岑春藝 黃正學 李善登 等

摘要： 研究西番蓮（Passiflora coerulea L.）提取物對三七[Panax notoginseng （Burk.）F.H. Chen]黑斑?。ˋlternaria panax Whetz）、炭疽?。–olletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）菌的抑菌活性，為三七病害生物防治提供參考。采用病原菌生長速率法測定不同濃度新鮮西番蓮葉、莖、果提取物對三七黑斑病、炭疽病菌的抑制效果。結果表明，西番蓮水和乙醇提取物對供試菌有良好的抑制活性，抑菌活性與濃度呈正相關，對黑斑病抑制作用最明顯的是1 g/mL西番蓮葉的乙醇提取液，抑制率達40%；對炭疽病菌抑制作用最明顯的是0.5 g/mL西番蓮葉的水提取液，抑制率達61%。

關鍵詞：西番蓮（Passiflora coerulea L.）；提取物；黑斑病（Alternaria panax Whetz）；炭疽?。–olletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）；抑菌活性

中圖分類號：S432.4+4 文獻標識碼：A 文章編號： 0439-8114（2016）04-0912-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.04.024

The Antibacterial Activity of Passiflora coerulea Extracts on Alternaria panax and

Colletotrichum panacicola of Panax notoginseng

CEN Chun-yi1，HUANG Zheng-xue2，LI Shan-deng2，WEI Ji-guang1，LI Liang-bo1，HUANG Rong-shao1

（1.College of Agriculture，Guangxi University，Nanning 530005，China； 2.Debao County Bureau of Agriculture，Baise 533700，Guangxi，China）

Abstract： In order to provide references for Panax notoginseng pathogen biological control，the antimicrobial activities of passion fruit extracts on Alternaria panax Whetz and Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto were rearched. The antibacterial activity of extracts with different concentrations of fresh leaves， stems and fruits to A. panax Whetz and C. panacicola were measured respectively by mycelia growth rate method. The results showed that the water extraction and the ethanol extraction of passion fruit could inhibit A. panax and C. panacicola propagation. The higher concentration had the stronger antimicrobial activities. The ethanol extraction of the passion fruit leaf had the better inhibitory effect to A. panax by the concentration of 1 g/mL. The water extraction of the passion fruit leaf had the better inhibitory effect to C. panacicola by the concentration of 0.5 g/mL.

Key words： Passiflora coerulea L.； extracts； Alternaria panax Whetz； Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto； antibacterial activity

三七[Panax notoginseng （Burk.）F.H. Chen]為五加科人參屬植物，別名參三七、田七、三七人參、金不換、盤龍七等，具有散淤止血、消腫定痛的功效[1]，現(xiàn)代藥理學作用主要體現(xiàn)在對血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、腦血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、代謝、免疫調節(jié)的影響等[2]。國內外市場年需量8 000 t以上。三七喜冬暖夏涼、半陰和潮濕的生態(tài)環(huán)境，不耐嚴寒與酷熱，因生長環(huán)境的特殊性，適宜的種植區(qū)域狹窄，加上馴化栽培歷史較長，故易染多種病害。三七黑斑?。ˋltemaria panax Whetz）和炭疽?。–olletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）是廣西產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生、危害嚴重的兩種病害，其中三七黑斑病發(fā)病率20%～35%，嚴重時達90%以上[3]。三七炭疽病在溫暖濕潤季節(jié)發(fā)病嚴重[4]。目前，關于三七病害病原菌的生物學特性、發(fā)生規(guī)律、與環(huán)境因子的關系、化學防治等方面的研究較多[5-9]，但生物防治相關的報道較少。殺菌劑是目前常用的化防藥劑，在防治三七病害方面有一定效果，但增加農(nóng)藥使用次數(shù)和濃度，易使病害產(chǎn)生耐藥性，最終導致三七藥材農(nóng)藥殘留嚴重。因此尋求安全有效的防治方法是目前三七生產(chǎn)中急需解決的重要問題。在生產(chǎn)調查中發(fā)現(xiàn)，以西番蓮（Passiflora coerulea L.）作為遮陰材料，三七生長健壯，炭疽病、黑斑病等葉部病害較少發(fā)生。為此，本試驗以西番蓮植株鮮體為原料，探討西番蓮有效成分對三七黑斑病和炭疽病的抑制作用，為三七病害生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

