貢 嘎　益西措姆　扎西拉姆　德吉卓嘎

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝　860000）

藏雞大腸桿菌分離鑒定及耐藥性研究

貢 嘎益西措姆扎西拉姆德吉卓嘎

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

本文從西藏林芝某農(nóng)戶家采集藏雞新鮮無污染糞便樣品50份，組織樣品10份，分離鑒定細(xì)菌后，采用WHO推薦的K-B紙片法測定常用抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，60份樣品中分離鑒定出10株藏雞大腸桿菌。這些菌株對16種抗菌藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥。其中對氨芐西林和頭孢噻吩耐藥率最高，達(dá)100%，對頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢呋辛、妥布霉素、鏈霉素和哌拉西啉耐藥率較高，達(dá)80%，對頭孢曲松、頭孢唑啉耐藥率為70%，對阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐藥率為60%，對慶大霉素耐藥率為50%，但耐藥菌株對頭孢西丁和頭孢他啶敏感性較高，達(dá)90%。由此可見，藏雞大腸桿菌分離株對常用抗菌藥存在著一定的耐藥現(xiàn)象。

藏雞大腸桿菌分離鑒定耐藥性

雞大腸桿菌病是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的重要細(xì)菌性傳染病，規(guī)模養(yǎng)雞場細(xì)菌性疫病的發(fā)生以大腸桿菌為主。該病血清型多樣、抗原性復(fù)雜、臨床癥狀和病理變化多變，不同品種、不同日齡的雞群均可發(fā)病，輕者可以引起雞群生產(chǎn)性能下降，重者導(dǎo)致發(fā)病雞大批死亡，尤其對雛雞危害更大。臨床上經(jīng)常使用大量的抗菌藥物，導(dǎo)致不斷出現(xiàn)耐藥大腸桿菌株，從而也不斷擴(kuò)大了耐藥譜[1- 4］。

2015年9月，西藏林芝某農(nóng)戶藏雞群發(fā)生了嚴(yán)重腹瀉并伴有血便現(xiàn)象，嚴(yán)重者為死亡。其中1日齡經(jīng)用抗生素治療后效果不佳。本文從該農(nóng)戶腹瀉雞群疑似患雞大腸桿菌病的新鮮無污染腹瀉物中分離大腸桿菌，對其進(jìn)行鑒定，以期了解藏雞大腸桿菌耐藥現(xiàn)象，進(jìn)而為藏雞大腸桿菌防控策略的制定提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

從西藏林芝采集藏雞新鮮無污染糞便（血便），裝入自封袋，編號，待檢。

1.2主要試劑

（1）普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅亞甲藍(lán)平板均由本實(shí)驗(yàn)室制備[5］。

（2）藥敏紙片

藥敏紙片：共16種，購自杭州濱和生物試劑有限公司。

1.3細(xì)菌的分離與鑒定

1.3.1分離培養(yǎng)

無菌取出待檢糞樣，接種在普通平板上，在37℃培養(yǎng)24h，觀察生長情況，并進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.3.2鑒定

挑取普通平板上典型菌落分別接種在麥康凱瓊脂平板及伊紅亞甲藍(lán)平板上畫線，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

1.3.3藥敏試驗(yàn)

無菌操作選取分離細(xì)菌純培養(yǎng)物致密畫線于普通營養(yǎng)瓊脂平板上，將臨床常用的16種抗生素藥敏紙片貼于瓊脂平板表面中央處，倒置平皿，放于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后觀察結(jié)果。

1.4抑菌結(jié)果的判定

參照 NCCLS（2013）公布的標(biāo)準(zhǔn)以敏感（Susceptible）、中介（Intermediate）、耐藥（Resistant）三種形式對抑菌圈大小做出判定，個(gè)別抑菌圈大小參考相關(guān)文獻(xiàn)做出判定，具體判定標(biāo)準(zhǔn)見表 1。

2　結(jié)果與分析

2.1大腸桿菌分離鑒定

（1）在普通平板上生長出圓形、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落。經(jīng)革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性兩端鈍圓的直桿菌。

