)單、創(chuàng)傷小、結(jié)果及時(shí)可靠，能夠較為準(zhǔn)確的反應(yīng)腫瘤的存在與否，因此在卵巢癌早期診斷方面發(fā)展迅速。CA125是一種最初提取于卵巢癌細(xì)胞系的抗原，屬于非特異性腫瘤標(biāo)志物，其在卵巢癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌等多種癌癥患者中的表達(dá)水平均異常增高，成為目前卵巢癌臨床診斷的常用腫瘤標(biāo)志物之一，但其存在著靈敏度不足及特異性低的缺陷［8］。HE4最早發(fā)現(xiàn)于附睪遠(yuǎn)端的上皮細(xì)胞中，屬于乳清酸性4-二硫化中心蛋白家族，最初被認(rèn)為是與精子成熟相關(guān)的蛋白酶抑制劑，而后發(fā)現(xiàn)其在正常的卵巢及人體組織中低表達(dá)或不表達(dá)，而在卵巢癌組織中大量表達(dá)［9］。此外，有研究表明，單一的HE4檢測(cè)在卵巢癌診斷中的靈敏度及特異性分別可達(dá)70%、95%左右，特別是在卵巢癌I期患者診斷中具有較高的靈敏度及特異度，因此在卵巢癌的早期診斷中具有極大的潛在價(jià)值［10］。MMP-9作為基質(zhì)金屬蛋白酶家族的成員之一，可以水解IV、V、VII、X型膠原蛋白、彈性蛋白等多種蛋白，有研究表明其與卵巢癌、胃癌、肺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤的發(fā)展及侵襲密切相關(guān)［11-12］。此外，隨著卵巢癌惡性程度的增加MMP-9表達(dá)水平也相應(yīng)的增加，同時(shí)其活性也會(huì)相應(yīng)增強(qiáng)，并有研究顯示其在卵巢癌的診斷中具有良好的應(yīng)用價(jià)值［7，13］。本研究通過(guò)檢測(cè)卵巢癌患者、良性卵巢腫瘤患者與健康志愿者的血清CA125、HE4及 MMP-9表達(dá)水平，探討CA125、HE4及MMP-9單獨(dú)及三者聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌早期診斷中的價(jià)值。

研究結(jié)果顯示，觀察組血清CA125、HE4及MMP-9水平均顯著低于卵巢良性腫瘤組與健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組中不同分期患者的血清CA125、HE4及MMP-9水平組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組上述各標(biāo)志物檢測(cè)的陽(yáng)性率均顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。該檢測(cè)結(jié)果與已有的研究結(jié)果［14-15］保持一致，均顯示出良好的梯度性。研究結(jié)果說(shuō)明，卵巢癌的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致患者血清CA125、HE4及MMP-9表達(dá)水平相應(yīng)的提高，并且癌癥分期越高的患者其血清標(biāo)志物水平也越高，因而說(shuō)明血清CA125、HE4及MMP-9檢測(cè)在卵巢癌的早期診斷中具有一定的價(jià)值。并且在卵巢癌的診斷中，血清 CA125、HE4及 MMP-9三者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為93.3%明顯優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度63.3%、83.3%、76.7%，同時(shí)三者聯(lián)合檢測(cè)的特異度為96.7%明顯優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)的特異度74.4%、91.1%、81.1%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明CA125、HE4及MMP-9三者聯(lián)合檢測(cè)能夠明顯提高診斷的靈敏度及特異度，增加卵巢癌的檢測(cè)率，即聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌早期診斷價(jià)值更高。

綜上所述，血清CA125、HE4及MMP-9在卵巢癌的早期診斷中均具有一定的價(jià)值，而CA125、HE4及MMP-9三者聯(lián)合檢測(cè)明顯提高了檢測(cè)的靈敏度及特異度，在卵巢癌的早期診斷中具有更高的臨床價(jià)值，值得推廣使用。

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（潘子昂編輯）

Clinical Value of Combined Detection of Serum CA125，HE4 and MMP-9 in Early Diagnosis of Ovarian Cancer

HUANG Xue-mei，ZHAO Yong-mei，PU Ze-yan，YU Heng-yong
（Department of Clinical Laboratory，Suining Central Hospital；Suining 629000，China）

Objective To investigate the value of combined detection of serum carbohydrate antigen 125（CA125），human epididymis secretory protein 4（HE4）and matrix metalloproteinase-9（MMP-9）in the early diagnosis of ovarian cancer.Methods We enrolled 60 cases of ovarian cancer patients admitted in our department between February 2014 to February 2016 as the observation group，and selected 45 cases of benign ovarian tumor patients as the disease control group，and 45 cases of healthy volunteers as a healthy control group.The serum CA125 levels of all three groups were detected by electrochemical luminescence（ECLIA），and the serum levels of HE4 and MMP-9 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The results of three indexes were compared among the three groups.Results The serum levels of CA125，HE4 and MMP-9 in observation group were significantly higher than those of the control group and the healthy control group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.The serum marker levels in observation group at different stages were statistically different（P＜0.05）.Each marker's positive rate in the observed group was significantly higher than that in two control groups，the differences were statistically significant（P＜0.05）.In the diagnosis of ovarian cancer，the sensitivity of combined detection of serum CA125，HE4 and MMP-9 was 93.3%which was higher than each marker detected individually，63.3%，83.3%，76.7%for CA125，HE4 and MMP-9 respectively.The specificity of combined detection was 96.7%，which was higher than each marker detected individually，74.4%，91.1%，81.1%for CA125，HE4 and MMP-9 respectively，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The separate detection of serum CA125，HE4 and MMP-9 levels has a certain value in the early diagnosis ofovarian cancer.The combined detection of three indexes can significantly improve the detection sensitivity and specificity，which provides a valuable tool in the early diagnosis of ovarian cancer.

CA125； HE4； MMP-9； Ovarian cancer； Electrochemical luminescence； Enzyme linked immunosorbent assay

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.09.017

2016-06-02；

2016-08-18

余恒勇。E-mail：717166765@qq.com