丁孟建，楊曉偉，黃坤英，謝正鵬，王自強(qiáng)，李隆耀

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌縣河包鎮(zhèn)人民政府，重慶 榮昌 402460）

四川廣安某豬場香豬疾病的診斷

丁孟建1，楊曉偉1，黃坤英2，謝正鵬1，王自強(qiáng)1，李隆耀1

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌縣河包鎮(zhèn)人民政府，重慶 榮昌 402460）

2014年7月和2014年11月，廣安某香豬養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的香豬兩次發(fā)病。第1次為種母香豬發(fā)病，表現(xiàn)精神沉郁，呼吸急促，鼻孔流出大量泡沫樣分泌物，皮膚發(fā)紺，體溫40℃～42℃之間，母豬懷孕后期流產(chǎn)，近1個(gè)月內(nèi)死亡23頭種母豬，流產(chǎn)8胎。使用頭孢噻呋、林可霉素、大觀霉素、磺胺間甲氧嘧啶、雙黃連注射液等治療無效；第2次為仔豬發(fā)病，表現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉、糞便呈黃白色，扎堆，嚴(yán)重者食欲廢絕，大多在3～5 d內(nèi)消瘦、脫水死亡，使用氧氟沙星、乙酰甲喹、氟苯尼考、維生素B12、肌苷、ATP等藥物治療無效，近40 d內(nèi)共死亡3～30日齡仔豬65頭?，F(xiàn)對(duì)該病診斷報(bào)告如下。

1　診斷材料與方法

1.1診斷材料檢測試劑：RNA/DNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、2×MasterMix為上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品。

圖3　分子診斷結(jié)果

實(shí)驗(yàn)儀器：Mastercycler PCR儀，購自Eppendorf公司；凝膠分析成像系統(tǒng)，購自上海天呈科技有限公司。

引物：豬圓環(huán)病毒病、豬瘟、高致病性藍(lán)耳病、流行性腹瀉、偽狂犬病病毒特異性引物由西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系傳染病教研室惠贈(zèng)。

1.2診斷方法

1.2.1臨床檢查采用視診、問診、聽診等檢測方法對(duì)發(fā)病的香豬進(jìn)行診斷，主要檢查精神、皮膚、糞便、可視黏膜、呼吸音、體溫、采食量等。

1.2.2剖檢及病料采集對(duì)病死豬進(jìn)行剖檢，主要觀察心、肝、脾、腎、肺、氣管、支氣管及消化系統(tǒng)。無菌操作，采集病死豬脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、肺臟、大腦和腹股溝淋巴組織，4℃保存?zhèn)錂z。

1.2.3實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)按試劑盒說明書分別提取脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、肺臟、大腦組織總RNA和腹股溝淋巴結(jié)總DVA，RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。依次應(yīng)用豬瘟、流行性腹瀉、高致病性藍(lán)耳病、偽狂犬病、圓環(huán)病毒特異性引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，目的片段大小為豬瘟343 bp、流行性腹瀉462 bp、高致病性藍(lán)耳病317 bp、偽狂犬病271 bp、圓環(huán)病毒病483 bp。反應(yīng)體系：模板cDNA/DNA 1 μL、PCR Forward Primer 0.5 μL、PCR Reverse Primer 0.5 μL、2×Master Mix 12.5 μL、ddH2O up to 25 μL；反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min或3 min、94℃變性30 s或1 min、55℃退火30 s或1 min、72℃延伸30 s或1 min、35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)12 g/L瓊脂糖凝膠電泳后于凝膠分析成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果。

2　診斷結(jié)果

圖4　分子診斷結(jié)果

2.12014年7月送檢的病/死母豬臨床癥狀、剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果送檢的病死母豬腹部、四肢皮膚發(fā)紺，鼻腔流出大量泡沫樣分泌物（見中插彩版圖1），對(duì)送檢的3頭病死母豬進(jìn)行剖檢，可見腎皮質(zhì)和髓質(zhì)針尖狀出血（見中插彩版圖1），心肌出血，扁桃體形成假膜、壞死（見中插彩版圖1），肋骨弓內(nèi)側(cè)出血，膀胱黏膜層針尖狀出血（見中插彩版圖2），腸道漿膜層、黏膜層出血，腹股溝淋巴結(jié)腫大、出血。分子診斷豬瘟、圓環(huán)病毒病、高致病性藍(lán)耳病陽性，偽狂犬病陰性（圖3）。

2.22014年11月送檢的仔豬剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)送檢的病死仔豬剖檢，可見腸管充氣、內(nèi)有大量水樣糞便，膽囊腫大。分子診斷豬瘟、偽狂犬病、高致病性藍(lán)耳病陰性，流行性腹瀉陽性（圖4）。

3　討論

香豬作為一種特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，具有肉味香、體型小、易早熟、乳豬無腥味、抗逆性強(qiáng)、耐粗飼、易于管理、近交繁殖不退化等特點(diǎn)而被作為高檔肉質(zhì)品類動(dòng)物飼養(yǎng)，養(yǎng)殖戶發(fā)家致富的途徑之一，在貴州、廣西、云南、四川、西藏、甘肅等地區(qū)養(yǎng)殖較多，常見品種主要有巴馬香豬、藏香豬、環(huán)江香豬等，養(yǎng)殖戶為擴(kuò)大養(yǎng)殖量也由以往的放養(yǎng)、散養(yǎng)轉(zhuǎn)為規(guī)模養(yǎng)殖，養(yǎng)殖密度大、飼養(yǎng)管理跟不上、疾病預(yù)防工作不到位造成死亡率上升。該養(yǎng)殖場就是未重視飼養(yǎng)管理和疫苗免疫預(yù)防工作（僅接種口蹄疫疫苗），導(dǎo)致母豬豬瘟、圓環(huán)病毒病、高致病性藍(lán)耳病混合感染，仔豬流行性腹瀉疾病的發(fā)生，帶來較大損失。鑒于此，筆者建議香豬養(yǎng)殖應(yīng)循序漸進(jìn)，量力而行，做到適度規(guī)模養(yǎng)殖，可持續(xù)發(fā)展。對(duì)該養(yǎng)殖場，要特別重視疾病預(yù)防、控制工作，做好豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、圓環(huán)病毒病、流行性腹瀉、口蹄疫、偽狂犬病、乙腦等疾病疫苗免疫接種工作。

S855.1+12

B

0529-6005（2016）09-0045-01

2015-06-21

西南大學(xué)榮昌校區(qū)2015年教改項(xiàng)目

丁孟建（1982-），男，實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：dinmaojian@163.com