（2）在麥康凱瓊脂平板及伊紅亞甲藍(lán)平板上分別形成紅色菌落和帶金屬閃光的菌落。

表1 藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

2.2大腸桿菌體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)選用16種抗菌藥物，結(jié)果顯示，藏雞耐藥大腸桿菌對同類藥物之間存在交又耐藥性。

2.3藏雞耐藥大腸桿菌的耐藥率

2.3.1藏雞大腸桿菌的耐藥情況

來自西藏林芝地區(qū)10個(gè)牦牛耐藥大腸桿菌對 16 種抗菌藥物有不同程度耐藥性。見表2，圖1。

圖1　雞大腸桿菌對16種抗菌藥的耐藥率（%）

表2 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

2.3.210株耐藥菌株的耐藥譜

10 株藏雞耐藥大腸桿菌對 16 種抗菌藥物有不同程度的耐藥性，且多重耐藥現(xiàn)象較重，最少為 6 種，最多為 15種。11耐菌株所占總菌株比例最大為 40%；其次是 6耐為 20%；10耐、12耐、14耐、15耐菌株均占總菌株的 10%。見圖 1-2。

圖2 耐藥性大腸桿菌的各耐藥譜占耐藥菌的比例

表3 耐藥大腸桿菌的多重耐藥率

3　討論

已有研究表明，我國多重耐藥現(xiàn)象普遍嚴(yán)重[ 5］。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)細(xì)菌分離后在麥康凱、伊紅美蘭培養(yǎng)基上純培養(yǎng)以及細(xì)菌革蘭氏染色鏡檢后確定為10株大腸桿菌。對所分離的10株藏雞大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測，結(jié)果顯示16種抗菌藥物的耐藥率較高，作者認(rèn)為，由于西藏養(yǎng)殖戶對細(xì)菌耐藥性的認(rèn)識不夠清楚，因此在食品動(dòng)物養(yǎng)殖中普遍存在濫用抗生素以及嚴(yán)重缺乏聯(lián)合、交叉、輪換等用藥方式來減少細(xì)菌的耐藥率的意識。

本實(shí)驗(yàn)采用WHO 推薦的 K-B紙片法檢測10株大腸桿菌對16種抗菌藥物的敏感性。其中對氨芐西林和頭孢噻吩耐藥率最高，達(dá)100%，對頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢呋辛、妥布霉素、鏈霉素和哌拉西啉耐藥率較高，達(dá)80%，對頭孢曲松、頭孢唑啉耐藥率為70%，對阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐藥率為60%，對慶大霉素耐藥率為50%，但耐藥菌株對頭孢西叮和頭孢他啶敏感性較高，達(dá)90%。

獸醫(yī)臨床用藥應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，有針對性地使用，而且必須經(jīng)常更換抗菌藥種類，以免產(chǎn)生新的耐藥菌株，同時(shí)較好地控制畜禽大腸桿菌病，只有這樣才能有針對性的選用敏感藥物。

試驗(yàn)結(jié)果顯示藏雞大腸桿菌對常用抗菌藥物耐藥率較高，耐藥譜較廣。所以對病原菌進(jìn)行耐藥性檢測勢在必行。因此建議在獸醫(yī)臨床上應(yīng)選停用耐藥性極強(qiáng)的藥物，應(yīng)選擇敏感性較高的藥物來針對性治療藏雞大腸桿菌病。

[1]張曉紅.雞大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J］.中國動(dòng)物檢疫，2013，30（1）：65-66.

[2]張遂平，楊建奮，邵艷華.雞大腸桿菌分離及藥敏試驗(yàn)研究[J］.中國畜牧業(yè)，2013（2）：62-63.

[3]劉娣琴，楊紅梅，賈志江.雞大腸桿菌病的防治誤區(qū)與對策[J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2012，31（5）：89-89.

[4]雷崇良.雞沙門菌、大腸桿菌和傳支混合感染的診治[J］.中國家禽，2004，26（6）：24.

[5]呂殿紅，曾振靈，陳杖榴，等.大腸埃希菌多重耐藥性的形成機(jī)制[J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（7）：76-81.

貢嘎（1983-），男，藏族，講師，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)碩士，研究方向:人畜共患病。

2015年西藏自治區(qū)大學(xué)生創(chuàng)新性項(xiàng)目