主要儀器有KQ-250DE型數(shù)顯超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）、Laborota 4 000型旋轉蒸發(fā)儀（德國Heidolph儀器公司）、循環(huán)水式真空泵RE-52A型（鞏義市予華儀器公司）、BS110S型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）、2F-1f型臺式三用紫外線分析儀（上海光豪分析儀器有限公司）、LDZX-50FBS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）、DH27-9240A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）、LRH-400-G光照培養(yǎng)箱（韶關市泰宏醫(yī)療器械有限公司）。

試劑有無水乙醇（AR，成都市科龍化工試劑廠）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、滅菌水。

供試原料有西番蓮莖、葉片、果實，于2013年5月采自廣西百色市靖西縣武平鄉(xiāng)。

供試菌種有三七黑斑病病原菌人參鏈格孢、炭疽病原菌，由廣西大學農(nóng)學院植物病理實驗室提供。

1.2 方法

1.2.1 西番蓮提取物制備 取無病、無蟲害西番蓮植株和未成熟果實，用清水洗凈。鮮莖剪成4～5 cm長小段，鮮葉和果實剪成長2～3 cm、寬1 cm碎片，分別用8倍量水、乙醇室溫浸提1 h后超聲0.5 h（超聲功率為1 000 W，溫度40 ℃），然后用綢布與濾紙分別過濾一次，得到濾液；濾渣再分別用6倍量與4倍量水、乙醇重復以上提取步驟各一次，分別得到濾液，合并3次濾液；減壓濃縮，干燥，使用紫外線殺菌后，用無菌水定容至濃度為5 g/mL西番蓮水、乙醇提取物供試樣。

1.2.2 西番蓮提取物抑菌試驗 分別取西番蓮水、乙醇提取物供試樣20、10、5 mL，倒入尚未凝結的80、90、95 mL已滅菌的PDA培養(yǎng)基中，混勻，制得含不同濃度提取物的PDA培養(yǎng)基（供試樣濃度分別為1.00、0.50、0.25 g/mL）。將配好的PDA培養(yǎng)基倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿15 mL，待培養(yǎng)基冷卻后，用直徑0.5 cm的打孔器（高溫滅菌）在預先培養(yǎng)的病原菌菌落邊緣打取菌餅，用接種針將菌餅轉接到培養(yǎng)皿的中央，每培養(yǎng)皿接種一塊。以未加任何試劑的PDA培養(yǎng)基為空白對照。將接種后的培養(yǎng)皿置于生化培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)，至第5天時取出，用十字交叉法測量菌落直徑，結果取3次重復試驗的平均值，得到不同濃度提取物對供試菌的抑菌效果。

1.3 統(tǒng)計學處理

用Williamson提出的敏感指數(shù)RI作為衡量指標，RI={當T≥C時，1-C/T；當T0時表示促進作用；RI<0時為抑制作用；RI=0時表示沒有作用。RI絕對值代表作用強度的大小。用SPSS17.0軟件進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 西番蓮水提取液對三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用

由表1可以看出，西番蓮的水提液對三七黑斑病菌、炭疽病菌均有抑制作用，抑制作用隨提取液濃度增高而增強。根據(jù)RI值，西番蓮葉和莖的水提液對炭疽病菌的抑制作用大于對黑斑病菌的抑制作用，但果的水提液對黑斑病菌抑制作用大于對炭疽病菌。葉的水提取液對炭疽病菌抑制作用最明顯，在3個濃度下的抑制率均達到了50%以上，但對黑斑病菌作用不明顯，在0.5 g/mL和0.25 g/mL濃度下均沒有作用。果的水提液在0.5 g/mL和1 g/mL濃度下對黑斑病菌抑制作用均達到20%以上，但對炭疽病菌沒有抑制作用。1 g/mL西番蓮水提液對三七黑斑病抑制作用由強到弱依次為莖、果、葉，0.5 g/mL和0.25 g/mL濃度下抑制作用由強到弱依次為果、莖、葉；3個濃度下對三七炭疽病抑制由強到弱的順序均為葉、莖、果。

