白國(guó)輝， 張曉麗， 曲 琳， 樊樹理， 王文瑞

(1.包頭醫(yī)學(xué)院2013級(jí)碩士研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.內(nèi)蒙古疾病預(yù)防控制中心)

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肉蓯蓉急性毒性和90 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)毒性研究

白國(guó)輝1， 張曉麗1， 曲 琳2， 樊樹理2， 王文瑞2

(1.包頭醫(yī)學(xué)院2013級(jí)碩士研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.內(nèi)蒙古疾病預(yù)防控制中心)

目的：觀察肉蓯蓉急性毒性和較長(zhǎng)時(shí)間飼喂大鼠的亞慢性毒性反應(yīng)。方法：利用拌飼法90 d喂養(yǎng)，觀察動(dòng)物進(jìn)食量和食物利用率、血液、生化、臟器系數(shù)和組織病理學(xué)指標(biāo)的結(jié)果，和急性毒性MTD法對(duì)肉蓯蓉進(jìn)行毒性研究。結(jié)果：急性毒性試驗(yàn)MTD>15 000 mg/kg，屬無毒級(jí)；肉蓯蓉90 d飼喂對(duì)大鼠臟器系數(shù)影響，高實(shí)驗(yàn)組兩性別鼠肝、脾、腎的濕重均高于對(duì)照組(P<0.01)，中劑量雄鼠肝、脾、腎，雌鼠脾臟的濕重均高于對(duì)照組(P<0.01)，中高實(shí)驗(yàn)組雄鼠睪丸重均高于對(duì)照組；其他指標(biāo)未見異常，與對(duì)照組比較均無差異(P>0.05)。結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)室條件下未觀察到肉蓯蓉有明顯的毒性作用。

肉蓯蓉；急性毒性；90 d喂養(yǎng)；地域差異

肉蓯蓉(Cistanche Deserticola)是列當(dāng)科肉蓯蓉屬多年生寄生草本植物，中國(guó)藥典規(guī)定正品為肉蓯蓉干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖[1]，在我國(guó)主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、青海等地[2]。肉蓯蓉作為醫(yī)藥、保健食品、添加成分被廣泛關(guān)注，但在使用安全性、使用劑量限值等方面國(guó)內(nèi)報(bào)道少見，尤其作為肉蓯蓉主產(chǎn)區(qū)的內(nèi)蒙古自治區(qū)肉蓯蓉的研究更為少見。本文對(duì)內(nèi)蒙古自治區(qū)產(chǎn)肉蓯蓉的急性毒性和亞慢性毒性進(jìn)行研究，為肉蓯蓉應(yīng)用安全劑量提供參考，為肉蓯蓉的靶器官以及安全毒性提供毒理學(xué)依據(jù)，并對(duì)不同地區(qū)肉蓯蓉的安全性研究提供導(dǎo)向。

1 材料與方法

1.1 受試物 內(nèi)蒙古鴻茅藥業(yè)有限責(zé)任公司提供的同年生肉蓯蓉，棕褐色、干燥植物根莖部碎片。推薦攝入量3 g/(人·d)。

1.2 動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境 由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供的清潔級(jí)健康昆明種小鼠和Wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(京)2012-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房為屏障系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室溫度20～24 ℃，濕度40 %～60 %。

1.3 儀器和試劑 Beckman AU480生化分析儀、sysmex血液分析儀、電子天平、生物顯微鏡；生化試劑盒由長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司提供；Giemsa染液、伊紅染液。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 急性毒性實(shí)驗(yàn) 采用最大耐受劑量法。選昆明種健康小鼠20只，雌雄各半，體重18～20 g、平均體重19.3 g。受試劑量為15 g/kg，經(jīng)口灌胃量為0.2 mL/10 g體重，3次/d給予受試物,間隔4～6 h。灌胃前動(dòng)物禁食16 h，自由飲水，灌胃后正常飲食。觀察、記錄2周內(nèi)小鼠的中毒表現(xiàn)及死亡情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量小鼠體重后脫頸椎處死并進(jìn)行大體解剖觀察。

1.4.2 90 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 清潔級(jí)Wistar大鼠80只，體重60～80 g、平均體重88.5 g，隨機(jī)分為4組，雌雄各半。兩性別分別設(shè)低、中、高(0.25 g/kg、2.5 g/kg、5.0 g/kg)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組及1個(gè)對(duì)照組，將肉蓯蓉粉碎后拌入飼料，使動(dòng)物自然進(jìn)食。動(dòng)物單籠飼養(yǎng)、自由飲水進(jìn)食。觀察動(dòng)物活動(dòng)和生長(zhǎng)情況，每周測(cè)剩食、體重并計(jì)算食物利用率。試驗(yàn)中期、末期分別取尾靜脈血，進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。90 d時(shí)禁食并股動(dòng)脈采血，測(cè)定血清中總蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇、甘油三酯、葡萄糖。頸椎脫臼處死動(dòng)物后解剖并檢查，稱量心、肝、脾、腎、胃和十二指腸、卵巢或睪丸濕重，計(jì)算臟/體比值。對(duì)高實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的心、肝、腎、脾、胃和十二指腸、睪丸或卵巢用甲醛固定，制成石蠟切片，Giesma染色后顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn) 急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察期內(nèi)，未見小鼠異常，大體解剖未見臟器病變。MTD>15 000 mg/kg，按急性毒性分級(jí)屬無毒級(jí)。

2.2 90 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 試驗(yàn)期間動(dòng)物健康狀況良好，各組大鼠均未出現(xiàn)中毒癥狀，也未見動(dòng)物死亡。

2.2.1 體重和食物利用率比較 各實(shí)驗(yàn)組兩性別大鼠的初始體重、1～12周的體重以及第90 d體重、禁食后體重與對(duì)照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組食物利用率比較見表1。

表1 肉蓯蓉對(duì)大鼠食物利用率的影響±s)

a為與對(duì)照組比較P<0.05

2.2.2 血液學(xué)及生化檢測(cè) 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物試驗(yàn)中期、末期的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組雌雄大鼠試驗(yàn)?zāi)┢谘笜?biāo)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2.3 濕重及臟體比 90 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)低劑量組雌、雄大鼠等心、肝、腎、脾、胃和十二指腸、睪丸或卵巢的濕重及臟體比與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，中劑量組、高劑量組部分臟器濕重、臟體比與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

2.2.4 組織及病理學(xué)檢查 處死動(dòng)物大體解剖，肉眼未見異常改變。組織學(xué)檢查均未見異常。

3 討論

近年來，對(duì)肉蓯蓉的研究已取得了很大進(jìn)展，除有傳統(tǒng)的壯陽(yáng)效用外，肉蓯蓉在調(diào)節(jié)神經(jīng)和內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫、抗衰老和抗氧化、通便和降壓護(hù)肝以及提高記憶力等方面功效顯著[3]。本研究表明，肉蓯蓉的急性毒性屬無毒級(jí)。食物利用率的差異集中在試驗(yàn)初期和試驗(yàn)中期，不存在劑量反應(yīng)關(guān)系；臟器濕重比較發(fā)現(xiàn)，中、高劑量組中部分臟器臟體比高于對(duì)照組，且濃度越大涉及臟器越多，可能與肉蓯蓉的促細(xì)胞分化作用、肝細(xì)胞的保護(hù)以及纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和睪丸酮促分泌作用有關(guān)[4]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)劑量下肉蓯蓉不引起血細(xì)胞構(gòu)成、形態(tài)和血液生化的改變。

肉蓯蓉分布范圍較廣，地理環(huán)境差異大，因地質(zhì)元素分布不同，肉蓯蓉中元素積累、分布和毒性等方面可能存在著很大的差異[5]。肉蓯蓉因其復(fù)雜成分，在應(yīng)用中可引起不良反應(yīng)。

表2 肉蓯蓉對(duì)大鼠臟器濕重和臟/體比的影響±s)

a為與對(duì)照組比較P<0.05，b為與對(duì)照組比較P<0.01

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:90.

[2] 雷載權(quán).中藥學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001:292.

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[5] 杜友,盛晉華,崔旭盛.不同產(chǎn)地管花肉蓯蓉礦質(zhì)元素分析[J].光譜學(xué)與光譜分析,2012,10(10):2824-2827.

Study onacute toxicity and 90 days' feedingsubchronic toxicity of Cistanche deserticola

BAI Guohui1, ZHANG Xiaoli1, QU Lin2,FAN Shuli2, WANG Wenrui2

(1.Postgraduate2013,BaotouMedicalCollege,Baotou014060,China;2.InnerMongoliaCenterforDiseaseControlandPrevention,Hohhot010031,China)

Objective:To observe the acute toxicity andlong time feeding subchronic toxicity of Cistanche deserticola. Methods: After90-day mixed feeding,the animals`indexes of food consumption , food utilization rate, blood, biochemistry, organ coefficients and tissue pathology were observed, with acute toxicity of Cistanche deserticola studied by using MTD method.Results:Acute toxicity test MTD>15 000 mg/kg , belongs to the non-toxic level; effects of Cistanche deserticola on the organ coefficient of rats and gender in the high dose group in liver, spleen and kidney wet weights were higher than those of the control group (P<0.01); liver, spleen and kidney of male rats and spleen wet weight of female rats in the middle dose group were higher than those of the control group (P<0.01); male rats' testisweights in the high and middle dose group were higher than those of the control group; other indicators showed no abnormalities (P>0.05). Conclusion:No obvious toxicity is observed in experimental conditions.

Cistanche deserticola；Acute toxicity ；90 days' feeding ；Regional differences

王文瑞

2016-02-23)