由顯著性分析可知，西番蓮莖、果水提液對三七黑斑病菌在1 g/mL和0.5 g/mL濃度時抑制作用與對照相比差異極顯著，0.25 g/mL濃度時與對照差異不顯著，說明西番蓮莖和果的水提液在高濃度時對三七黑斑病菌抑制作用明顯，低濃度時作用不明顯；葉的水提液在供試的3個濃度下差異均不顯著，說明葉的水提液對三七黑斑病菌沒有抑制作用。西番蓮莖、葉水提液對三七炭疽病菌的抑制作用在供試的3個濃度下與對照相比差異極顯著，說明西番蓮莖、葉的水提液對三七炭疽病菌有明顯的抑制作用。葉的0.25、0.5、1 g/mL水提取液對炭疽病菌抑制率分別為57%、61%、59%，且3個濃度之間差異不顯著，推測西番蓮葉的水提液在比0.25 g/mL更低的濃度下即對三七炭疽病菌有極強的抑制作用。西番蓮果實的水提液與對照相比差異不顯著，說明果的水提液對三七炭疽病沒有抑制作用。

2.2 西番蓮乙醇提取液對三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用

由表2可以看出，西番蓮乙醇提取液對三七黑斑病菌、炭疽病菌有抑制作用，抑制作用隨濃度的增高而增強。相同濃度下，葉的乙醇提取液對兩種病原菌的抑制作用最明顯。在相同提取物相同濃度下，西番蓮乙醇提取液對炭疽病菌的抑制作用大于對黑斑病菌的抑制作用，其中葉的提取液對炭疽病菌抑制率在1 g/mL和0.5 g/mL濃度下均達到50%以上。果的乙醇提取液對兩種病原菌的抑制作用均不明顯，敏感指數(shù)均在-7%至7%范圍，出現(xiàn)了正值，可根據(jù)差異性結果，與對照相比，分析是否具有明顯促進效果。在相同濃度下，西番蓮乙醇提液對兩種病原菌的抑制作用由強到弱依次為葉、莖、果。

由顯著性分析可知，西番蓮葉和莖的乙醇提取液在供試的3個濃度下對三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用與對照相比差異極顯著，說明西番蓮葉和莖的乙醇提取液對這兩種病原菌都具有明顯的抑制效果。葉的乙醇提取液對炭疽病菌3個濃度之間差異不顯著，與對照相比差異極顯著，說明西番蓮葉的乙醇提取液在濃度達到0.25 g/mL時，即對三七炭疽病菌有極強抑制作用，濃度從0.25 g/mL增加到1 g/mL，抑制率增強不明顯。果的乙醇提取液對兩種病原菌的抑制作用與對照相比差異不顯著，說明西番蓮果的乙醇提取液對三七黑斑病菌和炭疽病菌無抑制作用。

3 小結與討論

本試驗結果表明，西番蓮葉、莖、果的水提液和乙醇提液均對三七黑斑病菌、炭疽病菌有不同程度的抑制作用，其中對黑斑病菌抑制作用最明顯的是1 g/mL的西番蓮葉的乙醇提取液，對炭疽病菌抑制作用最明顯的是0.5 g/mL的西番蓮葉的水提取液。利用生物多樣性持續(xù)控制農(nóng)作物病害是近年來國內外研究熱點，并取得了一些成效[10，11]。

三七屬陰生植物，大田種植時需搭建遮陰棚，西番蓮屬陽生藤本常綠攀援植物，大田種植時也需搭建棚架。本試驗表明，西番蓮植株的提取物對三七黑斑病菌、炭疽病菌具有一定的抑制作用，研究結果為創(chuàng)建三七生態(tài)種植新模式、減少三七藥材農(nóng)藥殘留、提高三七藥材質量提供新思路。

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